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1、微生物学实验微生物学实验 吉林大学生物根底实验吉林大学生物根底实验教学中心教学中心常用培养基的制备常用培养基的制备、灭菌与消毒灭菌与消毒精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心一一.目的要求目的要求二二.培养基分类培养基分类三三.消毒与灭菌消毒与灭菌四四.结果检查结果检查精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心实验目的：实验目的：1.1.了解培养基的配制原理了解培养基的配制原理 2.2.掌掌握握配配制制培培养养基基的的一一般般方法和步骤方法和步骤 培培养养基基是是人人工工配配制制的的，适适合合微微生生物物生生长长繁殖或产生代繁殖或产生代 谢产物的
2、营养基质谢产物的营养基质原原那那么么：目目的的明明确确 ;营营养养协协调调;控控制制PHPH、渗渗透压等条透压等条 件件;经济节约经济节约方方法法：生生态态模模拟拟；查查阅阅文文献献;精精心心设设计计;试验比较试验比较 步骤：称量、熔化、调步骤：称量、熔化、调PHPH、过滤、分装、过滤、分装、加加塞塞、包包扎扎、灭灭菌菌、冷冷却却、无菌检查无菌检查精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心称量称量精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心熔化熔化精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心调调pH值值精选课件吉林大学生物基础实验教
3、学中心吉林大学生物基础实验教学中心分装与加塞分装与加塞精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心包扎包扎(1)精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心包扎包扎(2)精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心灭菌灭菌精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心无菌检查无菌检查精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心培养基种类培养基种类:碳碳源源、氮氮源源、能能源源、生生长长因因子子、无机盐、水无机盐、水一、按成份的不同划分一、按成份的不同划分 天天然然培培养养基基、合合成成培培养养基基
4、、半合成培养基半合成培养基二、按培养基的物理状态划分二、按培养基的物理状态划分 固固体体培培养养基基、液液体体培培养养基基、半固体培养基半固体培养基三、按培养基用途划分三、按培养基用途划分 根根底底培培养养基基、加加富富培培养养基基、鉴别培养基、选择培养基鉴别培养基、选择培养基 精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 一级种培养基:一级种又称母种，其培养基一般用试管作为容器，所以又称试管斜面培养基，这类培养基又常用于菌种别离提纯，扩大，转管及菌种保存等。二、三级种培养基:二、三级种培养基通常采用天然营养物质，如秸秆、棉籽壳、蔗渣等农作物废物，加适量的无机盐类等制成固体
5、培养基。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌根底培养基。其配方如和最普通的细菌根底培养基。其配方如下：下：牛肉膏牛肉膏3g3g，蛋白胨，蛋白胨10g10g，NaCl 5gNaCl 5g，琼脂，琼脂151520g20g，水，水1000mL1000mL，pH7.0pH7.07.2(7.2(后调后调)精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心高氏高氏1 1号培养基号培养基高氏高氏1 1号培养基是用于别离和培养放线菌号培养基是用于别离和
6、培养放线菌的合成培养基。其配方如下：的合成培养基。其配方如下：可溶性淀粉可溶性淀粉20g20g，KNO3 1gKNO3 1g，NaCl 0.5gNaCl 0.5g，K2HPO43H2O 0.5gK2HPO43H2O 0.5g，MgSO47H2O 0.5gMgSO47H2O 0.5g，FeSO47H2O 0.01gFeSO47H2O 0.01g，琼脂，琼脂151520g20g，水水1000mL1000mL，pH7.4pH7.47.67.6。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心查氏合成培养基查氏合成培养基查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌查氏合成培养基是用来分类和培养霉
7、菌的培养基的培养基,其配方如下：其配方如下：NaNO3 3g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,NaNO3 3g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖蔗糖 30g,30g,琼脂琼脂151520g,H2O 1000ml,pH20g,H2O 1000ml,pH自然自然精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心麦芽汁培养基麦芽汁培养基用来培养酵母菌用来培养酵母菌,干麦芽粉加干麦芽粉加4 4倍水倍水,在在50-6050-60保温糖化保温糖化3-43-4小时，用
8、碘液试验小时，用碘液试验检查至糖化完全为止检查至糖化完全为止,调整糖液浓度调整糖液浓度,煮煮沸后，过滤，调沸后，过滤，调pHpH为为6.06.0。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心BCG-MSG培养基鉴定几种常见的丝状真菌培养基鉴定几种常见的丝状真菌 新鲜平皿培养基新鲜平皿培养基搁置斜面搁置斜面精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心消毒与灭菌：消毒与灭菌：消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。方法：方法：物理的方法：加热、
9、过滤、辐射物理的方法：加热、过滤、辐射化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等物及抗生素等。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心加热法：加热法：干热法：火焰灼烧灭菌和热干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌空气灭菌1 1、火焰灼烧适用于接种环、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。用玻璃棒。2 2、热空气灭菌利用高温枯、热空气灭菌利用高温枯燥空气燥空气1
10、60160170C170C加加热灭菌热灭菌1 12h2h，适用于玻，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。胞含水量越大，凝固越快。3 3、本卷须知：、本卷须知：1 1培养基、橡胶制品、培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；塑料制品不能用此法；2 2温度控制在温度控制在180180；3 3物品不能太挤；物品不能太挤；4 4温度降至温度降至7070时才开时才开箱门。箱门。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林
11、大学生物基础实验教学中心湿热法湿热法 ：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。效果比同温度下干热好。高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法：1 1、设备：高压灭菌锅、设备：高压灭菌锅2 2、时间长短根据灭菌物品的种、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。类和数量不同有所变化。3 3、适用于培养基、工作服、橡、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。璃器
12、皿的灭菌。4 4、本卷须知：、本卷须知：1 1冷空气彻底排除；冷空气彻底排除；2 2加加水；水；3 3压力降为压力降为“0“0时方可时方可翻开。翻开。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时
13、，压力与温灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表度的关系见表2精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 常压蒸汽灭菌：对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌那么采用间歇灭菌方法。煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间1015min，超高温杀菌 135-150C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。优点：保持食品价值和营养成分。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 过滤除菌：过滤除菌：原理：介质在有压力时阻隔微生物。原理：介
14、质在有压力时阻隔微生物。适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。此法。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。本卷须知：本卷须知：1 1、压力适当；、压力适当；2 2、无菌条件下进行；、无菌条件下进行；3 3、防止渗透现象。、防止渗透现象。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 辐射灭菌：原理：紫外线波长在200300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。
15、杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。缺点：穿透力不大。距照射物1.2m为宜。应用：无菌室，医院。本卷须知：对眼睛和皮肤有刺激作用。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 化学药品灭菌：原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。注意：与药品的浓度上下，时间长短，微生物种类以及微 生物所处的环境有关。常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸 福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心常用消毒剂种类类别类别作用机制作用机制常用种类常用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙
16、醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸甲重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞氧化剂氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖 龙胆紫精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心各种消毒剂的应用种类使用浓度用途石炭酸3%5%地面、器具表面、皮肤消毒乙醇3%5%皮肤、体温计消毒高锰酸甲3%5%皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒红汞3%5%皮肤、粘膜、小创伤消毒硫柳汞3%5%皮肤消毒、手术部位消毒过氧乙酸3%5%塑料、玻璃器材消毒碘酒3%5%皮肤消毒新洁而灭3%5%手术洗手、浸泡手术器械龙胆紫3%5%浅表创伤消毒精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 消毒与灭菌效果的检查：消毒与灭菌效果好坏，直接关系到菌种成品率的上下。因此，除了要严格把好消毒、灭菌关外，同时还要严格执行检验制度，两者缺一不可。培养基灭菌效果检验：、试管母种培养基经灭菌后，从高压灭菌锅中不同部位随机抽取支，放置282恒温箱中培养5-7天,如无霉菌、细菌、酵母等杂菌出现，那么认为灭菌彻底。精选课件吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心、
