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1、自来水菌落计数陈敏、吴丹、王耀、贺晓霞【实验目的】1学习自来水的取样方法，测定生活饮用水的菌落总数。2掌握营养琼脂的配制方法。3. 学会使用高压蒸汽灭菌器。4. 掌握菌落总数的测定方法，建立无菌操作意识。【实验原理】菌落总数是指1ml水样在普通营养琼脂培养基中，经37C24h培养后，所生长的细菌 菌落的总数。菌落总数主要作为判定水质被污染程度的标志之一。我国规定生活饮用水卫生标准为 lml水中的茵落总数不超过100。【实验器材】牛肉膏、蛋白胨、Nacl，试管，无菌水（约300ml） ，1mo1/LNaOH, lmol/LHCL, 培 养皿（13个），PH试纸（5.5-9.0）,无菌三角瓶，灭菌
2、枪头（1000ul枪头），放大镜， 酒精灯【实验步骤】培养基的配制：LB培养基200ml： 2g胰蛋白胨+1g酵母浸提物+2gNaCl+200ml水（液体）+2g琼脂调节培养基的PH：用PH试纸测培养基的PH,然后调节至7.6培养基的灭菌：0.1KP、121C、20分钟1、取样：先将自来水龙头用火焰灼烧3分钟灭菌，再开放水龙头，让水流5分钟后，以无菌三角瓶接取25ml左右。2、稀释：用无菌移液管从水样中取1ml,以无菌操作方式移入盛有9ml无菌水的试管中，做成10倍稀释液；换用一支无菌移液管，从10倍稀释液中取1ml,放入另一支含有9ml无菌水的试管中，做成100倍稀释液，依次递增稀释至100
3、0倍。3、倾注接种：取无菌平皿一套，以无菌移液管取1ml不稀释液注入其中，再倾入约15ml50C 的普通琼脂培养基，轻轻做平面旋摇。如此，每稀释度做三个平板。取一个平板注入无菌水 作为对照。4、培养：琼脂凝固后，将平板倒置于37C恒温培养箱中培养24小时。5、计数。【实验结果】对照菌落数:培养皿口 口号号菌落数（个）稀释倍数倍数01010010001号2号3号取平均值，计算自来水中细菌密度。并分析是否符合国家标准。菌落计数方法：操作方法：培养到时间后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时用放大镜检查, 以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算处原始样 品
4、中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。计数时应选取菌落数在30300之间的平板（SN标准要求为25250个菌落），若有二 个稀释度均在30300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2 取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接 近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，则应视为 检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告 的依据当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个 菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每 一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半,而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。
