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1、石蜡切片制备根本步骤 一、准备工作一洗涤实验所需器皿：玻璃器皿的清洗 1、 用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷 2、 将器皿在自来水下冲洗干净 3、 将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干 注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过13次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内1224小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗13次 烘干备用。 二配制： 硫酸洗液的配制 清洁液洗液的配制： 成分 强酸液 次强酸液 弱酸液 浓硫酸ml 1000 200 100 重铬酸钾mg 63 120 100 蒸馏水 ml 200 200 1000 重铬酸钾 1200g 蒸馏水 2000ml 将
2、2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌 三载玻片与盖玻片的处理 1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时 2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍 3. 95%100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用 注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。二、常用液体的配制 一缓冲溶液： 1磷酸盐缓冲液 A液：0.1mol/L磷酸二氢钠 B液：0.1mol/L磷酸氢二钠 A液与B液按比例混合调整到所需的PH值3：7PH7.0 2枸椽酸缓冲溶液 A液：0.1mol/L枸椽酸 B液：0.1mol/L枸椽酸钠 A液与B液按比例混合调整到所需的P
3、H值6.2：42.8PH6.2 二固定剂： 1甲醛：10%甲醛福尔马林 100ml蒸馏水 900ml 注：实际甲醛含量只有3.64.0%但习惯上都将其视为10%。 210中性福尔马林钙固定液 甲醛液 10ml 蒸馏水 90ml 加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀12cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。 34%多聚甲醛： 8%多聚甲醛多聚甲醛 8g 蒸馏水 100ml 加温至60左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。 1N NaOH lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量 氧化钠(NaOH )；分子量4000
4、5，当量价1 1N Na0H的配制方法为：m40005140005g。取40005gNaOH溶解于1L蒸馏水中4%多聚甲醛 8%多聚甲醛 50ml 0.1M磷酸盐缓冲液 50ml PH7.2 先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.24Bouin液： 苦味酸饱和水溶液 75ml 3640福尔马林液 25ml 冰醋酸 5m1 5改进Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液 45ml 95%酒精 45ml 3640福尔马林液 5ml 冰醋酸 5m16Carnoy液： 冰醋酸 10 m1 氯仿 30 m1 无水乙醇 60 m1 以上三者临用前混合，预冷至4后使
5、用。24小时后固定液失效。 三染色液 1Harris苏木精液 A液： 苏木精 1g 无水酒精 10ml B液： 铵矾或钾矾 20g 蒸馏水 200ml 氧化汞 0.5ml 冰醋酸 8ml 将矾溶于水，加热溶解B液，稍冷后将苏木精酒精液A液混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量参加，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期12个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即
6、用。 2Mayer苏木精掖 苏木精 1g 钾矾或铵矾 50g 碘酸钠 0.2g 蒸馏水 1000ml 水合氯醛 50g 枸橼酸 1g 将苏木精，钾矾及碘酸钠依次参加水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再参加水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间510分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。 3Hasnsen甲矾苏木精的配制 A液：苏木精 1g 无水乙醇 10ml B液：钾矾 20g 蒸馏水 200ml C液：高锰酸钾 1g 蒸馏水 16m
7、l 三液分别溶化后，将A液倒入B液，再参加C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化。 4伊红 0.51%水溶液或酒精溶液。 1水溶性伊红 伊红 510g 蒸馏水 1000ml 冰醋酸 10滴 先将水溶性伊红参加蒸馏水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，再加冰醋酸。 2醇溶性伊红 伊红 510g 70%90%酒精 1000ml 冰醋酸 10滴 四其它 1麻醉剂： 24%戊巴比妥钠，1ml/kg体重45mg/kg。 2各级浓度酒精的配制 75%；
8、85%；95%；100%酒精。75%和85%酒精用95%酒精配制；取75ml95%酒精，加水至95ml，即为75%酒精 3盐酸洒精 多用于多种染色过程中的分色，如苏木精染色后分色。配法是在100ml的70酒精内加0.51ml的浓盐酸(Hcl)。用盐酸酒精分色后要经自来水充分冲洗组织切片，去除所含的酸再作其他处理。 4碘酒 取碘5g，溶于95酒精80ml，再参加20ml蒸溜水即成 5生理盐水 以氯化纳0.850.90g溶于100m1蒸馏水配成的生理盐水适用哺乳动物石蜡切片制备根本步骤 之二 三、取材，固定一 实验动物的抓取及固定 1小白鼠、大白鼠的抓取及固定方法 要点：1动作要轻缓；2不要突然袭
9、击；3如发现动物的毛发竖起来时，最好停一会后再抓；4将四肢翻开，固定在木板或方形蜡板上。 2实验家兔的抓取及固定方法 要点：1随时抚摩其头部；2防止被其脚爪抓伤；3根据实验要求选择固定方法。 3豚鼠的抓取及固定方法 要点：先用一只手扣住豚鼠背部，然后抓紧两耳间头颈部的皮肤，用另一只手托起臀部送到动物固定台上。 二 实验动物的编号、标记、分组和被毛去除方法 1编号和标记方法 1染色法 标记溶液：3%5%苦味酸 黄色 2%硝酸银 咖啡色涂后光照10分钟 0.5%中性红或品红 红色 龙胆紫 紫色 编号原那么：先左后右，从前到后 左前脚为1，左侧腹为2，左后腿为3，头顶为4，腰背部为5，尾基为6，右前
10、脚为7，右侧腹为8，右后腿为9。超过10可用不同的染色的标记液，一种染色为个位，另一种为十位数。 2挂牌法 3耳孔法 一般来说，小型动物适宜用耳孔法和染色法，中型动物适用于挂牌法。 2实验动物的随机分组方法 动物实验时，常常需要将选择好的实验动物，按研究需要分成假设干个组，分组时为了防止人为因素的影响，常应用随机数字表进行完全随机化的分组。 3实验动物被毛去除方法 剪毛法 拔毛法 剃毛法 脱毛法：系用化学脱毛剂将实验动物被毛脱去，适用于无菌手术野的准备以及观察动物皮肤血液循环和病理变化。方法：将需脱毛部位的被毛先用弯头剪刀剪去，尽量剪短，勿剪破皮肤。然后用温水将该部位润湿，再用纱布包扎棉球的小
11、棒蘸脱毛剂，在需脱毛部位涂一层，经23min后，用温水洗去该部位脱下的毛，自然晾干备用，切勿用纱布去擦，以免损伤皮肤。 脱毛剂配方： 1硫化钠3g 肥皂粉1g 淀粉7 g 加水适量调成糊状 2硫化钠8g 溶于100ml水中 3硫化钠8g 淀粉7 g 糖4 g 甘油5 g 硼砂1 g 加水75ml 三 实验动物处死 处死动物的方法很多，无论是采用哪种方法，都要尽力防止使动物长时间陷于痛苦和濒于死亡状态。热爱生命，珍爱动物。 1空气栓塞致死法 要点：1常用于大的动物如：兔、猫、狗和猴等；2用50100ml注射器一只；3此方法迅速、方便，但各脏器淤血明显。 2麻醉后处死法 注：采用此方法，取材后一定
12、要确定动物是否已死亡，最好再行断颈。 1吸入麻醉法要点：1适用于较小的动物小白鼠、大白鼠、豚鼠和兔等；2用乙醚浸泡过的脱脂棉；3时间大约12分钟；4注意防火 2注射麻醉法要点：1适用范围较广；2注射方式可采用静脉、腹腔、皮下和肌内注射，最常用的是腹腔注射；3注射致死量一般视动物大小而定。 3脑、脊破坏法 要点：1常用于蛙类；2用金属针经枕骨大孔进入，破坏大脑和脊髓。 4断头处死法 要点：1常用于小动物；2用剪刀剪断颈椎；3如果没有特殊要求，最好不要使头和躯干别离。 5断椎法 要点：1常用于大白鼠和小白鼠；2一手固定头部，一手拽住实验动物的尾部，轻轻一拉扯断其颈椎，使其脱位，椎管内急性损伤瘫痪或死亡后取材；3此方法处死动物组织结构保存较好。 四 实验动物解剖 解剖步骤 1实验动物被麻醉或处死后，将其；固定在动物解剖台上，用纱布蘸取生理盐水湿润被毛； 2从下颌至耻骨联合沿正中线切开皮肤； 3翻开腹腔：沿肋骨下缘腹正中，用镊子提起腹壁切开腹壁肌肉，至耻骨联合，从肋骨下端向脊柱方向，将两侧腹壁剪开，充分暴露腹腔内脏器； 4翻开胸腔：用剪刀沿肋骨的肋软骨和骨的连接处由下向上剪开，不要剪断锁骨，剪时应尽量贴着胸内壁，并注意不要剪断胸骨两侧的大血管。然后将肋弓提起，暴露腹腔内脏器。 五 取材取材一定要迅速，应在动物处死后立即进行解剖
