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1、总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书产品名称通用名称总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）英文名称 Total IgE ELISA包装规格订货号靶抗原基质规格EV 3840-9601E人IgE包被抗体的微孔板96701(96)预期用途用于体外定量检测人血清或血浆中总IgE。适应症：过敏性疾病、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。临床意义：1） 过敏反应和特应性疾病的诊断：除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE夕卜，变态反应性疾病 的诊断还包括检测总IgE水平。但是，过敏反应并不总伴有总 IgE水平的升高（成人100 IU/ml）。相反，低水平的IgE （成人25 IU/ml ）也不能排除患
2、有特应性过敏反应。通过长期脱 敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻炎以及 婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE （数千IU/ml）。其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke水肿 （血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。检测总IgE也可用于鉴别诊断肺部嗜酸 性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和 Churg- St rauB综合征。2）其他疾病中的IgE：高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形
3、式的蠕虫病，如弓蛔虫病、 蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。然而，在绦虫病和蛲虫病中未见有IgE 水平升高。对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围内。在下列疾病中可检测出高浓度的IgE：湿疹性或非湿疹性皮炎； IgE骨髓瘤；急性系统性红斑狼疮（SLE）；移植物抗宿主反应； T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich综合征）； 2度或3度烧伤；耳鼻喉肿瘤；肝病（尤其与酒精滥用有关）； AIDS晚期阶段（CD4+ T细胞明显下降）。在下列疾病中可有IgE缺陷： X-染色体相关低丙种球蛋白血症；严重的联合免疫缺陷（SCID）； 毛细管扩张性运动失调； 肺纤维化疾病；
4、 极少数的健康人。检验原理 试剂盒中每个微孔板条有 8 个可拆分的包被有抗人 IgE 多克隆抗体的微孔。第一次 温育时，稀释后的样本在微孔中反应。如果样本阳性，特异性 IgE 与抗体结合。为了检测结合的IgE，加入能发生颜色反应的酶标抗人IgE抗体（酶结合物）进行第二次温育。然后加入酶底物， 发生颜色反应。通过标准品1-4绘制的标准曲线来确定IgE浓度。主要组成成分成分颜色规格标识1.微孔板：包被有抗原的微孔12条，每条有8个可 拆分的微孔，直接使用12?8STRIPS2.标准品1： 500 IU/ml （IgE，人），直接使用红色， 颜色随 抗体浓 度的降 低而变浅1?2.0mlCAL13.
5、标准品2： 100 IU/ml （IgE，人），直接使用1?2.0mlCAL24.标准品3： 10 IU/ml （IgE，人），直接使用1?2.0mlCAL3|5.标准品4：0 IU/ml （IgE，人），直接使用1?2.0mlCAL46.阳性对照1:（高浓度IgE，人），直接使用深蓝1?2.0mlPOS CONTROL17.阳性对照2：（低浓度IgE，人），直接使用浅蓝1?2.0mlPOS CONTROL28.酶结合物：过氧化物酶标记的抗人IgE （小鼠），直接使用紫色1?12mlCONJUGATE9.样本缓冲液：直接使用橙色1?100mlSAMPLEBUFFER10.清洗缓冲液：10倍浓缩
6、无色1?100mlWASHBUFFER 10X11.色原/底物液：TMB/H0，直接使用2 2无色1?12mlSUBSTRATE12.终止液：0.5M硫酸，直接使用无色1?12mlS)TOP SOLUTION13. 产品说明书1份14. 质控表1张LOT产品批号储存温度IVD体外检测未开封可稳定至1. 不同批号试剂盒内的酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液可互换。2定标：采用国际参考品 NIBSC 75/502 （National Institute for Biological Standards and Control, Hertfordshire, England）定标
7、，采用国际单位（IU）。NIBSC 75/502 血清中抗体浓度 为 5000 IU/ml。储存条件及有效期2-8C保存，不要冰冻。未开封前，试剂盒中各成分在有效期前均稳定有 效。1. 包被有抗原的微孔板：自第一次开封后，抗原包被的微孔板在干燥的2-8?C的环境中保存4个 月。2. 清洗缓冲液：稀释后的缓冲液于 2-8?C 最多可稳定 4 周。 样本要求样本：人血清或EDTA、肝素、柠檬酸盐抗凝的血浆。稳定性：待测患者样本于2-8?C可储存14天，稀释后的样本需在同一个工作日检测。样本稀释：患者样本用样本缓冲液1:10稀释。例如，可取1001血清用900 ul样本缓冲液稀 释并使用混匀器混匀（
8、加样枪不适合于混匀）。注意：标准品和对照品已经稀释，直接使用，勿需再稀释！检验方法试剂的准备和稳定性注意：所有试剂在使用前均应在室温（18-25?C）平衡约30分钟。试剂首次开封后，在无污染的 情况下，于2-8?C保存，可稳定至所标示的有效期。- 抗原包被的微孔：直接使用。在外包装密封线咬合部的上端剪开保护袋，为防止板条受 潮，只有当微孔板平衡到室温后才可打开包装。剩余板孔应立即放回保护袋并封好（保留干 燥剂）。从第一次打开保护袋起，抗原包被的微孔可在干燥的2-8?C的环境中保存4个月。- 标准品和对照血清：直接使用，使用前应充分混匀。- 酶结合物：直接使用，使用前应充分混匀。- 样本缓冲液：
9、直接使用。- 清洗缓冲液：10倍浓缩。如果浓缩清洗缓冲液中出现结晶，稀释前应加热到37?C并充分混 匀溶解。用干净吸管从瓶中吸取需要量的浓缩清洗缓冲液用蒸馏水1:10稀释（1份浓缩清洗 缓冲液加9份蒸馏水）。如：需清洗一条微孔板条，则可取5ml浓缩清洗缓冲液用45ml蒸馏 水稀释。稀释后的缓冲液如处理得当放置于2- 8?C可稳定4周。-色原/底物液：直接使用。因内容物对光敏感，使用后应立即盖好瓶盖。色原/底物液应为无 色澄清，如果变蓝则不要使用。-终止液：直接使用。操作流程（部分）手工操作样本温育:按加样方案向相应微孔分别加100 l标准品、阳性对照、阴性对照或稀释后（第一步）的样本，室温（1
10、8-25?C）温育30分钟。清洗:手工：倒掉微孔板内液体，用稀释后的清洗缓冲液洗3次，每次300 1。宜动：用稀释后的清洗缓冲液清洗3次，每次450 L程序设定：如TECAN洗 板机可设为“ Overflow Modus）。每次清洗时缓冲液在微孔中至少保留30-60秒，然后再倒掉。清洗后（包括 手工或自动）应将微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残存的清洗液。注意：清洗后遗留在微孔中的残液（10l）可干扰底物反应而导致吸光度 值偏低。清洗不充分（如清洗少于3次、清洗液太少或清洗时间太短）可能 导致吸光度值偏高。酶结合物温育:滴加100l酶结合物至每一微孔，室温（18-25?C）温育30分钟。（第二
11、步）清洗：倒掉微孔板内液体，如上述步骤清洗。底物温育:滴加100l色原/底物液至每一微孔，室温（18-25?C）避光温育15分钟。（第三步）终止反应:以与加色原/底物液相同的速度和顺序滴加100l终止液至每一微孔。比色:450nm比色，参考波长620-650nm,加完终止液后30分钟之内比色，比色前轻轻振动微孔板以使液体扩散均匀。采用全自动分析仪完成实验 使用分析仪可实现样本稀释和实验操作的全自动化。欧蒙公司授权的相关软件中的温育条件 可能和 ELISA 试剂盒说明书中的条件有轻微偏离。不过，欧蒙 Analyzer I， Analyzer I-2P 或 Dynex 公司 DSX 的实验条件与欧
12、蒙 ELISA 产品组合的有效性已经得到验证，可索取验证文件。也 可以使用其他品牌开放式的全自动分析仪，但是组合的有效性需要用户自行确认。加样方案123456789101112AC1P3P11P19BC2P4P12P20CC3P5P13P21DC4P6P14P22EPos1P7P15P23FPos2P8P16P24GP1P9P17HP2P10P18标准品(Cl到C4)、阳性对照1和2 (pos 1和pos2)和患者样本各在一孔中温育。每份样 本复孔检测可提高实验的可靠性。每一微孔可从板条上取下，这样可根据样本的数量选择试剂的用量，减少了试剂浪费。阳性和阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次实验都
13、必须做。参考范围非过敏人群中IgE浓度正常范围上限为100 IU/ml (Thomas, 1992)。用本检测系统 检测250份献血者血清，结果几乎呈正态分布，与文献报道一致(Klink等，1990)。检测结果的解释定量检测：分别以4份标准血清的浓度和吸光度为横、纵坐标点对点作标准曲线(线性/线性)， 根据此标准曲线求出样本中IgE的浓度。下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算样 本中抗体的浓度。如果采用自动方法判断结果，我们推荐使用三次函数插入法(cubic spline interpolation)以获得与实际曲线最接近的结果(判断软件：TECAN: EASYBase?，MICRO
14、TEK:Microwin?)。如果使用其他软件，三次函数插入法可能会产生问题。在这种情况下，可使用 Akima插入法(TECAN： easyWIN fitting?)或二次多项式。如果采用点对点线性推断法，则必 须考虑到：当IgE浓度大于100IU/ml时，测量值可能会产生微小的偏差。下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算患者样本中抗体的浓度。如果患者样本的吸光度超出了标准品1 (500 IU/ml)，可报告为“500 IU/ml”。建议将 样本1:40稀释后重新测定，从标准曲线计算出的数据再乘以4即为样本中抗体的浓度。IgE 在妊娠第 11 周开始形成，其浓度随着年龄的增加而持续升高，在 6-14 周岁时达到最高 值，随后开始随着年龄的增加而下降。 IgE 浓度因个体、是否患过敏性疾病而变化很大，且受多种因素（年龄、性别、遗传背景、种族、吸烟）的影响。下表是文献报导的 IgE 正常值范围，仅 作为参考。每个国家、每个实验室应建立自己的不同年龄组的 IgE 正常范围。年龄正常值上限新生儿1.2
