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1、防臭鞋垫的抗菌性能评价董海燕(福建省纤维检验所，福州，350026)摘要 目的 评价防臭鞋垫的抗菌性能 方法 采用琼脂平皿扩散法，通过计算抑菌带宽度，对防臭鞋垫的抗菌效果做出定性评价；进一步采用振荡法，在温度241、恒温振荡器转速150r/min条件下，将防臭鞋垫与细菌在70mL的PBS中作用18h，通过平板计数法计算抑菌率，对防臭鞋垫做出定量评价。结果 防臭鞋垫对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌带宽度均1mm，其抑菌率分别为97.4%、91.7%。结论 防臭鞋垫具有很强的抗菌性能关键词 防臭鞋垫；抗菌性；抑菌带宽；抑菌率Evaluation for antibacterial proper
2、ty of deodorant insolesDONG Hai-yan( Fujian Provincial Fiber Inspection Institute 350026, China)Abstract Objective To evaluate the antibacterial property of deodorant insoles. Methods Agar diffusion plate method was used. Bacteriostasis bandwidth was calculated and the antiba-cterial property was ev
3、aluated on the level of qualitation. Shake-flask method was used at 24 and 150r/min rotational speed of conatant temperature oscillator. The deodorant insoles and bacteria acted for 18h in PBS liquid. The bacteriostasis rate was calculated and the antibacterial property was evaluated through colony
4、counting method on the level of quantitat-ion Results Bacteriostasis bandwidth was 1mm，and Bacteriostasis band Bacteriostasis rate was 90.5% and 96.7% to coliform and staphlococcus，respectively. Conclustion The deodorant insoles has good antibacterial property Key words Deodorant insoles; Antibacter
5、ial property; Bacteriostasis bandwidth; Bacteriostasis rate防臭鞋垫具有抗菌、除臭等多项医疗保健功效。一般采用夹层中药或特殊天然材料，经独特配方精制而成对脚气、脚痒等有特效。防臭鞋垫主要目的是在穿着状态下抑制以汗和污物为营养源的微生物的繁殖，保持卫生状态，其作为一种功能性鞋垫，目前已经投入市场并被消费者认可1。本文采用琼脂平皿扩散法和振荡法，从微生物学角度对防臭鞋垫的抗菌性能进行定性和定量评价。1材料与方法1.1 材料1.1.1 实验材料：防臭鞋垫，购自重庆恒仁商贸有限公司。1.1.2 实验菌种：大肠埃希氏菌（8099）、金黄色葡萄球菌
6、（ATCC 6538），均购自广东环凯微生物科技有限公司。1.1.3 药品和试剂：各种培养基，均购自广东环凯微生物科技有限公司；PBS（磷酸盐）缓冲液、洗脱液（洗脱试样活菌用生理盐水），均由本室配制；吐温-80、氯化钠等均为分析纯1.1.4 仪器和设备：ZSD-1270型生化培养箱，上海智城分析仪器制造有限公司；BHC-1300A/B3型生物洁净安全柜，苏州净化设备有限公司；ZHWY-100B型恒温振荡器，上海智城分析仪器制造有限公司；Nikon-YS100型显微镜，南京江南永新光学有限公司。1.2 定性方法21.2.1 菌液制备：复苏后的菌种传代23次，培养物划线接种到琼脂培养基平皿上，37
7、培养24h，挑去单菌落接种于新鲜营养肉汤中，在37、振频110 r/min条件下，培养1824h，通过分光光度计方法，将菌液浓度控制至(1.05.0)108 CFU/mL。1.2.2 试样制备：从鞋垫上选取有代表性的试样，剪成圆形，直径为25mm5mm，共取8块，每种菌实验4块（正面2块，反面2块）。同时，取1块与试样材质相同但未经抗菌处理的材料作为对照样，尺寸与试样相同。1.2.3 抗菌实验：采用平皿琼脂扩散法。向无菌平皿中倾倒10mL琼脂培养基，待冷却凝固。取45的琼脂培养基150mL，加入1mL实验菌液，充分混匀，向上述平皿中倾倒5mL，并使其凝固。用无菌镊子将试样和对照样分别放于平皿中
8、央，均匀按压，直至试样与培养基接触良好。立即将平皿放入37的培养箱中培养18h24h。1.2.4 抑菌带宽计算：采用公式：H=（D-d）/2，其中H为抑菌带宽度，D为抑菌带外径的平均值，d为试样直径。测定抑菌带后，用显微镜检查试样下面接触区域的细菌繁殖情况。凡H1mm，并且试样下面无细菌繁殖，即可认定改样品具有良好的抑菌效果。1.3 定量方法31.2.1 菌液制备：复苏后的菌种传代23次，培养物划线接种到琼脂培养基平皿上，37培养24h，挑去单菌落接种于新鲜营养肉汤中，在37、振频130 r/min条件下，培养1820h，通过分光光度计方法测定，菌液浓度应该达到(1.05.0)109CFU/m
9、L。按照十进制稀释法，将菌液用PBS缓冲液稀释至(3.04.0)105CFU/mL。1.2.2 试样制备：将试样剪成0.5cm大小的碎片(1.05.0)109CFU/mL，称取0.75g0.05g多份，将试样在103kPa、121条件下灭菌15min，备用。1.2.3 抗菌实验： 采用振荡法。准备3个烧瓶，分别加入抗菌试样、空白试样和不加试样作为阴性对照。每个烧瓶加入70mL 0.03mol/L PBS缓冲液。在空白试样和阴性对照试样的烧瓶中各加入5mL接种菌液，在24、250 r/min条件下，振荡1min，进行“0” 接触时间取样，稀释不同倍数后接种平皿，置于37培养箱中培养24h48h。
10、在抗菌试样的烧瓶中加入5mL接种菌液，盖好盖子后，与另两个烧瓶一起在24、150 r/min条件下，振荡18h，稀释不同倍数后接种平皿，置于37培养箱中培养24h48h。选择菌落数在30300之间的合适稀释度的平皿计数。1.2.4 实验有效性判断：F=lgWb-lgWa，其中Wa-空白试样“0” 接触时间的活菌数，Wb-空白试样振荡18h后的活菌数。当F1.5时，说明实验菌活性较强，可判定实验有效，否则判定无效。1.2.5 抑菌率计算：Y=（Wb-Wc）/ Wb100%，其中Y-抑菌率，Wb-空白试样振荡18h后的活菌数，Wc-抗菌试样振荡18h后的活菌数。抑菌率90%说明样品具有抗菌效果；抑
11、菌率99%说明样品具有良好的抗菌效果。2 结果与分析2.1 定性试验结果防臭鞋垫试样的培养皿中有明显抑菌带产生，并在显微镜下观察试样接触的部分没有细菌繁殖；而对照样则无抑菌带产生，其与培养基接触部分有细菌繁殖。防臭鞋垫对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果评价结果见表1和表2表1 防臭鞋垫对大肠埃希氏菌的抑菌性能的定性评价（n=5）样品抑菌带外径的平均值/mm试样直径/mm抑菌带宽/mm试样下面的细菌繁殖情况空白试样26260有防臭鞋垫31272.0无注：n为实验重复次数表2 防臭鞋垫对金黄色葡萄球菌的抑菌性能的定性评价（n=5）样品抑菌带外径的平均值/mm试样直径/mm抑菌带宽/mm试样下
12、面的细菌繁殖情况空白试样26260有防臭鞋垫30271.5无注：n为实验重复次数2.2 定量实验结果 防臭鞋垫试样的培养皿中菌落数较少，而空白试样的培养皿中有较多菌落生长。防臭鞋垫对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率见表3。表3 防臭鞋垫对两种致病菌的抑菌率（n=5）菌种空白试样振荡18h后的活菌数/CFU抗菌试样振荡18h后的活菌数/CFU抑菌率/%大肠埃希氏菌1.241053.2510397.4%金黄色葡萄球菌1.111059.2110391.7%注：n为实验重复次数3 讨论防臭鞋垫属于抗菌纺织品4的一种。本身具有良好的抗菌防臭性能，并且具有保健、医疗等其它功效。本实验采用的这种防臭鞋垫
13、是通过中间层含有中药，从而到达防臭抗菌目的。因此不能采用过多洗涤剂的清洗方法以防失效。本实验定性结果表明，该防臭鞋垫对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌带宽分别为 2.0和1.5，并且试样下面没有细菌生长。因此提示我们该防臭鞋垫具有良好的抑菌效果，并且该抗菌添加剂属于溶出型。本实验定量结果表明，该防臭鞋垫对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为 97.4%和 91.7%，验证了该防臭鞋垫具有一定的抑菌性能。结果同时表明，该防臭鞋垫对革兰氏阴性和阳性菌的抑制能力是不同的。其中，对革兰氏阴性菌的作用能力比较强，而对革兰氏阳性菌的作用能力比较弱一些，这可能与细菌的细胞壁结构有关系。革兰氏阴性细菌
14、细胞壁较薄，相反阳性菌细胞壁较厚5。因此推测，该防臭鞋垫中的抗菌物质是通过破坏细菌的细胞壁结构来抑制细菌生长的。本实验仅就某种防臭鞋垫的抗菌性能进行了表面的、直观的评价和分析。如果想要全面了解防臭鞋垫这类产品的抗菌性能还需对其它产品进行大量实验和考察，而且其抑菌机理也有待进一步研究。参考文献1 车民. 抗菌防臭纺织品性能评价J. 合成技术及应用,2001,16(3):33,43,53.2 GB/T 20944.1-2007 纺织品抗菌性能的评价 第一部分：琼脂平皿扩散法S.3 GB/T 20944.1-2007 纺织品抗菌性能的评价 第三部分：振荡法S. 4 王俊起,王有斌. 纺织品抗菌功能方法研究J. 中国卫生工程学,2003,2(3): 129.5 倪语星. 微生物学和微生物学检验试验指导M. 北京：人民卫生出版社,2001: 25.1
