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1、word验证文件类别：编号：部门：XXXX微生物限度检查方法适用性试验方案XXXXX公司2016年 / XXXX微生物限度检查方法适用性试验方案审批起草起草部门签名日期质量管理部年月日审核审核部门签名日期质量管理部年月日批准批准人签名日期年月日目 录1、 适用X围2、 目的3、概述4、适用性所需要的仪器设备与文件5、可承受的限度X围标准6、测试方法7、异常情况处理8、测试结果9、结论10、再适用性周期11、附表1、适用X围本适用性方案适用于XXXX微生物限度检查的方法适用性试验。2、目的因中华人民某某国药典2015年版颁布实施，为确保该产品的微生物限度检查方法的可靠性和可操作性，故对其检验方法
2、进展适用性试验，以符合中华人民某某国药典规定。3、概述根据中华人民某某国药典2015年版 四部通如此1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，对XXXX进展需氧菌、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌检查方法的适用性试验，以确认供试品的抑菌活性与测定方法的可靠性。3.2适用性试验时间与批号： 年 月 日开始分别对 、 、 三批XXXX进展独立的方法适用性试验。部门某某职务职责4、仪器设备与文件器具名称规格型号仪器编号检定日期检定单位有效期资料名称存放地点5、可承受的限度X围标准项目标准规定需氧菌总数霉菌和酵母菌总数控制菌不得检出大肠埃希菌1g5.2需氧
3、菌、霉菌和酵母菌计数方法采用中华人民某某国药典2015版四部通如此1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中表示的平皿法中的倾注法。控制菌检查方法采用1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中大肠埃希菌检查方法6、测试方法6.1供试品 XXXX 批号： 6.2.1采用符合中国药典规定的枯燥培养基，并经过培养基适用性检查。胰酪大豆胨琼脂培养基 批号： 胰酪大豆胨液体培养基 批号：沙氏葡萄糖琼脂培养基 批号： 沙氏葡萄糖液体培养基 批号：麦康凯琼脂培养基 批号： 麦康凯液体培养基 批号： MUG培养基 批号： 6.2.2菌种均购于：菌种名称编号购入日期传代日期传代次数枯草芽孢杆菌第 代
4、金黄色葡萄球菌第 代铜绿假单胞菌第 代大肠埃希菌第 代白色念珠菌第 代黑曲霉第 代6.3.1需氧菌、霉菌和酵母菌的检查菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌适量至胰酪大豆胨液体培养基中， 3035制成适宜浓度的菌悬液，备用。接种白色念珠菌适量至沙氏葡萄糖液体培养基中，2025制成适宜浓度的菌悬液，备用。接种黑曲霉适量至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液，备用。菌悬液制备后假如在室温下放置，应在2小时内使用；假如保存在28可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在适用性过程的贮存期内使用。接种大肠埃希菌适量至胰酪大豆胨液体培养基中， 3035制成适宜
5、浓度的菌悬液，备用。菌悬液制备后假如在室温下放置，应在2小时内使用；假如保存在28可在24小时内使用。菌落数确认稀释级别104稀释级别105稀释级别106稀释级别107枯草芽孢杆菌cfu/ml金黄色葡萄球菌cfu/ml铜绿假单胞菌cfu/ml大肠埃希菌cfu/ml白色念珠菌cfu/ml黑曲霉cfu/ml6.4需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数计数方法适用性试验取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，制成1：10的供试液。6.4.2.1试验组 分别取5份1：10的供试液各10ml分别参加0.1ml试验菌液金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉混匀，使每
6、1ml供试液中含菌量不大于100cfu。取1ml含试验菌液的供试液分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿。另取1ml含白色念珠菌和黑曲霉的供试液分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿。按平皿法测定其菌落数，胰酪大豆胨琼脂培养基用于需氧菌总数计数，沙氏葡萄糖琼脂培养基用于霉菌、酵母菌总数计数。6.4.2.2供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液替代菌液同试验组操作。6.4.2.3菌液组 取不含中和剂与灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作参加试验菌液并进展微生物回收试验。6.4.2.4阴性对照 取相应稀释液代替供试
7、液和菌液同试验组操作。6.4.3培养和计数： 胰酪大豆胨琼脂培养基平板在3035培养35天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在2025培养5天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规如此报告菌数。假如同稀释级别两个平板的菌落平均数不小于15，如此两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。6.4.4计算公式试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.52X围内，可用所用的供试液制备方法与计数方法进展该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。假如还存在一株或多株试验菌的回收达
8、不到要求，那么选择回收最接近要求的方法和试验条件进展供试品的检査。6.5控制菌 大肠埃希菌6.5.1供试液制备取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，制成1：10的供试液6.5.2试验分组6.5.2.1试验组 取制备好的1:10的供试液10ml，参加0.1ml含菌数50100cfu的大肠埃希菌菌悬液，置100ml灭菌胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，置3035培养1824h。6.5.供试品组取制备好的1:10的供试液10ml，置100ml灭菌胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，置3035培养1824h。6.5.阴性对照组取制备好的PH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，置
9、100ml灭菌胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，置3035培养1824h。6.5.取稀释液10ml代替供试液，参加0.1ml 50100cfu的大肠埃希菌菌悬液，置100ml灭菌胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，置3035培养1824h。6.5.3取上述培养物1ml，接种至100ml的麦康凯液体培养基中，4244培养2448小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035培养1872小时。假如麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进展别离、纯化与适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；假如麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。大肠埃
10、希菌的鉴定应显MUG与靛基质阳性。假如试验组检出试验菌，可按此供试液制备法和控制菌检查法进展供试品的该控制菌检查；假如试验组未检出试验菌，应采用其他方法消除供试品的抑菌活性，并重新进展方法适用性试验。7、异常情况处理严格按照微生物限度检查法操作，如在检测中出现不符合要求的情况出现，分析问题原因后，决定是否需对本方案中设定的XXXX的微生物限度检查方法进展修改，并重新进展方法适用性试验。8测试结果8.1需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验结果见附表1至3。8.2大肠埃希菌检查方法适用性试验结果见附表4-6。9结论10再适用性周期因其它因素变更导致XXXX的物料性质改变时，需要对本方案进展调整后作方法学再适用性试验。10.2国家相关微生物限度检查标准修改后需要对本方法重新进展方法再适用性试验。
