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1、人白细胞介素-10 （IL-10 ）酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人 白细胞介素-10（IL-10），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用 途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-10（ IL-10 ）的测定。工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素-10 （IL-10）的水平。向预先包被了人白细胞介素-10（ IL-10）单克隆抗体的酶标孔中加入白 细胞介素-10（ IL-10 ），温育；洗涤后，加入 HRP标记过的白细胞介素-10（ IL-10 ）抗体。 再经过温育和
2、洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B,产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素-10（ IL-10 ）的浓度呈正相关。试剂盒组成1标准品(400ng/L )7显色剂A液6ml2标准品稀释液3ml8显色剂B液6ml3酶标包被板12 孔X 8 条9终止液6ml4酶标试剂6ml10说明书1份530倍浓缩洗涤液20ml11圭寸板膜2张6样品稀释液6ml12密封袋1个需要而未提供的试剂和器材1. 37 C恒温箱。2. 标准规格酶标仪。3. 精密移液器及一次性吸头4. 蒸馏水，5. 一次性试管6. 吸水纸注意事项1. 从2-8 C取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡
3、至少 30分钟。酶标 包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先 用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以 总稀释倍数（x nx 5）。4. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准5. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用7. 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几
4、层吸水纸，酶标板朝下用力 拍几次；将稀释后的洗涤液至少注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP活性。2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若 不能马上进行试验，可将标本放于-20 C保存，但应避免反复冻融操作程序1.标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：200ng/L（5号标准 品）120卩l的原倍标准品加入120卩l的标准品稀 释液100 ng/L（4号标准 品）
5、120卩l的5号标准品加入120卩l的标准品稀 释液50ng/ L（3号标准 品）120卩l的4号标准品加入120卩l的标准品稀 释液25ng/ L（2号标准 品）120卩l的3号标准品加入120卩l的标准品稀 释液L（1号标准 品）120卩l的2号标准品加入120卩l的标准品稀 释液2. 分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同）、标 准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50卩l ;在酶 标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40卩l，然后再加待测样品10卩l （样品最终 稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37C温育30分钟。3. 弃去液体，甩干，
6、每孔加满稀释后洗涤液，振荡 30秒，甩去洗涤液，用吸 水纸拍干。如此重复5次，拍干。4. 每孔加入酶标试剂50卩l，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37E温育30分钟。5. 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡 30秒，甩去洗涤液，用吸 水纸拍干。如此重复5次，拍干。6. 每孔先加入显色剂A50卩l，再加入显色剂B50卩l，轻轻震荡混匀，37C避 光显色10分钟.7. 取出酶标板，每孔加终止液 50卩l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。8. 测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（ODfi）。测 定应在加终止液后15分钟以内进行。9. 根据标准品的浓度及对应的 OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据 样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。操作程序总结准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品,37 r反应30分钟XZ洗板5次，加入酶标试剂，37 r反应30分钟7洗板5】次，加入显色液AB，37 r显色10分钟加入终止液315分钟之内读OD值检测范围：5n g/L 250ng/L。规格：96T/ 盒保存：2-8 r有效期：6 个月（2-8 r）。
