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1、陆绍龙广西医科大学七年制临床医学 10 级 4 班摘要：目的：1）掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理；2）熟悉 不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用；方法：通过唾液淀粉酶在不同 pH环境中水解淀粉，测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光 度值，根据实验数据判断酶的最适pH；结果：当pH二时，唾液淀粉酶的活性最 高。关键词：唾液淀粉酶pH 分光光度计前言：酶学与医学的关系密切。人体的许多疾病和酶都密切相关。酶分子中的 许多极性基团，在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也 各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物 结合或具
2、有最大的催化活性。此外，pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改 变，因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。人的唾液中99%是水，有机物主 要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫 氰离子等。唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水分解为麦 芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内，唾液中的氯和硫氰酸盐 对此酶有激活作用。食物进入胃后，唾液淀粉酶还可继续使用一段时间，直至 胃内容物变为pH值约为的酸性反应为止。正文：1. 材料与方法：仪器：吸量管（5mL, 1mL），试管若干，试管架，小烧杯，洗耳球，721G-722G 分光光度计，恒温箱（含温度计）
3、，一次性纸杯，pH试纸。试剂：L淀粉，L NaHPO溶液，L NaHPO溶液,蒸馏水，唾液，碘液。2 4 2 42. 操作步骤1）1.不同pH缓冲液配制按下表加样，最后加蒸馏水稀释至10ml。pHL Na HPO 溶液（mL）24L NaH PO 溶液（mL）24注：应用pH值试纸来确定所配溶液pH。2）唾液的获取先漱口 1 2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯 子中。3）淀粉用量的确定123空白缓冲液L 淀粉 唾液（稀释 10 倍）混匀，37C水浴，然后向每管加2滴碘液H O62混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其用量4）酶稀释液的倍数确定稀释倍数510152025
4、30酶液（mL）1H O（mL）24稀释倍数51015202530空白缓冲液（mL）L 淀粉由第3步操作确定唾液混匀，37C水浴，然后向每管加2滴碘液HO26666666混匀观察现象，并选择适中一支，记录其稀释倍数5）最适 pH 值的确定pHpH缓冲液某倍数唾液（由第四步确定）H2O6由第 3步操作确定混匀，37C水浴，然后向每管加2滴碘液666666混匀，37C水浴，然后向每管加2滴碘液A660以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液的A值，记录好数据。6）实验数据据处理以A660为纵坐标，pH为横坐标作图。3. 结论：根据实验数据做出的平滑曲线图可知，最低点对应的 pH 值即为唾液 淀粉
5、酶的最适pH值，所以由本次实验得出唾液淀粉酶的最适pH值为。4 讨论： （1）此次实验是根据唾液淀粉酶催化底物水解量来测最适 pH 值，因 此在唾液淀粉酶活性最高时要保证底物过量，淀粉分解的越多，A值就小；(2)由实验可知：过酸过碱都会抑制酶的活性，使之淀粉的分解减少，A值增大；(3)本次实验要选取合适的底物浓度，如浓度过高火过低，可导致颜色过 浓或过浅，难以判断；5.参考文献1 吴耀生医学生物化学与分子生物学实验指南【M】：人民卫生出版社，2007，74-752 查锡良、周春燕生物化学【M】第七版北京：人民卫生出版社.3 关爱萍.“唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”的探究性实验教学设计J.生 物学
6、教学, 2004,(09)4 尚渤程、黎一苇.人体常见的pH值【J】生物学教学.2009； 125 吴举宏.关于“pH对酶活性的影响”3种实验方案的比较分析.生物学通报，2008, 434 46 王雯斌，解金辉.“不同pH对酶活性的影响”实验方法的讨 论及改进【J】.中学生物教学，2008.7 许冰、原媛、赵文献.pH值对酶活性影响的实验观察【J】临床合理用 药杂志. 2010; 3(10) : 358 刘培生，叶宝珍.唾液淀粉酶对淀粉的消化作用实验的改进J.实验教学 与仪器, 1999,(10)9 林焕棠.对唾液淀粉酶对淀粉的消化作用实验的探索J.生物学教学， 1994，(07)10 周照县. 对一些参考书修改“唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”实验步骤的 一点看法生物学通报，1991,(11)11 徐丙容. “探究唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”分组实验实录.唾液淀粉酶最适 pH 值的测定陆绍龙广西医科大学七年制临床医学 10级4班4组
