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1、实验一高效液相色谱法-紫外法测定水中的苯酚含量一、实验目的1、熟悉高效液相色谱仪的结构2、掌握苯酚的高效液相色谱-紫外测定法3、熟练掌握高效液相色谱仪的操作二、实验原理苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，显酸性。苯酚是有机化工工 业的基本原料，可通过多种途径对环境水体造成污染，对人类、鱼类以及农作物 带来严重危害。根据国家环保部门有关规定，工作场所苯酚的最高允许质量浓度 为5 X10 - 6曜/L，饮用水中为2瞄/ L，地面水中为0.1 mg/ L。苯酚的测量方法有 多种，如漠化容量法、比色法、高效液相色谱法等。但前两种方法分析速度较慢、 精度较低，高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新
2、技术，具有分析速度快、 检测灵敏度高、操作简便、样品用量少等特点。三、仪器和试剂1、设备及试剂安捷伦高效液相色谱仪1100，紫外检测器，C18色谱柱。苯酚（分析纯），甲醇（色谱纯），二次蒸馏水。2、操作条件色谱柱为C18柱；流动相为甲醇/二次蒸馏水=80 ：20 （体积比）；检测波长为 270nm；流速为1.0 ml/ min；进样量为20pL。四、实验步骤1、标准曲线的制备称取纯苯酚600 mg于100.0 ml容量瓶中，用适量甲醇溶解，用甲醇稀释至 刻度。分别吸取该溶液（单位:ml） 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0于50 ml的容量 瓶中，用甲醇稀释至刻度。得到标准系列溶液
3、。分别采用高效液相色谱-紫外法 测定标准溶液，记录色谱峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲 线。2、样品分析将水样经过滤（0.45 um滤膜）处理后，测定其峰面积值，根据标准曲线进行 定量。五、实验数据1标准曲线的绘制苯酚体积，V （mL）0.01.02.03.04.05.0苯酚浓度，C（mg/mL）峰面积，A（AU）2样品分析数据样品水样1水样2123123峰面积，A（AU）浓度，C (mg/mL)六、数据处理仪器和试剂1、仪器： 岛津（SHIMADZU）LC-20A液相色谱仪： 流动 相：乙腈、MQ水（由铝箔纸包裹，防止其中产生藻类，堵塞进口）高压输 液泵：并联式微体积柱塞往复
4、泵（Prominence LIQUID CHROMATOGRAPH）型 号:LC-20AD 厂家:UFLC SHIMADZU 色谱柱：固定相填充物:十八碳（C18） 型号：Intertsil ODS-SP 参数：填充物粒径：5 “m 内径X长度：4.6X250 mm 检测器：二极管阵列检测器（PDA）型号：SPD-M20A电压：230V厂家： SHIMADZU脱气装置：型号：DQO-20A5进样装置：高压六通进样阀 两 个状态：Load:样品进入六通阀，未入色谱柱Inject：位于六通阀的样品进入色 谱柱种类：SIL-10A、SIL-10Ai、SIL-10ADVP淋洗液（洗针、洗阀）：甲醇移液
5、管2 mL、5 mL各一支 具塞离心管10 mL三支、1.5 mL 一次性离心管一支2.试剂：甲醇（色谱纯）；苯酚标准使用溶液（10 mg/L） 待测水样四、 实验步骤1标准系列配制 取苯酚标准使用液0.50、1.00、2.00 mL于10 mL 的具塞离心管中，用甲醇定容至5 mL,混匀。待测。2样品的制备 取水样 约1 mL于1.5 mL 一次性离心管中。待测。3色谱参数 色谱柱：C18柱；流动 相：乙腈、水；梯度洗脱程序：洗脱时间 0:00 4:00 4:01 5:00 5:01 8:00 乙腈（）65 65 75 75 65 65 流速： 1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：20 L； 检测器：二极管阵列检测器，检 测波长280 nm测定 测定标准系列，再测定样品。根据标准系列中苯酚的保留时间，定性确定 样品中的目标物。记录标准系列和样品中目标物的峰面积。五、数据记录与计算（1）标准系列c=4mg/mL的谱图及样品的谱图：样品谱 图（图2）中，三个明显高的峰的记录数据如下表
