紫外-可见分光光度法操作程序编制部门：质量部编号：S0P-QC083-03 页数：1/7起草人审核人QA审阅批准人起草原因：匚I新订 口修订说明：年 月曰年 月曰年 月曰年 月曰分发部门质量部、化验室执行日期 年 月曰目的： 规范紫外-可见分光光度法操作 氾围： 适用于分光光度法测定职贝：检验有关人员规程：分光光度法是通过测定被测定物质在特定波长处或 定波长范围内的光吸收度，对该物 质进行定性或定量分析的方法常用的波长范围为：（1） 200-400nm的紫外光区；（2） 400-760nm的可见光区；（3） 2.5-25um （按波数计为4000-400cm-1）红外光区所用仪器为紫外分光光度计、可见分光光 度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计为保证测量的精密度和准确度， 所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光 路长度）成正比，其关系如下式：A=lg1/T=ECL式中A为吸收度；T为透光率；E为吸收系数，米用的表示方法是（E^%1cm），其物理意义为当溶液浓度为1% （g/ml）, 液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；L为液层厚度，cm。
紫外-可见分光光度法检验操作程序编制部门：质量部编号：S0P-QC083-03页数：2/7物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数是该物质的物理常数当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后，可用同样条件将该供试品配成溶液，测 定其吸光度，即可由上式计算出供试品中该物质的含量在可见光区，除某些物质对光有吸 收外，很多物质本身并没有吸收，但可在一定条件下加入显色试剂或结构处理使其显色后再 测定，故又称比色分析由于显色时的影响呈深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的 仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作4.1紫外分光光度法4.1.1仪器的较正或检定由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用 的仪器进行全面较正检定外，还应于测定前较正测定波长，常用汞灯中的较强谱线237.83nm/253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、 435.83nm、546.07nm与576.96nm,或用仪器中的氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行较正， 玻璃在 279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm 与 637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可用波长校正用，但因来源不同会有微小的差别，使用时 I、4、，亠应汪意。
波长/nm235 （最小）257 （最大）313 （最小）350 （最大）吸收系数E^%1cm124.5144.048.6106.6吸收系数的范围123.0-126.0142.8-146.247.0-50.3105.5-108.5吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定，取在12O0C 干燥至恒重的基准重铬酸 钾约60mg,精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml,在规定的波长处称定并 计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如上表，应符合表中的规定杂散光的检查可按下页表的试剂和浓度，配制成水溶液，置lcm石英吸收池中，在规 定的波长处测定透光率，应符合表中的规定试剂浓度% (g/ml)测定用波长nm透光率%碘化钠1.00220<0.8亚硝酸钠5.00340<0.84.1.2对溶剂的要求测定供试品前，先应检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即用 lcm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸光度，溶剂 和吸收池的吸收度，在220-240nm范围内不得超过0.40,在241-250nm范围内不得超过0.20, 在251-300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。
4.1.3测定法测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的 石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸光度，以核对供试品的吸收峰 波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否 则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸光度最大的波长作为测定波长， 一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小仪器的狭缝波带宽度应小于 供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时 供试品的吸光度不再增加为准，由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的 吸光度后应减去空白读数，再计算含量用作鉴别和检查项目的方法，分别按各品种项下的方法进行，鉴别项下吸光度读数的 范围可根据制剂的实际含量和供试液的稀释倍数估算用于含量测定的方法一般有以下几种1）对照品比较法按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含测试成 分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100%±10%，所用溶剂也完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下计算供试品中被测溶液的浓度:Cx=（Ax/Ar）Cr式中 CX=%供试品溶液的浓度；ax=为供试品溶液的吸收度; Cr=%对照品溶液的浓度； Ar=%对照品溶液的吸收度-（2）吸收系数法按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，再以该产品在规定条件下的吸收系数计算含量.用本法测定时，应注意仪器的校正和检定.先求出被测样品的E11cm%值，再与规定的Ei1cm%值比较,可计算出供试品的含量.Ei% （样品）= A 1CM CXL式中A为供试品溶液测德的吸收度值;C为供试品溶液的百分浓度，即100ml中所含溶质的克数（g/ml）;L为吸收池的光路长度（cm）.E1%］（样品） 供试样品的含量％= E1%皿（标准） X 100式中E1% （样品）为根据前式计算出供试品的百分吸收系数；1cmEi%为药典或药品标准中规定的百分吸收系数.1cm（3）计算分光光度法采用计算分光光度法应慎重•本法有多种，使用时均应按各种项下规定的方法的方法进行.当吸光度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变化可对测定编制部门：质量部 编号：S0P-QC083-03 页数：5/7结果造成显著影响，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致，若测定时不用对照品，如维 生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定.(4) 比色法用比色法测定时，应取对照品同时操作。
除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的 溶剂代替对照品或供试品溶液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理在规定 的波长处测定对照品和供试品溶液的吸光度后，按紫外分光光度法项下(1)对照品比较法 的计算供试品浓度当吸光度和浓度关系不呈线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体 积，显色后测定各份溶液时，应取份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充同一体积，显色后测 定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在 标准曲线上求出其含量4.1.4注意事项：(1) 试验中所用的量瓶，移液管均应经检定校正、洗净后使用.(2) 使用的石英吸收池必须洗净.用于盛装样品、参比及空白溶液的吸收池，当装入 同一溶剂时，在规定波长测定吸收池的透光率，如透光率相差在30%以下者可配对使用， 否则必须加以校正.(3) 取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两测.装盛样品溶液以池体积的4/5为度，使用 挥发性溶剂时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶 剂挥发后残留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭 净.吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同.使用后用溶剂及冲洗干净，晾干防尘保 存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸(3： 1V/V)混合液浸泡后，洗净备用.如 铬酸钾清洁液洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的的铬酸钾结晶会埙 坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。
紫外-可见分光光度法检验操作程序编制部门：质量部编号：SOP-QC083-03页数：6/7每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀一批溶剂4） 称量应按药典规定要求配制测定溶剂时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时 所取容积一般应不少于5ml.含量测定供试品应取2份•吸收系数检查也应称取供试品2份, 平行操作，每份结果对平均值的偏差应在土0.5%以内，作鉴别或检查可取样品1 份5） 供试品测试溶液的浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液 的吸收度以在0.3-0.7之间为宜，吸收度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪 器吸收度线性范围，配制合适的读数浓度6） 用作晶型、异构体限制检查或含量测定，试样制备和具体测定方法均按各品种项 下有关规定操作4.2红外分光光度法4.2.1仪器及其校正，可使用傅里叶变换红外光谱仪或色散型红外分光光度计用 聚苯乙烯薄膜（厚度约为0.04mm ）校正仪器，绘制其光谱，用3027cm -12851cm -1、 1601 cm-1、1028 cm-1、907 cm-1处的吸收峰对仪器的波数进行校正在3000cm -1 区间允许相差±5 cm-1以内，在1000 cm -1区间允许相差±1 cm-1以内。
仪器的分辨率要求在3110-2850 cm-1范围内应能清晰的分辨出7个峰，2851 cm-1与2870 cm -1吸收带的分辨深度不小于18%透光率，1583 cm-1与1589cm -1吸收 带的分辨深度不小于12 %透光率仪器的标称分辨率，除另有规定外，应不低于2 cm-14.2.2 试样的制备方法除另有规定外，用作鉴别时应按照药典委员会编订的《药 品红外光谱集》第一卷（1995年版）与第二卷（2000年版）第三卷（2005 年版）收载的光谱图所规定的制备方法制备具体操作技术可参见《药品红外光 谱集》的说明4.2.3 正文中的各种项下规定“应与对照的图谱（光谱集XX图）一致”系指《药 品红外光谱集》第一卷（1995年版）与第二卷（2000年版）第三卷（2005年版）紫外一可见分光光度法检验操作程序编制部门：质量部编号：S0P-QC083-03页数：7/7的图谱4.2.4具有多晶现象的固体药品由于供测定的供试品晶型可能不同，导致绘制的谱图与《药 品红外光谱集》所收载的光谱图不一致，遇此情况时，应按该药品光谱图中备注的方法进行 预处理后再绘制比较由于各种型号的仪器性能不同，试样制备时碾磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均 会影响光谱的形状。
因此，进行光谱比较时，应考虑各种因素可能造成的影响附件：SOR-ZL103-01。