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1、九种载体的多克隆位点及质粒图谱（pLLP-OmA、LP-SI、pMBP、MP、pc-KS、ET-GST、pET-rx、pETHis、ET-DsA)这九种载体的多克隆位点均为GA GCA GA TC AC GCT G AC(TAA） CAT CAT am coRI NeI Hi Hs His AT CAT A GCTT His Hs His Hind我们建议您扩增基因5 端选BamHI或BglII，端选NheI或XaI或pI，同步3端不要带终结密码子，注意与GGATCC（ly Ser)体现框架对的，载体用hIBamHI双酶切。BmHI和BglII为同裂酶,hI、XbaI和SI为同裂酶。如您目的基
2、因无法满足上述规定，犹如步具有BamHI和BlII，5端可选择EcoRI,但须注意与体现框架GAATTC（Glu h）对齐。如您目的基因同步具有I、NheI和SI,3端可选择EcRI。如果您的目的基因已带有终结密码子,同样可以进行克隆体现，只是注意有些体现载体是在C端带个His。CR引物设计时BmI和oRI位点的5端保护碱基有2至个G即可,而Xb、Nh和e位点端保护碱基须在5个左右才容易被酶切割。（一)pLLp-OmpASze： 5K多克隆位点：Ppp lc operaor RBS CGAGGCGCAA ATG AA AAG ACA GCT ATCG Met ys Ly Tr Ala Ile
3、Ala OmA signalTCA GTG CA CG A GGT TC T AC GTC GCT G T GGA TGCA Il A Val Ala Le la Gl h A Thr Val AlaGl Aa BmI GA TTC GC CT AG A AT CAT CAT A CAT TACT E NheI 6Hista HindIIIamH ERI NheI Hs- toHndIPlp la operto RBSAGOmAsiMC 基因克隆体现功能区序列如下,经DN双向测序验证ctacttttcaagaatccgatgaacatttttctaattttttatctaaacatgatctt
4、cttgagacgaaaaaaagtgtcccacaaaatattcacataaaatttggtatacttgtaagctacatggagatactcatctagcagagaggctttactttctcggctataatgtgtgaatgtagcgatacattcacaaggaaacgcataccatgataatacgctctgaaagggcgcaaatgaaactatcgcgatgctggcatggggttcgctaccgtcgccggcggatccgcaatcacgctaccacatcatctaattgttatccggctggcacgacggagcaagttcgacgttcaggtgcta
5、agtgccatctctaacagtgacactggctataaacgcaagtaatagtacctggaaggaaaaggccatgtgccatttttgctgcgtaccgactcgtcaggtaactattccttctggttaccatcgcgctgactctactgaggcatgtcggagttgctcactcagaaaccggatacccgcccacgataaagcttatcgacta载体其他部分序列见eeban Locus SK3121 (plasmid pIN-III-om1)(二）pLLpSTe： .5kb多克隆住点：Plpp la operatr RGAGAGTATACA A
6、TG AA A AC ATC GA TTCCTC et Ls ys As Ie Ala heLu ST sgalCTG GCA TCTTG TTT GTTTC TCTACC ACC AAC GCTTAGT GG TCC Lul Se Mt PheValPhe Se le la Tr Asn AlTr Ala BammHICAA TTC GC GT GC AC CAT CACAT CAT CATA CTTNheI 6Hitag HdIIIBamHIco Nhe Hi- top HndIIPlp lacoertor ATGIsigal peptidMCS基因克隆体现功能区序列如下,经DNA双向测序
7、验证ccacttatctaagagatcgaaaatctgttttcctcaattttttatctaaacccagcgtgtgcttcttagagacaaataagtgcttcaaaaaatattctcaaataaaaattgtgtaatactttgctacatggaattacaatgctaagaggcttacacttgctccggctcgtaaatggtgaatttgagcggataacattcacacagaaagttgcatgatacggttacgaactcaaatatttttacttaaggagactatgaaagaatgcatctcctggatatttttttcttatcgctacac
8、gtcctggaccgcagaattcaagcacaatcactcataagcttagatccggctgagcaagacgtgacgcatgcgtcgcgttcagctctatacgcagctcgcacagcgttgacacatcactaatacccattaatgtgaggaaaatggcgcacattgtaatttttttgtcccgttaccgctatggcacggtaataccccgccttctctgactctactgagggattctgtgcgggaggtcatgccgaaaccggatacctgccgacgacagtttatcgcta载体其他部分序列见eebak Locu ASAK3
9、1 (plamid pI-II-ompA1）TII signa peptid见eneank ocu HSTI_ECLI (p22542) (三）pM-ctr size: 67kPta lac operaor 分泌型mto indin proteinAA AC AAC AA AAC AA AACAT Thrombi ct sitAAC AACCTG T ATAT ACT ACT AG AATAT CCGGT GG T GCA AAsn Tyr Po Ar mH EcRITTC AGC T AGC CACAT CAT AT CCAT AA GTT NI 6His-tg HinImHI EcRI N
10、heI6Hi- stop dIta lapeaor分泌型MBPthrombin cut site MC 基因克隆体现功能区序列如下,经DNA双向测序验证Gaccatggaaaacccagaaaggtgaaaatccgaactccgcgttcctttctatccgtcgatcgtacaacgcgcagggtcaactgcataagccctgaaagacgcaactaattcgagcgaacaaccactaacaatacaacaccggtatcgatactatggactccgctggatccgaattcggctgccccatcatcatatctaagtt HindII载体其他部分序列见pal-p2Malt binding prten(E.col)编码氨基酸序列见GebanMB MW=42KD （四)pMBP-cVector siz: 6.6kbPta lac operator 胞内ltose binding prtein AAC AA AC AC AA C ACAAT Throin cut siAAC AAC TG GGATC GAT ATCTGAG AA TCG CGT GGA TC G GA
