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1、 香菇多糖的研究报告摘要 利用果胶酶、纤维素酶和漆酶对香菇进行酶解，固定料水比( 115) 和反应温度( 40) ，以酶解后多糖提取率为指标，考察不同浓度的3 种酶对香菇多糖提取的影响。在单因素试验的基础上，采用响应面法建立香菇多糖酶法提取的二次多项数学模型，并验证了该模型的有效性; 探讨了果胶酶、纤维素酶、漆酶3 个因子的交互作用及其最佳水平。响应面分析结果表明: 果胶酶、纤维素酶、漆酶显著影响香菇多糖的提取效果，在果胶酶浓度为7.11%，纤维素酶浓度为6.82%，漆酶浓度为3.69%的优化条件下，香菇多糖的提取率达到37.07%。关键词:香菇多糖，果胶酶，纤维素酶，漆酶，响应面2.前言糖类
2、的研究已有百余年的历史, 近20 多年来, 随着膜的化学功能, 免疫物质的化学研究的进展以及探寻新药物资源的不断拓展和研究的深入, 发现糖类在生物体中的作用不仅是作为能量资源或结构材料, 更重要的是还参与了生命现象中细胞的各种活动, 具有多种多样的生物学功能。多糖一般由十个分子以上的单糖通过糖苷键连接而成的高分子多聚物。多糖按来源大致可分为植物多糖、动物多糖、海藻多糖、微生物多糖即细菌多糖和真菌多糖等。其中, 具有很强生物活性的真菌多糖的研究日益受到重视, 真菌多糖从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离, 是一类可以控制细胞分裂分化、调节细胞生长和衰老的活性多糖。真菌多糖作为药物研究始于20 世纪
3、50 年代, 在60 年代以后成为免疫促进剂受到广泛关注, 其中香菇多糖( lent inan, LNT) 是研究得较透彻的多糖之一。 香菇 Lentinus edodes ( Berk. ) Sing 为担子菌纲伞形科真菌, 是世界名贵食用菌兼药用菌之一。1968 年日本千原吴郎首先利用热水从香菇子实体中浸提出6 种胞外多糖, 1970 年Chihard和Sasaki 用热水浸提结合有机溶剂沉淀从香菇中提取到另外4 种多糖, 20 世纪80 年代以来, LNT的研究受到广泛的重视, 取得了一系列进展 1 。香菇( Lentinula edodes) ，又名香蕈、冬菇，是世界上著名的食用真菌之
4、一。据报道，香菇含有的香菇多糖、香菇多糖蛋白等多种生物活性物质是理想的免疫促进剂，且具有抑制癌症和抗肿瘤效果。其中香菇多糖是一种宿主免疫增强剂和生物反应修饰剂，可抑制肿瘤的发生、发展与转移1，调节免疫功能，并能增强体液免疫和细胞免疫功能，具有抗逆转录病毒活性和降血脂、抗衰老等功能2目前，国内外学者对香菇多糖的制备、提取方法等做了多方面的研究，主要的香菇多糖提取方法有热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法、微波法、复合酶( 木瓜蛋白酶与纤维素酶) 解法、深层发酵培养法等3 5，传统的浸提法时间长、提取率低、能耗大6。为克服传统提取方法的缺点，许多学者研究了亚临界水提取法7、超临界CO2萃取技术与热水浸提
5、法8 9、超滤膜技术提取法10、纤维素酶协同超声波法11、响应面法优化热水浸提法12等应用于香菇多糖的提取，在一定程度上提高了提取率，有效保存了香菇多糖的生物活性。本研究采用果胶酶、纤维素酶、漆酶提取香菇多糖，并对影响香菇多糖提取率的3 种酶浓度进行响应面分析，优化了复合酶的最佳配比。1.材料与方法1.1材料与设备1.1.1试验材料香菇( 购买于当地市场) ; 果胶酶13 3 000 U/g、纤维素酶14 30 000 U/g、漆酶15 5 000 U/kg 购于合肥博美生物科技有限公司; 乙醇、蒽酮、98%浓硫酸均为中国药品生物制品检定所产品。1.1.2主要仪器粉碎机，上海精密科学仪器有限公
6、司; 80 2 型高速冷冻台式离心机，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司; 723 型可见光分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司; HH 2 孔数显水浴锅、HH 4 孔数显水浴锅，江苏金坛市环宇科学仪器厂; 移液枪，阿敏生物技术有限公司; 电子天平，Ohaus Corp. Pine Brook，NJ，USA。1.2试验方法1.2.1香菇多糖的提取和测定及单因素试验原料处理: 香菇烘干( 50) 粉碎过筛( 40目) 多糖提取原材料。试验流程: 称取1 g 原料溶于15 mL 水，室温浸润30 min，加入不同浓度的各种酶， 40水浴2 h。经抽滤去除残渣，得抽提液。多次抽提所得的抽提液在4 00
7、0 r /min 离心10 min，将所得上清液合并，减压浓缩到总上清液体积的2 /5 1 /2，加95% 乙醇到乙醇含量为30%，4静置24 h; 离心，弃去沉淀，取上清液再加95% 乙醇到乙醇含量达到75%，4 静置24h; 离心，沉淀用75% 乙醇水溶液分散，再离心，弃去上清液，以此法清洗沉淀，去除沉淀中夹带的少量单糖和低聚糖。沉淀洗2 次。再次离心后的沉淀用蒸馏水溶解并定容到25 mL，然后用蒽酮硫酸法比色法测多糖含量。计算多糖提取率，提取率/% = ( 多糖质量/原料质量) 100按上述流程，分别用果胶酶、纤维素酶、漆酶进行单因素试验。其中各种酶的浓度梯度为0、1%、3%、5%、7%
8、、9%、11%。1.2.2香菇多糖提取的响应面法实验设计16在单因素实验的基础上，以果胶酶，纤维素酶和漆酶为自变量，分别用X1，X2，X3表示，并以 1，0，+1 代表自变量低，中，高水平，根据Box Benhnken 模型的中心组合试验设计原理17 18，进行响应面实验设计。其中1 12 为析因实验， 13 15 为中心试验，15 个试验点分为析因点和零点。参考文献 1姚磊, 王静, 赵海田. 香菇多糖生物活性研究进展 J . 中国甜菜糖业, 2004, 3: 27- 30. 2郭焱，郭巍，顾红樱. 香菇多糖对小鼠免疫功能调节的影响J. 微生物学杂志， 2002， 22( 4) : 64.
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