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1、第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生课标解读重点难点1.联系遗传工程的含义，说出基因工程的主要内容。2.结合“工具酶作用示意图”说出限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用。3.结合“质粒分子结构示意图”明确质粒的本质及特性。1. DNA重组技术所需3种基本工具的作用。(重点) 2. 基因工程载体需要具备的条件。(重难点)遗传工程的概念1.狭义的遗传工程指基因工程。2广义的遗传工程泛指把一种生物的遗传物质(细胞核、染色体脱氧核糖核酸等)移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。基因工程的理论基础和技术保障理论基础DNA 是遗传物质的发现DNA双螺旋结构的确立中心法则
2、的认定和遗传密码的破译技术保障基因转移载体质粒的发现多种限制性核酸内切酶和连接酶以及逆转录酶(工具酶)的发现DNA合成和测序技术的发明DNA体外重组的实现、重组DNA表达实验的成功第一例转基因动物问世、PCR技术的发明DNA重组技术的基本工具1.基因的限制性核酸内切酶(1)作用：对DNA分子上不同的特定的核苷酸序列进行识别和切割。(2)作用特点：专一性。(3)作用结果：产生粘性末端，使DNA的重组成为可能。1.左图中打开G与C化学键的酶c的名称是什么？工具a使哪种化学键断裂？【提示】解旋酶；磷酸二酯键。2基因的DNA连接酶(1)发现：1967年。(2)作用：将具有末端碱基互补配对的两个DNA分
3、子片断连接在一起。(3)过程如图所示：3基因工程的载体(如图)大肠杆菌质粒的分子结构示意图(1)种类质粒：是一种小型的环状DNA分子。噬菌体。动植物病毒等。(2)特点能自我复制。具有一个至多个限制性核酸内切酶切割位点。具有标记基因。对受体细胞无害。(3)作用结果携带外源基因进入受体细胞。2.尝试写出图示中的酶a及X的名称？【提示】酶a是DNA连接酶，X是能合成胰岛素的细菌细胞。 1一种限制性核酸内切酶可识别多种特定的核苷酸序列。()【提示】一种限制性核酸内切酶只识别一种核苷酸序列。2基因工程的载体与物质跨膜转运所需要的载体化学本质相同。()【提示】前者的化学本质是DNA，后者的化学本质是蛋白质
4、。3不同限制性核酸内切酶切割DNA后形成的粘性末端可能相同。()4DNA连接酶可将任意两个DNA片断连接在一起。()【提示】可将两个粘性末端相同的DNA片断连接在一起。5质粒上抗性基因的存在有利于目的基因表达的鉴定。()【提示】有利于导入目的基因的受体细胞的筛选。对限制性核酸内切酶的认识【问题导思】限制性核酸内切酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？限制性核酸内切酶作用于DNA的何种部位？限制性核酸内切酶作用的产物叫什么？1来源多数来自微生物。2特点具有专一性，表现在以下两个方面：(1)识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列。(2)在特定位点切割特定的序列，特定序列表现为中心对称，如EcoR
5、限制性核酸内切酶的切割序列(如图所示)。3作用切开DNA链中的磷酸二酯键(即连接相邻脱氧核苷酸的键)，而不是碱基间的氢键。4产物粘性末端粘性末端：是限制性核酸内切酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开形成的。(如图)从图中可看出，经限制性核酸内切酶一次切割，可产生出两个粘性末端，而且两个末端反向并且可互补(图中箭头表示粘性末端方向)。1不同种类的限制性核酸内切酶识别与切割的位点不同，这与酶催化作用的专一性特点是一致的。2限制性核酸内切酶特异性识别的切割部位都具有回文序列，也就是在切割部位，一条链正向读的碱基顺序，与另一条链反向读的顺序完全一致。3限制性核酸内切酶切点数与切后DNA条
6、数的关系(1)线形DNA分子：切后DNA分子数切点数1。(2)环状DNA分子：切后DNA分子数切点数。下表为常用的限制性核酸内切酶及其识别序列和切割位点，由此推断的以下说法中，正确的是()限制性核酸内切酶名称识别序列和切割位点限制性核酸内切酶名称识别序列和切割位点BamH GGATCCKpn GGTACCEcoR GAATTCSau3A GATCHindGTYRACSma CCCGGG(注：YC或T，RA或G)A限制性核酸内切酶切割后不一定形成粘性末端B限制性核酸内切酶的切割位点一定在识别序列的内部C不同限制性核酸内切酶切割后一定形成不同的粘性末端D一种限制性核酸内切酶一定只能识别一种核苷酸序
7、列【审题导析】限制性核酸内切酶是一类酶，含有多种酶，区分这些酶种类的依据是识别序列与切割位点，而不是粘性末端。【精讲精析】由表中信息可知，Hind 能识别不同的核苷酸序列；核苷酸序列经限制性核酸内切酶切割后不一定形成粘性末端，可形成平末端，如Sma 切割DNA形成的末端；Sau3A 的切割位点在识别序列的外部；不同限制性核酸内切酶切割后可能形成相同的粘性末端，如BamH 与Sau3A 切割形成的末端。【答案】A现有一长度为1 000个碱基对(bp)的DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoR 酶切后得到的DNA分子仍是1 000 bp，用Kpn 单独酶切得到400 bp和600 bp两种长度的DN
8、A分子，用EcoR 、Kpn 同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子。下图中表示该DNA分子的酶切图谱正确的是()【思维导图】解答此题的思维流程如下：【精讲精析】该题目要注意两种限制性核酸内切酶切割后切点数及位置特点。根据题干信息可知：该DNA分子被EcoR 酶切之后还是一个DNA分子且长度不变，说明该DNA是环状DNA，其中有一个EcoR 酶的切点；单独用Kpn 酶切割该DNA形成两个DNA分子，说明该DNA中有两个Kpn 酶的切点，故答案为D。另外，该题也可用验证法来解：将A、B、C、D四项一一代入验证，看哪个选项符合题意。【答案】D对DNA连接酶的认识【问题导思】D
9、NA连接酶与DNA聚合酶作用相同吗？连接碱基对之间的氢键也是DNA连接酶作用的结果吗？DNA复制过程中需要DNA连接酶的催化吗？1DNA连接酶作用将DNA片段间的磷酸二酯键连接起来特点将具有相同的粘性末端或平末端的DNA片段连接起来。在基因工程中，为了保证获得相同的粘性末端，通常要用同一种限制性核酸内切酶处理目的基因和载体。实例Ecoli DNA连接酶连接两个粘性末端2.DNA连接酶与DNA聚合酶的比较DNA连接酶DNA聚合酶相同点催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键不同点模板不需要模板需要DNA的一条链为模板作用对象游离的DNA片段单个的脱氧核苷酸作用结果形成完整的DNA分子形成双链DNA用
10、途基因工程DNA复制几种酶的作用部位图解1作用于a(磷酸二酯键)的酶有：限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶。2作用于b(氢键)的酶只有解旋酶。下列关于DNA连接酶的作用，叙述正确的是()A能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接起来，也能将双链DNA的粘性末端之间的氢键进行连接B将单个核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸二酯键C连接两条DNA链上碱基之间的氢键D将断开的两个DNA片段连接起来，重新形成磷酸二酯键【审题导析】解答此题的突破口在于明确DNA连接酶的作用为DNA片断间的“封口”，而DNA聚合酶则是连接的单个脱氧核苷酸。【精讲精析】表面上看，DNA连接酶和DNA聚合酶两者都是
11、形成磷酸二酯键，但本质上有所区别：DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键。DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个脱氧核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。选项B是DNA聚合酶的作用。DNA连接酶不能连接氢键，选项A是错误的。【答案】D下图为DNA分子结构示意图。对该图的不正确描述是()A的名称是胞嘧啶脱氧核苷酸B解旋酶作用的部位是C某限制性核酸内切酶可选择处作为切点DDNA连接酶可连接处断裂的化学键【审题导析】解答此题应注意图示中氢键为DNA
12、双链碱基对的连接部位或粘性末端的碱基连接部位。磷酸二酯键为DNA单链中脱氧核苷酸之间的连接部位。【精讲精析】DNA的基本单位为脱氧核苷酸，而4种脱氧核苷酸是根据碱基类型来命名的。图中为氢键，为磷酸二酯键，而解旋酶作用的部位是氢键，限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。【答案】C基因工程的载体及其必须具备的条件【问题导思】质粒的本质是什么？质粒为什么适合作为载体？作为基因工程中的载体需要哪些条件？1常见的载体质粒(如图)(1)具备条件能自我复制：能够在受体细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。有切割位点：有一个至多个限制性核酸内切酶切割位点，供
13、外源基因插入。具有标记基因：具有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。无毒害作用：对受体细胞无毒害作用，否则受体细胞将受到损伤甚至死亡。(2)作用用它作为运输工具，将目的基因送入受体细胞中去。利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。2载体的种类(1)一类是细菌的质粒，质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外的，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。(2)另一类是病毒，包括噬菌体和某些动植物病毒。在选择动植物病毒作载体时，应选择DNA病毒以便插入目的基因。(3)病毒载体作用的对象有专一性如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。(1)a代表的物质和质粒的化学本质
14、相同，都是_，二者还具有其他共同点，如_，_(写出两条即可)。(2)若质粒DNA分子的切割末端为，则与之连接的目的基因切割末端应为_；可使用_把质粒和目的基因连接在一起。(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为_，其作用是_。【思维导图】解答此题的思维导图如下：【精讲精析】(1)读图a为大肠杆菌的拟核，其结构物质为DNA，而质粒为能进行自我复制的环状DNA，均可作为遗传物质通过复制遗传给子代。(2)同一种限制性核酸内切酶切割后形成的末端是相同的，由给定的末端知，对应的目的基因切割末端为，缝合工具为DNA连接酶。(3)作为质粒的一个必备条件“标记基因”，其作用在于鉴定和筛选目的基因是否导入受体细胞。【答案】(1)DNA能够自我复制具有遗传效应(2) DNA连接酶(3)标记基因供重组细胞的鉴定和选择本 课 知 识 小 结网 络 构 建结 论 语 句1基因工程
