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1、生防木霉拮抗黄瓜枯萎病菌的初步研究 摘要木霉是一个主要的生防菌,对黄瓜枯萎病菌有很强的拮抗作用,关键作用方法有:竞争、重寄生、抗生、溶菌作用。温室盆栽试验显示,木霉可显著防治黄瓜枯萎病菌。关键词木霉;黄瓜枯萎病菌;生防木霉(Trichoderma spp.)属真菌界、双核菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科、真菌属,是迄今为止研究和应用最多的一类生防菌1。木霉的生防机制复杂,关键包含竞争、重寄生、抗生、溶菌等2。研究木霉对病原菌的作用机制及防治效果,能够优选木霉菌株,从而提升生防效率。1材料和方法1.1试验材料以病株上分离的黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.
2、cucumerinum)为拮抗对象,土壤中分离的木霉菌株为拮抗菌。1.2试验方法1.2.1竞争作用。采取对峙培养法3,在直径为9cm的PDA平板一侧接种直径为5mm的病原真菌菌丝块,在平板另一侧接种拮抗菌,28共培养,观察两菌的生长情况。1.2.2重寄生作用。在PDA培养基中央放置1块20mm20 mm无菌盖玻片,在左侧距盖玻片40mm处接种木霉,右侧距盖玻片20mm处接种黄瓜枯萎病菌,28恒温培养。取下盖玻片,于显微镜下观察菌丝体的作用方法。1.2.3抗生作用。在装有100mL PDB的三角瓶中接入直径5mm的木霉菌块,28、150rpm培养6d,取滤液离心后过0.22m细菌滤器。在90mL
3、、45的PDA中加入10mL上述滤液,摇匀倒成平板,接种直径为5mm的黄瓜枯萎病菌菌块。28恒温培养,观察生长情况。1.2.4溶菌作用。将培养4d的木霉发酵液8 000rpm离心10min。取15mL上清液倒入培养皿中,接入黄瓜枯萎病菌菌块。浅层培养5d后观察生长情况。以高温灭菌的木霉上清液中培养的病菌菌块为对照。1.2.5盆栽试验。将黄瓜种子经70%乙醇消毒1min,2% NaClO消毒5min,55温水浸1520min,25浸泡23h,无菌水冲洗3次,2530下催芽12d。将黄瓜枯萎病菌接种到麸皮玉米粉为31的培养基中,28恒温箱中培养至长满整个三角瓶。将催芽基础一致的黄瓜苗在木霉菌悬液(
4、约1108cfu/mL)中浸1h,取出于灭菌滤纸片上干燥1h后,播种于拌有黄瓜枯萎病菌制剂的土壤中。以无菌水浸种处理为对照。2结果和分析2.1竞争作用平皿对峙试验显示,木霉生长快速,可快速占据空间,有很强的生长竞争优势,能有效抑制黄瓜枯萎病菌的生长。2.2重寄生作用显微镜下观察到木霉菌丝体缠绕着黄瓜枯萎菌丝生长,并在病菌菌丝上产生大量分枝,产生寄生作用。2.3抗生作用在PDA培养基中加入10%的木霉发酵液后,黄瓜枯萎病菌菌丝生长不旺盛,和对照有显著的差异。2.4溶菌作用在未灭菌的木霉上清液中培养的黄瓜枯萎菌块,仅有细小菌丝的生长,数量较少;而在灭菌后的上清液中,黄瓜枯萎菌生长旺盛,形成大块菌丝
5、团。2.5盆栽防效试验盆栽试验结果表明,和对摄影比,木霉浸种处理的黄瓜幼苗死亡率为25.0%,显著低于对照的66.7%。3结论和讨论作为安全而环境友好的生防因子,木霉在田间的施用可有效地防治作物病害,从而避免大量使用农药造成病原菌抗药性的产生、作物农药含量超标及环境污染等问题46。所以,对木霉生防机制深入而全方面的研究,将对绿色农业的可连续发展产生主要的推进作用。4参考文件1 辛雅芬,商金杰,高克详.拮抗木霉菌的生防机制研究进展J.东北林业大学学报,2021,33(4):8891.2 HARMAN G,HOWELL C R,VITERBO A,et al.Trichoderma speciesopportunistic,avirulent plant symbiontsJ.Nature,2021(2):4356.3 蒲金基,曾会才.绿色木霉LTR121对黄瓜枯萎病菌防治作用机制的初步研究J.热带农业科学,2021,22(4):2225.4 吕天晓,徐凤花,李世贵,等.生防木霉菌原生质体的制备及再生研究J.生物技术通报,2021(4):130134.5 庄敬华,陈捷,杨长成,等.生防木霉菌生物安全性评价J.农业科学,2021,39(4):715720.6 王勇,王万立,刘春艳,等.生防木霉菌Tr9701的判定及其生物学特征J.华北农学报,2021,21(1):100104.
