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1、盐卤虫生长和发育指标在毒性检测中的应用:以 Cr6+、Hg2+、Pb2+和 Zn2+为例董少杰，杨军，郑晓市，周文礼*(1.天津农学院水产科学系，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津300384)摘 要：研究了 Cr6+、Hg2+、Pb2+和 Zn2+四种重金属离子对盐卤虫生长和发育的影响。结果表明：四种重 金属离子对卤虫生长和发育均可产生显著或极显著的影响，但不同离子或离子的不同浓度对卤虫生长和发 育产生影响的时间不同。四种离子中，除了 0.04mg/L Cr6+试验组在72h和9mg/L Pb2+试验组在24h分别对 卤虫的生长和发育表现出了极显著的抑制作用外，其它离子在试验所设定的浓度内
2、均对卤虫的生长和发育 有显著的促进作用。利用卤虫生长和发育指标可以对浓度较低的重金属离子的毒性进行检验。关键词：卤虫；毒性检测；生长；发育The growth and development of Artemia saline applied in testing toxicity:A case of Ci6+, Hg2+, Pb2+ and Zn2+Dong Shaojie, Yang Jun, Zheng Xiaoshi, Zhou Wenli*(1. Department of Fishery Science, Tianjin Agricultural College, Key Labo
3、ratory of Aqua- ecology and Aquaculture of Tianjin,Tianjin 300384, China)Abstract: Effects of Hg 2+, Cr6+, Zn2+ and Pb 2+ on the condition of Artemia saline growth and development were studied. The results showed that effects of 4 kinds of heavy metal ions on the condition of A. saline growth and de
4、velopment were remarkable (P0.05) or high-remarkable (P0.01) but action time were difference. All 4 kinds of ions obviously promoted the condition of A. saline growth and development in set concentrations except that 0.04mg/L Cr6+ group offered inhibition of A. saline growth at seventy-second hour a
5、nd 9mg/L Pb2+ group offered inhibition of A. saline development at twenty-fourth hour. The condition of A. saline growth and development could be used to test toxicity of low concentration heavy metal ions.Key words: Artemia Salina; Toxicity Testing; Growth; Development卤虫无节幼体为无选择性的滤食性生物，其呼吸器官位于胸肢的外叶
6、上，无鳃盖覆盖直 接裸露，生活习性和生理结构决定其易受毒物攻击，常被用于环境污染物的毒性评价和生态 毒理学的研究，已被海洋石油勘探开发污染物的生物毒性检验方法(GB 18420.2-2001) 列为标准试验生物1-2试验生物的死亡率是生物毒性试验方法中常用的观测指标，但在污 染物浓度较低的情况下具有一定的局限性。海水环境中痕量及微量重金属元素是影响生物生长和发育的因素之一。各种金属元素在 生物体内都有一定的限量，在生理浓度范围内的金属离子可加速生物体的新陈代谢，促进其基金项目：山东省博士后创新基金(200802040)；天津农学院科学发展基金(2009D05) 通讯作者简介：生殖、生长，但稍微
7、过量则会对生物产生毒性效应3。本试验通过研究四种重金属离子对盐 卤虫mia saline）生长和发育的影响，探讨运用试验生物的生长和发育指标检测污染物 毒性的可行性，以期为海洋污染物的生物毒性评价提供更多可行的观测指标。1材料与方法1.1试验材料盐卤虫休眠卵，以下简称卤虫卵，为商品卵。毒性试验前2 4h孵化卤虫卵，选取24h之 内孵化的卤虫作为试验材料。试验用海水由蒸馏水和海水晶配置而成，盐度30%。，用NaHCO3和0.lmol/L的HCI调节 pH至8.00.5。将KCr O、HgCl、Pb（NO3）,和ZnSO用纯水配成储备液，使用时用海水稀释至适当的 匕匕 /匕匕浓度。1.2试验方法各
8、离子均设置9个不同浓度的试验组和1个空白组，每个试验组设置3个平行组，各平行 组中均加入100只卤虫，试验液体积250 mL。卤虫在光照培养箱中培养，温度28，盐度30%。用盐度及重金属离子浓度与试验组相 同的海水配置酵母溶液，分别于培养48h和72h后投喂1次。试验期间不换水。1.3试验观察分别于24 h，48 h，72 h及96 h后取样，自每个平行组中取10只卤虫，酒精固定。显微 镜观测每只卤虫的体长，并参照廖承义的方法囹，观察每只卤虫的发育龄期，记录平均值。1.4数据处理与分析使用SPSS17.0软件对所得数据进行分析，采用单因素方差分析和Dunnett检验对体长数 据进行差异显著性分
9、析和多重比较，对发育龄期数据进行卡方检验，P 0.05被认为是差异 显著，P 0.01被认为是差异极显著。与对照组无显著性差异的最高浓度被视为无可见影响 浓度（No-observed effect concentration， NOEC）。2结果与分析2.1 Cr6+对卤虫生长和发育的影响2.1.1 Cr6+对卤虫生长的影响Cr6+对卤虫生长的影响见表1。单因素方差分析结果表明，不同浓度的Cr6+在24 h、48 h、 72h和96 h内对卤虫的生长均有极显著的影响（P0.28mg/L、0.2mg/L、0.04mg/L和0.24mg /L，24h72h期间NOEC值逐渐降低，至96h后NOEC
10、值升高至0.24mg/L。48h时0.24mg/L试 验组卤虫体长显著长于对照组（P0.05 ），96h时0.28mg/L试验组卤虫体长极显著长于对照 组（P0.01），而72h时0.04mg/L试验组卤虫体长极显著小于对照组（P0.01 ）。表1C”+对卤虫生长的影响（mm）试验分组/mg.L-1体长24h48h72h96h对照组2.8733+0.06193.6733+0.07164.3200+0.06924.4172+0.07860.042.9033+0.07653.6567+0.09543.8600+0.1123*4.3733+0.12080.082.8867+0.08383.7100+
11、0.10084.2000+0.11724.5933+0.08290.122.7867+0.09113.8267+0.07474.2133+0.12054.4700+0.10160.162.7233+0.09323.8067+0.06624.0800+0.07864.5567+0.08030.22.6100+0.05683.4900+0.07844.1267+0.06214.4300+0.08070.242.9367+0.06004.0200+0.0837*4.1133+0.10814.2967+0.08090.282.9233+0.06503.9667+0.07904.5200+0.09455
12、.1733+0.0758*注“ * ”表示与对照组差异显著（p0.05） ,“* ”表示与对照组差异极显著（p0.01）。以下各表相同。2.3.2 Cr6+对卤虫发育的影响Cr6+对卤虫发育的影响结果见表2。卡方分析结果表明，Cr6+在48h和96h对卤虫发育有 极显著的影响（尸0.28mg/L。48h和96h的NOEC值均为0.12mg/L, 试验组在48h时处于四龄期的比例高于对照组，在96h时处于五龄期的比例高于对照组。表2Ce对卤虫发育的影响处于不同龄期卤虫个体的比例试验分组/mg.L-124h48h72h96h对照组0:19:11:0:00:0:21:9:00:0:4:26:00:0
13、:3:19:110.041:12:17:0:00:0:16:11:00:3:8:19:00:1:3:20:60.080:14:16:0:00:0:17:11:00:1:7:22:00:0:2:18:100.122:12:16:0:00:0:13:16:00:1:6:24:00:1:1:15:130.163:15:12:0:00:0:10:18:0*0:0:8:22:00:0:4:6:20*0.20:24:6:0:00:0:21:8:00:0:8:22:00:1:1:18:100.240:16:14:0:00:0:8:22:0*0:1:12:17:00:0:3:13:140.280:13:17:
14、0:00:0:10:20:0*0:0:3:27:00:0:0:0:30*注：表中数据代表处于不同龄期的卤虫比例，由左向右依次为一龄至五龄。以下各表相同。2.2 Hg2+对卤虫生长和发育的影响2.2.1 Hg2+对卤虫生长的影响Hg2+对卤虫生长的影响见表3。单因素方差分析结果表明，不同浓度的Hg2+对24 h、48 h、 72h和96 h卤虫的生长均有显著或极显著的影响。多重比较结果表明，Hg2+对卤虫生长在24h 的NOEC值为0.5mg/L，0.5mg/L试验组卤虫体长显著长于对照组（P0.05）。在48h、72h和96h的NOE C值均为1.0mg/L, 1.5mg/L试验组卤虫体长在4
15、8h和96h时，极显著长于对照组（P0.01），在72h时显著长于对照组（尸0.05）。表3Hg2+对卤虫生长的影响（mm）试验分组/mg.L-1体长24h48h72h96h对照组2.3333+0.07972.9833+0.05573.3333+0.05153.4433+0.05610.52.5900+0.0543*3.1667+0.07623.2500+0.06733.4433+0.067212.4300+0.06143.2333+0.06843.4800+0.08733.6333+0.06751.52.4367+0.04853.4333+0.0835*3.5933+0.0848*3.7500+0.0693
