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1、七、问答题1论述原核生物转录终结。 (1)转录终结两种核心机制是什么? (2)描述翻译如何能调节转录终结。 (3)为什么在细菌转录终结中很少涉及到Pho因子? (4)如何能制止转录终结?2复制 DNA聚合酶(DNA依托 DNA聚合酶)也有校正功能，解释为什么RNA聚合酶没有这种功能。3讨论原核生物基因表达聚合伙用反映定向核心性。如果核糖体从3端到5端读它模板 mRNA话，那么将会发生什么状况?4概括细菌细胞内转录过程。5. 概括典型原核生物启动子构造和功能，并解释什么是保守序列。6转录如何在基因或基因组末端终结?7(1)如何辨别由启动子起始转录RNA片段和5端被加工过RNA片段; (2)证明多
2、肽是从氨基端到羧基端方向合成。8比较 Ecoli rRNA和 tRNA转录和加工。9辨别可诱导和可阻遏基因调控。10衰减作用如何调控E. coli中色氨酸操纵子表达?11比较并指出细菌和真核生物RNA 翻译机理异同。12什么是摇晃假说?13指出E.coli和真核生物翻译起始不同样。14SN Cohen于1973年构建了三个重组体， pSC102， pSC105， pSC109请阐明这三个重组体是如何获得?各阐明了什么?15基因克隆是如何使具有单个基因 DNA片段得到纯化?16什么是细菌限制修饰系统(restriction-modificaton system, R-M system)17细菌限
3、制修饰系统有什么意义? 18阐明限制性内切核酸酶命名原则核心点。19类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用?20类限制酶有哪些特点?21何谓限制性内切核酸酶切割频率?22什么是限制性内切核酸酶星号活性?受哪些因素影响?23双酶消化法(double digests)绘制限制性内切核酸酶酶谱原理。24什么是 DNA多态性(DNA polymorphism)?25限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)。26计算下列三种酶各自在某染色体 DNA序列上辨认位点间平均距离： Alu ：5AGCT 3” EcoR : 5GAA
4、TTC 3 3 TCGA 5 3CTTAGG 5Acy:5GPuCGPyC 3 3CPyGCPu5 (注： Py=任何一种嘧啶； Pu=任何一种嘌呤)图15.1酶切电泳图谱12：Hind 切割；34：coRV 切割；56：Hind +co RV；1、3、5是质粒 DNA： 2、4、6是15号克隆。图15.2 用EcoR 、Hpa 单独切割及用这两种酶混合切割30kbBamH片段产生 DNA带27在细菌质粒 pBP1四环素抗性基因 tetR中间有一种Hind切点。用Hind 切割果蝇基因组 DNA，以 pBP1为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇目旳基因。用Hind和EcoRV对克
5、隆15进行了酶切分析，电泳成果图15.1(用酶切 pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了片段大小。 (1)绘制具有插入片段和不含插入片段时 pBPl限制性图谱，并标明四环素抗性 基因位置; (2)如果用克隆在另一种和 pBP1完全不同样源载体上四环素抗性基因作为探针，进 行 Southern印迹杂交，估计上述电泳图会浮现什么样杂交带? (3)如果用克隆15果蝇 DNA片段作为探针进行 Southem印迹杂交，放射自显影 成果又是如何?28为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。29据Science杂志报道:一种核心遗传疾病可由导致 DNA中碱基替代诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种迅速用以鉴定疾病
6、基因型检测措施。30为了绘制长为3.0kb BamH 限制性片段限制性图谱，分别用EcoR 、Hpa EcoR 十 Hpa消化这一片段三个样品，然后通过凝胶电泳分离 DNA片段，溴化乙锭染色后观测DNA带型(图15.2)。请根据这些成果，绘制一种限制性图谱，要标明E.coR 和Hpa辨认位点间相对位置，和它们之间距离(kb)。311967年，有5个实验室几乎同步独立发现了DNA 连接酶，每个实验室实验有什么特点?32简述 DNA和RNA连接酶催化反映机制。33. 影响 DNA连接酶催化连接反映因素有哪些?34什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?35. 如何运用 T4 DN
7、A聚合酶制备3隐含末端或双链平末端?36. 如何运用 T4 DNA聚合酶进行双链 DNA3末端标记?37如何运用 T4 DNA聚合酶制备平末端?38反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMY, aviam myeloblastosis virus)，另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(MMLV，Moloney murine leukemia virus)，它们之间有什么不同样?39和E.coli RNA聚合酶相比，细菌噬菌体 SP6RNA聚合酶、 T7 RNA聚合酶和 T3 RNA聚合酶具有哪些优越性?40什么是多核苷酸激酶向前反映和互换反映?41细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸
8、酯酶有什么不同样?在基因工程中有什么用途?42外切核酸酶(lambda exonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用?43Mn2+、 Mg2+对 DNase (deoxyribonuclease )活性有什么影响? DNase 在基因工程中有什么作用?44比较 S1-Mapping和 Footprinting在原理上、措施上、应用上有何不同样?45什么是复制子(replicon)?46什么是质粒相容性?什么是不相容群?机制是什么?47什么是质粒带动转移?48阐明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点原理。49 Co1El衍生质粒拷贝数调节机理机理是什么?50 R1
9、质粒拷贝数受到如何调节控制?51质粒如何维持在细胞中稳定?52. 引起质粒不相容性核心因素是什么?53由于基因工程是人为变化遗传信息操作，因此必需注意被操作基因安全，进行 严格监控，质粒载体安全性是十分核心。请问质粒载体安全条件涉及哪多种方面?54请指出质粒 pSC101部分生物学特性(涉及构造和遗传)及在基因工程中作用。55. 自然界中具有抱负条件质粒载体为数不多，虽然是 Co1E1和 pSC101这两个自然质粒也不尽人意，一般需要进行改造，请问质粒改造涉及哪些基本内容?56. 质粒改造发展过程如何?57. 在质粒中如何增减酶切点?58有人用限制性内切核酸酶EcoR I分别切割松弛型质粒 C
10、o1E1和严紧型质粒 pSC101(各有一种切点)，然后重组连接形成一种杂种质粒 pSC134，请推测这种质粒有什么特性和用途。59现分离了4种新大肠杆菌 Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株拟定了高频转移标记基因和它们进入 F受体时间分别为：标记基因和第一次进入时间Hfr1Hfr2Hfr3Hfr4man13minmal29lys16pur6trp6met14arg9trp3his23thr4mal2thr31pur3uvr20his32lac23gal14(gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖；arg、his、met、trp 生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸
11、、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸；uvr：紫外线敏感)。任何没有给出标记所有是不能高频转移。上述数据可以阐明大肠杆菌染色体是环状吗?以分钟表达图距构建一种大肠杆菌染色体连锁图。假定整个染色体用了100分钟转移，并且苏氨酸被觉得在0分钟或10O分钟处。60YAC克隆载体常浮现哪些问题?61为什么野生型噬菌体 DNA不适宜作为基因工程载体?62什么是蓝白斑筛选法?63蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?64什么是c筛选法?65噬菌体载体具有哪些长处和局限性?66什么是 M13IG序列区?有何特点和功能?67将野生型 M13改导致基因工程载体，一方面是进行酶切位点改造，请问 M13中EcoR 最初是如何引入?6
12、8以置换型噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说可以形成噬菌斑就一定是重组体?69 M13系列载体具有哪些优缺陷?70粘粒载体具有哪些特点和局限性?71辅助噬菌体 DNA和相应噬菌粒是如何协同工作?72. 克隆 DNA在质量上有什么规定?73为什么从细胞中分离 DNA时往往会断裂?74为什么苯酚要重蒸饱和后才干用于 DNA分离?75为什么氧化变色酚不能直接用于DNA分离?应如何解决?76. 在DNA分离过程中，酚一般和氯仿联合使用，虽然不联合使用也要在苯酚抽提后用氯仿再抽提一次，为什么?77. 阐明溴化乙锭氯化钩密度梯度离心(ethidium bromide-caesium chloride gr
13、adient centrifugation)纯化DNA原理。78. 采用什么措施保证 DNA化学合成定期性和专一性?79何谓简并引物(degenerate primer)?80简并引物设计一般原则是什么?81双脱氧法(dideoxynucleotide method)测序基本原理是什么?82在古生物学中，尚不懂得恐龙与否是温血爬行动物，而不像今天变温爬行动物。 如果你得到部分恐龙 DNA，你如何通过 PCR和基因克隆来检测恐龙与否是温血 爬行动物?83如果懂得某一基因功能及其相应蛋白质氨基酸序列构成，可以通过何种措施 克隆该基因?84何谓定位克隆(positional cloning)?85何
14、谓染色体步移(chromosome walking)?86在染色体步移中，用哪些措施获得克隆末端?87何谓表型克隆(phenotype cloning)?88什么是基因文库?89什么是基因组文库(genomic librarY)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上基因库有什么不同样?90什么是 cDNA文库(complement DNA libraly)?同基因组文库有何差别?91粘性末端连接法是最常用连接措施，具有诸多长处，但是也有部分局限性，请指出 这些局限性之处，92什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种措施加尾?具有哪些优缺陷?93何谓接头连接法(Iinker ligation)?94什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?95如何使用甲基化酶对克隆 DNA进行保护?有什么意义?96何谓稀有酶?(举例阐明)97为了大量获得诸多用于生化鉴定产物，你想将拟南芥中一种序列已知、编码单体酶蛋白基因在单细胞微生物中表达，你如何保证最后能得到产物?98若在进行 DNA重叠群分析时，你发现在一种编码有价值但不稳定蛋白质可读框 后来，紧接着另一种可读框，它可在蛋白质 C末端加上一种稳定构造。举出至少两种获得被修饰蛋白产物措施。99某一
