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1、 基于指纹图谱和4种指标成分的经典名方一贯煎基准样品量值传递分析 胡钰荧，李淑萍，热依木古丽阿布都拉，阿吉艾克拜尔艾萨，吴 涛*基于指纹图谱和4种指标成分的经典名方一贯煎基准样品量值传递分析胡钰荧1, 2，李淑萍1，热依木古丽阿布都拉1，阿吉艾克拜尔艾萨1，吴 涛1*1. 中国科学院新疆理化技术研究所 新疆特有药用资源利用重点实验室，新疆 乌鲁木齐 830011 2. 中国科学院大学，北京 100049建立经典名方一贯煎（Yiguan Decoction）基准样品HPLC指纹图谱，并对其指标性成分（5-羟甲基糠醛、阿魏酸、洋川芎内酯I、毛蕊花糖苷）进行含量测定，研究一贯煎基准样品量值传递规律，
2、为复方制剂研制奠定基础。制备15批一贯煎基准样品，建立其HPLC指纹图谱，明确并归属特征峰；对一贯煎基准样品中指标性成分进行含量测定，分析指标性成分从饮片-基准样品的传递规律。15批一贯煎基准样品HPLC指纹图谱相似度0.800，标定了29个共有峰，并对各共有峰进行药材归属，其中1号峰为北沙参、麦冬、当归、生地黄、枸杞子共有峰，2号峰为北沙参、麦冬、当归、生地黄、枸杞子、川楝子共有峰，3号峰为北沙参、当归、生地黄、枸杞子共有峰，4、13号峰为生地黄、枸杞子共有峰，5号峰为北沙参、枸杞子、川楝子共有峰，6号峰为生地黄、川楝子共有峰，7、8、10、17、24号峰为当归、枸杞子共有峰，11、20号峰
3、为当归、生地黄共有峰，12号峰为当归、枸杞子、川楝子共有峰，15号峰为枸杞子、川楝子共有峰，18号峰为北沙参、枸杞子共有峰，19号峰为麦冬、当归、枸杞子、川楝子共有峰，29号峰为当归、生地黄、枸杞子、川楝子共有峰，14、22、2528号峰为当归专属峰，23号峰为生地黄专属峰，9、16、21号峰为枸杞子专属峰。指标性成分5-羟甲基糠醛、洋川芎内酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷质量分数分别为90.3144.1、75.6166.2、105.4200.3、149.9293.3 g/g，转移率分别为15.53%27.11%、38.36%62.68%、16.23%31.37%、31.41%55.65%；测定15批
4、一贯煎干膏率为42.95%49.93%，传递率为84.39%96.15%。采用指纹图谱、指标性成分含量测定及干膏率相结合的模式，对经典名方一贯煎基准样品的量值传递过程进行分析，可初步拟定一贯煎基准样品的质量标准，为其后续新药研发提供参考。经典名方；一贯煎；基准样品；量值传递；HPLC；指纹图谱；5-羟甲基糠醛；阿魏酸；洋川芎内酯I；毛蕊花糖苷；北沙参；麦冬；当归；地黄；枸杞子；川楝子；转移率经典名方一贯煎系滋阴疏肝之良方，出自清代魏之琇续名医类案心胃痛门1，由北沙参、麦冬、当归、生地黄、枸杞子、川楝子6味中药组成，因其主治肝证有奇效而被收录于古代经典名方目录（第一批）2和古代经典名方关键信息表
5、（7首方剂）3。其原方重用君药生地滋阴养血、补益肝肾；当归、枸杞养血滋阴柔肝；北沙参、麦冬滋养肺胃，养阴生津，佐金平木，扶土制木；四药共为臣药，再以川楝子为佐药，疏肝泄热，理气止痛，复其条达之性4；诸药合用，共奏疏肝解郁、滋阴养血之功。由于滋阴疏肝系一贯煎传统功效，沿用自古至今，因而一贯煎在临床上多用于治疗肝硬化、肝纤维化、慢性萎缩性胃炎、干燥综合征等消化科、内科疾病，应用广泛且具有显著疗效4-5。刘昌孝院士提出了质量标志物（quality markers，Q-Marker）的概念用以作为中药的质控成分，并从质量传递与溯源、成分特有性、成分有效性、复方配伍环境以及成分可测性5个方面对中药Q-M
6、arker的内涵及其发现和确定思路及方法进行了论述6-8。课题组前期基于质量传递与溯源原则、成分特有性原则、成分有效性原则、复方配伍环境原则以及成分可测性原则5个方面，从一贯煎中预测分析到17个Q-Marker，其中包括有机酸类成分阿魏酸、苯乙醇苷类成分毛蕊花糖苷、香豆素类成分佛手柑内酯等9。目前，一贯煎的相关研究多集中在药理作用、药效机制及临床应用等方面，关于以基准样品量值传递为核心的质量控制方面鲜有文献报道。因而，本实验通过制备15批一贯煎基准样品，建立其HPLC指纹图谱，进行相似度评价及特征峰归属分析，并结合5-羟甲基糠醛、洋川芎内酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷4个指标性成分含量、转移率以及干
7、膏率的传递关系，进行饮片到基准样品的量值传递相关性质量控制研究并深入分析，以期承载经典名方的有效性和安全性，为后续复方制剂的开发奠定实践基础并提供理论支撑。1 仪器与材料1.1 仪器Sartorius BT 25S型十万分之一电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SK7210LHC型超声清洗仪，上海科导超声仪器有限公司；FTS-10A型陶瓷煎药锅，广东省一壶万里电器实业有限公司；SHB-III型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；H22-X3型九阳电陶炉，杭州九阳生活电器有限公司；FD-2A型真空冷冻干燥机，北京博医康实验仪器有限公司；Agilent型高效液相色谱仪，赛默飞世尔科
8、技（中国）有限公司，包含二极管阵列检测器（DAD）和Chromeleon 7.2色谱工作站；LC-LX-H185C型台式高速离心机，上海力辰科技有限公司。1.2 药材与试剂北沙参、麦冬、当归、生地黄、枸杞子和川楝子药材经中国科学院新疆理化技术研究所刘戈宇研究员鉴定，分别为伞形科珊瑚菜属植物珊瑚菜Fr. Schmidtex Miq.的干燥根、百合科沿阶草属植物麦冬(L. f) Ker-Gawl.的干燥块根、伞形科当归属植物当归(Oliv.) Diels的干燥根、玄参科地黄属植物地黄Libosch.的新鲜或干燥块根、茄科枸杞属植物宁夏枸杞L.的干燥成熟果实和楝科楝属植物川楝Sieb. et Zuc
9、c.的干燥成熟果实。单味饮片质量经前期检测均符合要求，产地信息见表1。表1 一贯煎组方药材来源信息Table 1 Source information of Yiguan Decoction prescription medicinal materials序号北沙参麦冬当归生地黄枸杞子川楝子 批号产地批号产地批号产地批号产地批号产地批号产地 1BSSCF01内蒙古赤峰MDMY01四川绵阳DGMX01甘肃岷县SDHJZ01河南焦作GQZZN01宁夏中宁CLZJY01四川简阳 2BSSCF02内蒙古赤峰MDMY02四川绵阳GSMX02甘肃岷县SDHJZ02河南焦作GQZZN02宁夏中宁CLZJY0
10、2四川简阳 3BSSCF03内蒙古赤峰MDMY03四川绵阳GSMX03甘肃岷县SDHJZ03河南焦作GQZZN03宁夏中宁CLZJY03四川简阳 4BSSCF04内蒙古赤峰MDMY04四川绵阳GSMX04甘肃岷县SDHJZ04河南焦作GQZZN04宁夏中宁CLZJY04四川简阳 5BSSCF05内蒙古赤峰MDMY05四川绵阳GSMX05甘肃岷县SDHJZ05河南焦作GQZZN05宁夏中宁CLZJY05四川简阳 6BSSAG01河北安国MDHZ01浙江杭州DGLJ01云南丽江SDHXY01陕西咸阳GQZZW01宁夏中卫CLZCD01四川成都 7BSSAG02河北安国MDHZ02浙江杭州DGLJ0
11、2云南丽江SDHXY02陕西咸阳GQZZW02宁夏中卫CLZCD02四川成都 8BSSAG03河北安国MDHZ03浙江杭州DGLJ03云南丽江SDHXY03陕西咸阳GQZYS01青海玉树CLZCD03四川成都 9BSSAG04河北安国MDHZ04浙江杭州DGLJ04云南丽江SDHXY04陕西咸阳GQZYS02青海玉树CLZCD04四川成都 10BSSAG05河北安国MDHZ05浙江杭州DGLJ05云南丽江SDHXY05陕西咸阳GQZYS03青海玉树CLZCD05四川成都 11BSSSD01山东莱阳MDST01四川三台DGDC01甘肃宕昌SDHBA01河南博爱GQZYS04青海玉树CLZCQ01
12、重庆 12BSSSD02山东莱阳MDST02四川三台GSDC02甘肃宕昌SDHBA02河南焦作GQZYM01甘肃玉门CLZCQ02重庆 13BSSSD03山东莱阳MDST03四川三台GSDC03甘肃宕昌SDHBA03河南焦作GQZYM02甘肃玉门CLZCQ03重庆 14BSSSD04山东莱阳MDST04四川三台GSDC04甘肃宕昌SDHBA04河南焦作GQZHB01河北安国CLZHB01湖北恩施 15BSSSD05山东莱阳MDST05四川三台GSDC05甘肃宕昌SDHBA05河南焦作GQZHB02河北安国CLZHB02湖北恩施对照品毛蕊花糖苷（批号21123001）、藁本内酯（批号220318
13、04）、咖啡酸（批号20110501），均购自成都普菲德生物科技有限公司；对照品阿魏酸（批号110773-201313）、槲皮素（批号100081-201610）、5-羟甲基糠醛（批号111626-202114）、东莨菪内酯（批号110768-200504），均购自中国食品药品检定研究院；对照品洋川芎内酯I（批号21012505）、绿原酸（批号15060713）、伞形花内酯（批号17042603）均购自上海纯优生物科技有限公司；各对照品质量分数均94%。乙腈、甲酸，色谱纯，购自Fisher公司；甲醇，分析纯，购自北京化工厂；怡宝纯净水，购自华润怡宝饮料（中国）有限公司；其他试剂为分析纯。2 方
14、法与结果2.1 一贯煎基准样品的制备医方絜度10记载一贯煎处方为“北沙参、麦冬、当归各一钱五分，枸杞、生地各三钱，川楝子二钱。”古代经典名方关键信息表（7首方剂）3明确处方剂量与制法如下：北沙参、麦冬、当归各5.60 g，生地黄、枸杞子各11.19 g，川楝子7.46 g，水煎服。因按古代经典名方目录管理的中药复方制剂药学研究技术指导原则（试行）11明确水煎服应参照医疗机构中药煎药室管理规范12的相关规定，即药材浸泡30 min以上、加水量应没过药材1.01.5 cm为宜，滋补类药材应煎煮4060 min，并结合具体情况加以优化。本课题组前期以5-羟甲基糠醛、阿魏酸、毛蕊花糖苷和洋川芎内酯I含
15、量和干膏率为参考指标，赋以权重系数对一贯煎基准样品制备工艺进行综合评分，通过料液比、煎煮时间、煎煮次数、提取方式、干燥方式等单因素筛选，最终确定一贯煎基准样品制备方法：处方药材加12倍量，浸泡30 min，煎煮2次，武火加热煮沸后，文火煎煮60 min，采用100目纱布滤过，合并滤液，浓缩至400 mL，即为一贯煎标准煎液；精密移取一贯煎标准煎液5 mL于25 mL西林瓶中，置于80 预冷2 h的冷冻干燥机，冻干温度80 ，真空度（41）Pa，冷冻干燥24 h，取出压盖密塞，即得一贯煎基准样品（一贯煎冻干粉）。将北沙参、麦冬、当归、生地黄、枸杞子、川楝子各15批饮片采用随机数表法组合，编号为S
16、1S15，具体组合信息见表2。按上述工艺制备15批一贯煎基准样品以及单味饮片、单味饮片阴性样品。表2 15批一贯煎基准样品随机组合信息Table 2 Random combination information of 15 batches of Yiguan Decoction benchmark samples序号饮片批号 北沙参麦冬当归生地黄枸杞子川楝子 S1BSSCF01MDST04DGDC05SDHXY02GQZZN05CLZCQ01 S2BSSAG01MDMY04DGDC02SDHJZ03GQZYS02CLZCD01 S3BSSSD02MDHZ02DGDC04SDHJZ05GQZZN03CLZJY02 S4BSSSD05MDHZ05DGLJ01SDHBA02GQZHB01CLZCD04 S5BSSCF05MDMY05D
