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1、总糖测定蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化 合物，当含糖量在20200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正 比，故可比色定量。二、试剂：1、10100ppm 葡萄糖系列标准溶液：称取 1.0000g 葡萄糖，用水定容至 1000ml， 从中吸取 1、2、4、6、8、10ml 分别移入 100ml 容量瓶中，用水定容，即得浓度 为10、20、40、60、80、100ppm （ug/m 1）葡萄糖系列标准溶液。2、0.1%蔥酮溶液：称取0.1g蔥酮，溶于100m172%硫酸中，贮存于棕色瓶中， 于04C下存放。3、72%硫酸溶液。三、
2、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和 5ml亚铁氰化钾，沸水浴510min,定容，静置至上清，过滤。根据估计含糖量， 去滤液进行稀释，使糖含量在2080mg/L范围内。（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖2080ppm）、蒸馏水（空白）各2ml， 分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蔥酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴 中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯， 以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。根据样品溶液 的吸光度查标准曲线，得糖含量。四、结果计算：总糖
3、（以葡萄糖计，%） =cX稀释倍数X 10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm （ug/ml）；10-4：将 ppm 换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量 少等优点。2、该法按操作的不同可分为几种,主要差别于蔥酮试剂中硫酸的浓度（6695%）, 取样量（15ml）、蔥酮试剂用量（520ml）、沸水浴中反应时间（615min） 和显色时间（1030min）。这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中 任何一个,否则将影响分析结果。3、反应液中硫酸的浓度高达 60%以上，在此高酸度条件下，在沸水浴中加热， 可使双糖、淀粉等发生水解，再与蒽酮发生显色反应。因此测定结果是样液中单 糖、双糖和淀粉的总量。如要求测定结果不包括淀粉，应该用 80%乙醇作提取剂， 以避免淀粉和糊精溶出。此外，在测定条件下，纤维素也会与蒽酮试剂发生一定 程度的反应，因此应避免样液中含有纤维素。4、蒽酮试剂不稳定,易被氧化变为褐色，一般应当天配制，添加稳定剂硫脲后， 在冷暗处可保存 48 小时。5、此法要求样液必须清澈透明，加热后不应有蛋白质沉淀，如样液色泽较深， 可用活性炭脱色。
