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1、细胞治疗实验室工艺流程细胞治疗实验室工艺流程按种类分为：一、试剂耗材入库记录，试剂耗材使用记录试剂配制记录，配制的试剂使用记录.入库需要记录产品的名称、批号、有效期、数量、存放位置、入库时间。试剂耗材使用记录包括名称、批号、用途，时间。试剂配制记录包括原料的名称、批号，配制试剂的时间、有效期、批号。配制的试剂使用记录包括使用的时间、批号、用途.二、实验记录，包括采血、分血、细胞接种、补液、质检、回输。采血有2个信息实验室需要记录，包括浓缩白细胞体积和血浆体积。分血有需要记录使用的分离液的量和单个核细胞数量。细胞接种需要记录DC、CIK、CD3AK、y5T、NK等细胞接种数量、培养基体积、细胞因
2、子添加的量.补液需要记录补液的时间和体积。质检需要做细菌真菌培养、内毒素检测、革兰氏检测，记录做这些质检的时间.回输需要记录回输的细胞种类、时间、细胞体积、细胞数量。三、细胞检测记录，包括细菌真菌培养，内毒素检测，革兰氏检测，流式检测.记录内容包括样品的来源、检测时间、结果、检测人.四、清洗消毒记录。包括清洗消毒的时间、方式、消毒有效期。细胞培养流程图米血分血细胞计数细胞接种UDC细胞CIK细胞CD3AK细胞VST细胞NK细胞其它细胞It2小时后第2天加根据细胞根据细胞根据细胞洗版CIK混合生长情况生长情况生长情况n因子补液补液补液第5天加成熟剂1根据细胞回输前3回输前3回输前3生长情况天细菌
3、真天细菌真天细菌真第6天加补液菌培养1菌培养菌培养成熟剂2n回输前3回输前12回输前12回输前12第7天收天细菌真小时革兰小时革兰小时革兰氏染色氏染色氏染色细胞，计算困培养细胞存活率、细胞数回输前12计算细胞计算细胞计算细胞后冻存或小时革兰存活率、细存活率、细存活率、细回输氏染色胞数后给胞数后给胞数后给病人回输病人回输病人回输计算细胞存活率、细胞数后给病人回输NO：自体细胞制剂制备记录患者基本情况采血日期:姓名年龄性别科室病案号主管医生床号传染病临床诊断病理切片细胞制备标准操作记录分血数量单位日期操作人复核人备注自体血浆体积ml白细胞体积mlFicol体积ml批号：PBMC总量X109DC细胞
4、制备数量单位日期操作人复核人备注1、PBMC用量X1082、铺瓶（板）瓶（板）3、加DC培养液体积ml4、DC诱导因子（100X）ml批号：5、第五天加DC成熟剂K100X）ml批号：6、第六天补加DC成熟剂2（100X）ml批号：7、第七（八）天收集DCX107CIK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、添加 IFN-rIU2、PBMC用量X1083、接种体积ml4、添加CIK混合因子（100X）ml批号：5、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次第6次CD3AK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、添加CD3AK混合因子(100X)ml批号：2、PBMC用量X1083、接种体积ml4、
5、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次Y6T细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、PBMC用量X1092、接种体积ml3、添加y6T混合因子(100X)ml批号：4、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次NK细胞制备数量单位日期操作人复核人备注1、PBMC用量X1082、接种体积ml3、添加NK细胞混合因子(100X)ml批号：4、补液第1次ml第2次第3次第4次第5次细胞冻存及复苏标准操作记录细胞冻存标准操作记录日期编号细胞 类型细胞数量冻存数量 (支)冻存液 编号存放 位置操作人复核人备注细胞复苏标准操作记录日期编号细胞类型细胞数量复苏数量 （支）复苏用途存放 位置操作人复核人备注姓名年
6、龄性别科室病案号床号自体细胞制剂回输记录姓名年龄性别 科室病案号床号次数日期细胞类型批号体积（ml）回输方式运送人接收人复核人123456789101112131415161718自体细胞制剂检控记录次数细胞外观细菌真菌 培养革兰氏染色细菌内毒素最终检定结果存;回输细胞批 号均匀悬浊液，无异物第一次回输前3 天每次回输当天每次回输当天需经检定合格后 方可回输存;N1口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格2口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格3口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格4口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格5口是 否阳性口阴性阳性口
7、阴性阳性口阴性口合格不合格6口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格7口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格8口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格9口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格10口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格11口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格12口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格13口是 否阳性口阴性阳性口阴性阳性口阴性口合格不合格CIK细胞培养标准操作流程一、溶液的配置1、热灭活自体血浆的制备：将自体血浆装在无菌的离心管内，放入56摄氏度水浴锅内热灭活 40分钟,取出用2500
8、转离心10分钟，取出上清备用。2、IFNr母液（1000X）:用无血清培养基配成100万IU/ml.3、CIK混合因子（100X）：冰箱4度保存。4、CIK完全培养基：无血清培养基加1%-2%热灭活自体血浆.二、CIK细胞制备：1、血细胞单采机采集病人浓缩白细胞和血浆（80-100ml）。2、准备2支50ml离心管，每管加入淋巴细胞分离液20ml。3、将浓缩白细胞从血袋中取出，直接等量加到上述2支50ml离心管淋巴细胞分离液上面，2000 转离心25分钟,升降速调到最低值。4、取出上层的血浆收集到一支50ml离心管中，余下的部分除红细胞外全部收集到2支50ml离 心管中，加生理盐水到50ml，
9、1500转离心10分钟，去除上清，合并2支管内的细胞到一支 50ml离心管中，加50ml生理盐水，取20ul样品用于计数，1200转离心7分钟，去除上清。5、 所有的血浆留出12支5ml用于回输，其余全部56摄氏度灭活40分钟，灭活完成后2500转 离心10分钟，收集上清备用。6、 将细胞用CIK完全培养基配成1X106/ml，加入IFN-r母液至1000IU/ml，接种1个细胞培养袋， 袋内加200ml CIK完全培养基。7、24小时后，按1： 100加入CIK混合因子。8、第5天，按4倍稀释添加含300IU/ml IL2的CIK完全培养基。9、 第8天到第9天，按2倍稀释添加含300IU/mlIL2的CIK完全培养基。同时取样做细菌真菌 培养。10、以后每隔一天按2倍稀释补一次液，第一次回输前1天取样送检做革兰氏染色检查。11、等拿到细菌真菌培养结果后，检查所有结果是否为阴性。CIK培养到第10天-15天内回输。12、回输时收集细胞于离心管内
