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1、湖南大学研究生学位研究生专业课程考试考试科目名称:现代分子生物学姓名：李谕 学号： 专业: 生物学 一简答题(40分，每题10分)1. 请举出细胞中多种RN分子的名称,特性和功能。(至少列出5种）答:mA（信使A)原核生物N一般5端有一段不翻译区，称前导顺序,3端有一段不翻译区,中间是蛋白质的编码区,一般编码几种蛋白质。真核生物RA(细胞质中的）一般由端帽子构造、端不翻译区、翻译区(编码区)、3端不翻译区和3端聚腺苷酸尾巴构成分子中除m7G构成帽子外,常具有其她修饰核苷酸，如m6A等。真核生物mRNA一般均有相应的前体。从DN转录产生的原始转录产物可称作 原始前体（或NA前体)。一般觉得原始前
2、体要通过hnN核不均-RN的阶段,最后才被加工为成熟的mRNA。功能:从(DN)转录合成的带有遗传信息的一类单链（RNA）,它在上作为蛋白质合成的模板,决定肽链的排列顺序。tRNA（转运NA）三叶草形二级构造,5末端具有G（大部分）或C。3末端都以AC的顺序终结。有一种富有鸟嘌呤的环。有一种反密码子环,在这一环的顶端有三个暴露的碱基,称为反密码子(antiodo）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一种胸腺嘧啶环。功能：重要是携带氨基酸进入核糖体，在mNA指引下合成蛋白质。即以mR为模板，将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序。rRN(核糖体RNA）RA一般与核糖
3、体蛋白质结合在一起,形成核糖体（iboome）,如果把rRNA从核糖体上除掉，核糖体的构造就会发生塌陷。原核生物的核糖体所含的rRN有5S、16S及23S三种。RNA在蛋白质合成中的功能尚未完全明了。但1S的rRA3端有一段核苷酸序列与mRNA的前导序列是互补的，这也许有助于mRA与核糖体的结合。miRA：MiroRA（iRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RA,其大小长约202个核苷酸。成熟的mRNs是由较长的初级转录物通过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体,通过碱基互补配对的方式辨认靶mRNA，并根据互补限度的不同指引沉默复合体降解靶
4、mRN或者阻遏靶A的翻译。近来的研究表白miRA参与多种各样的调节途径，涉及发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。snRN (malluclearRNA，小核RNA）。它是真核生物转录后加工过程中NA剪接体(iceosom）的重要成分。发既有五种snRNA,其长度在哺乳动物中约为100215个核苷酸。snRNA始终存在于细胞核中,与0种左右的核内蛋白质共同构成RNA剪接体,在RA转录后加工中起重要作用。某些RNPs和剪接作用密切有关,它们分别与供体和受体剪接位点以及分支顺序互相补。其中位于核仁内的snRNA称为核小体RNA（smllunloa RA),参与RNA前体
5、的加工及核糖体亚基的组装。. 试述酵母双杂交技术的原理及应用。原理：诸多真核生物的位点特异转录激活因子一般具有两个可分割开的构造域,即NA特异结合域（DNA-bining doin,B)与转录激活域（anscrptonal actiti doma，A)。这两个构造域各具功能，互不影响。但一种完整的激活特定基因体现的激活因子必须同步具有这两个构造域,否则无法完毕激活功能。不同来源激活因子的B区与结合后则特异地激活被B结合的基因体现。基于这个原理，可将两个待测蛋白分别与这两个构造域建成融合蛋白，并共体现于同一种酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生互相作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使D与D形成一种
6、完整的转录激活因子并激活相应的报告基因体现。通过对报告基因表型的测定可以很容易地懂得待测蛋白分子间与否发生了互相作用。 酵母双杂交系统由三个部分构成:(1)与融合的蛋白体现载体，被体现的蛋白称诱饵蛋白(bai)。(2)与D融合的蛋白体现载体，被其体现的蛋白称靶蛋白(rey)。()带有一种或多种报告基因的宿主菌株。常用的报告基因有IS3,URA3,La和ADE2等。而菌株则具有相应的缺陷型。双杂交质粒上分别带有不同的抗性基因和营养标记基因。这些有助于实验后期杂交质粒的鉴定与分离。根据目前通用的系统中D来源的不同重要分为GAL系统和LeA系统。后者因其D来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性,因此
7、可以减少假阳性的浮现。应用:(1)检查一对功能已知蛋白间的互相作用。(2)研究一对蛋白间发生互相作用所必需的构造域。一般需看待测蛋白做点突变或缺失突变的解决。其成果若与构造生物学研究结合则可以极大地增进后者的发展。(3)用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cNA文库，以研究蛋白质之间互相作用的传递途径。(4）分析新基因的生物学功能。即以功能未知的新基因去筛选文库。然后根据钓到的已知基因的功能推测该新基因的功能。简述对天然质粒进行人工构建或改造的原则。答：质粒(plsid)是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的,与细菌或细胞共生的遗传成分。一般可以是:修改 ORI(复制起始位点）添加抗生素抗性基因添加
8、MCS(多克隆位点）区域敲除转座子敲除不用的蛋白编码段4. 请描述修正后的中心法则内容。答：中心法则(geeic cetldogm),是指遗传信息从NA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质,即完毕遗传信息的转录和翻译的过程。也可以从DN传递给DNA，即完毕D的复制过程。也可以是逆转录过程。这里遗传信息的转移可以分为两类:第一类用实线箭头表达，涉及DN的复制、RNA的转录和蛋白质的翻译,即ADA（复制）;NANA（转录);RN蛋白质(翻译)。这三种遗传信息的转移方向普遍地存在于所有生物细胞中。第二类用虚线箭头表达,是特殊状况下的遗传信息转移,涉及RNA的复制，RN反向转录为NA和从DNA直接翻译
9、为蛋白质。即RAN(复制)；RNANA(反向转录)；N蛋白质。NA复制只在RNA病毒中存在。反向转录最初在RNA致癌病毒中发现,后来在人的白细胞和胎盘滋养层中也测出了与反向转录有关的反向转录酶的活性。至于遗传信息从DNA到蛋白质的直接转移仅在理论上具也许性,在活细胞中尚未发现。二. 实验设计题(0分)运用你所学的分子生物学知识和也许的实验经验，设计如何去研究一种新基因的生理功能。实验设计方案应涉及实验目的，实验内容，技术路线,预期成果与讨论,意义等。实验目的； 研究一种新基因的生理功能实验内容:通过该基因的体现量对表型影响来观测有关基因的功能。技术路线：1 运用生物信息学措施分析基因的功能。重
10、要通过序列比对预测基因功能和运用生物信息学措施分析基因芯片数据分析。根据同源性可从数据库中查找已知顺序的同源基因。根据进化的有关性可从已知的同源基因推测新基因的功能。2 基因失活在基因功能分析的作用。重要涉及基因剔除（koc-out）、反义R技术、插入突变、NA干扰等。3 基因的超体现用于功能检测。原理:超量体现是指将目的基因全长序列与高活性的构成型或组织特异型启动子融合,通过转化获得该基因产物大量积累的植株,从而扩大该基因在生理生化过程中的效应,这部分扩大的效应带来的与正常植株在多种表型上的差别有助于协助理解基因功能。重要逆境调控基因微小的体现变化就可以引起下游基因的积累效应,有也许使生物体表型发生可评估的变化,使其功能凸现。4 杂交原理的措施检测RN体现水平。rthern印迹（Norhernt)与T-C措施。5 蛋白质水平检测基因体现：选择相应的组织/细胞，以Wetrnlo、免疫组化检测目的蛋白的体现。预期成果:如果该基因缺失，该植株抗寒性削弱，过体现,抗寒性增强，则阐明该基因功能与抗寒性有关。讨论：也许基因的过体现或者缺失与抗寒性体现不明显,也许与抗寒性与多种基因共同作用。意义：对该信号转导途径有了更深刻理解,理解抗性基因在信号途径中作用。
