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1、质粒丢失率检测SOP文件编号Docume nt No.版本号Versio n No.01职务或岗位Title姓名Name签名 Sig nature日期Date起草人/修订人Drafted By分析工程师穆玲玲年月日审核人Reviewed By分析主管王涛年月日审核人Reviewed ByQA专员丁敏年月日审核人年月日Reviewed By审核人Reviewed By年月日审核人Reviewed By年月日批准人Approved By分析副总裁朱祥平年月日批准人Approved ByQA副总监梅林年月日生效日期Valid Si nee年月日颁发部门Issued by质量保证部复审日期年月日文件拷
2、贝号Review DateCopy No.文件分发至质量保证部 口分析开发部 口生产部行政办公室 财务部口Distributed to技术转移部 口药品注册部 口工程部人力资源部 IT部 口目录1. 目的Purpose 22. 范围Scope 23. 定义Definition 34. 职责Responsibilities 35. 弓丨用标准 Reference to standard 36. 材料 Materials 37. 流程图 Flow Chart 38. 程序 Procedure 39. EHS 410. 派生记录 Derived records 411. 相关文件Referenced
3、ocuments 412. 注意事项Notes 413 .变更记载 Change record 41. 目的 Purpose规程描述了质粒丢失率检测的标准操作方法及步骤，使其检测操作规范化、标准化。2. 范围 Scope适用于本公司重组人源化抗VEGF单克隆抗体（Fab）发酵时，诱导前与加热前的质粒丢失率检查。3. 定义 DefinitionE.coli : Escherichiacoli 大肠杆菌CFU Cell Formi ng Un it细胞形成单位Kana： Kanamycin 卡那霉素4. 职责 Responsibilities分析部负责维护本规程，分析主管，QA负责确保依据本规程实
4、施。5. 弓丨用标准 Reference to standard中国药典2015年版三部附录区 G质粒丢失率检查法。6. 材料 Materials6.1仪器全自动高压灭菌锅，超净工作台，37 C培养箱。6.2试剂胰蛋白胨，酵母粉，NaCI，琼脂粉和卡那霉素溶液以及无菌的PBS6.3器材蓝盖瓶，试管，空平皿，酒精灯，涂布器，移液器，枪头等。6.4培养基的配制6.4.1 LB 固体培养基641.1 称取胰蛋白胨 2.50g、酵母粉1.25g、NaCl2.50g、琼脂粉2.50g于蓝盖瓶中，力口 Milli-Q 水至250 mL,于高压蒸气灭菌锅内121 C灭菌20 min。6.4.1.2 30 C
5、左右上述培养基在超净工作台里分装到空平板中，每个分装大约15-20ml，凝固后放28C冰箱中可以保存一个月。含卡那霉素的LB固体培养基6.4.2.1 将卡那霉素250uL（浓度为50mg/ml）加入冷却至30C左右的LB固体培养基中，混匀，使其工作浓 度为50卩g/ml。6.4.2.2 30 C左右上述培养基在超净工作台里分装到空平板中，每个分装大约15-20ml，凝固后放28C冰箱中可以保存一个月。注：配制体积可根据需求成比例增加。7. 流程图 Flow Chart无。8. 程序 Procedure8.1诱导前的菌体质粒丢失率检测用移液器吸取lOOL诱导前的菌体，加入无菌PBS 900卩L,
6、稀释至10-1，以此类推稀释至10-8;用移液器分别吸取100L的10-6、10-7、10-8稀释度的菌液，分别涂布到LB固体培养基平板上，置37C 培养箱中培养17小时；挑取100个生长良好的单菌落，分别接种到LB固体培养基和含卡那霉素的LB固体培养基平板上，置37C培养箱培养12-15小时；8 1 4计算质粒丢失率：-（LB固体培养基上的菌落数 -含卡那霉素LB固体培养基上的菌落数 ）x100%.计算质粒 率：LB固体培养基上的菌落数x %8.2加热前的菌体质粒丢失率检测用移液器吸取100 X 加热前的菌体，加入无菌PBS 900卩L,稀释至10-1，以此类推稀释至10-6;用移液器分别吸
7、取100L的10-4、10-5、10-6稀释度的菌液，分别涂布到LB固体培养基平板上，置37C培养箱中培养17小时;挑取100个生长良好的单菌落，分别接种到LB培养基和含卡那霉素的培养基上，置37C培养箱培养12-15小时;计算质粒丢失率（LB固体培养基上的菌落数-含卡那霉素LB固体培养基上的菌落数）x100%LB固体培养基上的菌落数8.3判定标准无。8.4记录填写质粒丢失率检测记录。9. EHS无。10. 派生记录 Derived records质粒丢失率检测记录11. 相关文件 Referenee documents高压灭菌锅使用 SOPSW-CJ-1FD超净工作台使用 SOP12. 注意事项 Notes无。13 .变更记载 Change record版本号Revisi onNo.变更号CR No.扌苗述 Description生效日期Valid Since年月日年月日.下载可编辑
