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1、利用溶血程度指数 法校正溶血标本血清钾离子测定研究钱高潮 黄旭东 丁志祥 金文涛 张琪常州市中医医院 检 验科 常州 213003摘要 目的 对于一些不宜重新 抽取血液的溶血标本，通过全自动生化分析仪中血清信息功能溶血程度H 与血钾的相关性，探索一种简单方便的校正 公式检测溶血标本中血钾浓度，供临床参考。 方 法分析溶血程度H 与 血钾的相关性并建立回归方程，研究不同人群中H=50 时血钾浓度是否存在差异并通过外加溶血标准 液和制备溶血标本两种方法进行验证。结果H与K +成正相关（r=0.9996）,叫方程 y=0.1068H+0.2789，当 H 在 1200 （Hb 约为 95g/L）之间
2、成线性；经单因素方差检验 ，新生儿、成年男性和成年女性之间差异无统计学意义；两种方 法验证均表明计算得到的K +与实际检测值之间差异无统计学意义，理论值平均相对误差3.0%，最大相对误差7.0%。结论 通过全自动生化分 析仪中血清信息功能溶血程度H 和公式 K未水溶-0.1068H-0.2789能比较准确的测算出溶血标本中真实血钾浓度，这个公式不受 患者年龄、性别的影响。关键 词 溶血； 溶血程度 H ；血钾鉴于人红细胞脆性 较大 , 多种原因可使 标本发生不同程度的溶血, 直接影响测定结果的准确性 1-5 。溶血会对许多检验结果产生影响，尤其在血钾检测中影 响非常明显，因为人体体液中98%的
3、 钾分布于细胞内液，细胞外液只 占 2%，钾在组织细胞内的平均浓度为150mmol/L，红细胞内钾浓度 为105mmol/L,血清中钾浓度仅为3.55.5mmol/L ,红细胞内钾浓度约 为血清钾浓度的20倍，溶血后红细胞中的钾会释放到血清中，引起血钾浓度的升高, 因 此标本溶血是血钾误差的主要原因之一 6-8 。溶血标本为一类不合格标本，对于因采集、运输、保存不当等原因造成溶血必须查找原因，避免或降少溶血的发生，而对于容易溶血的标本（如儿科标本）、有 红细胞结构异常的标本，血钾的检验结果很难 保证。解决该问题的关键在于检验与临床的密切沟通。但有时临床有不方便立即复查的情况，以及其他因素不宜重
4、新抽取血液标本时 ，如果能探索出一个根据标本异常情况程度对检验结果进行校正的 方法，给临床一个比较准确的报告，对临床将非常有意义。溶血后标本血钾的增高主要是由于红细胞被破坏而造成红细胞内的血钾释放所致。血清中血红蛋白的含量能直接反映出标本的溶血程度。如 能通过检测血清中血红蛋白的含量，计算出因溶血造成血钾增高的 部分，检测的血钾减去因溶血增高的血钾就能消除溶血对血钾的影 响。现在配有血清信息功能的生化分析仪（如日立、罗氏、岛津系列 生化分析仪 ）均可通 过血清信息中溶血程度（Hemolytic简写：H）指数法直接测定Hb,试剂单一稳定，自动简9便 。鉴于上述思路，我们对溶血标本血钾的测定进行了
5、研究，以期找到一种比较方便的检测方法。材料与方法9.1 标本来源 江苏省常州市中 医医院 2010年 6 月 至 2010年 12 月住院新生儿40例（120天）、成年男性40例（2068岁）、成年女性40例（2173岁）9.2 试剂与主要仪器： 自配 Tris-HCl 缓冲液（ pH7.4）；6.1 mmol/LKCl 标准液；胆红素标准液（上海生物制 品研究所提供）；日立 7600全自动生化分析仪； -70冰箱（SANY）O6.2 溶血程度 H 及血钾的测定按日立7600全自 动 生化分析仪操作说明书要求设定 血清信息使用项目样品吸量为10山Tris-HCl缓冲液吸量为190山采用速率法，
6、反应时间10分钟。设定血清信息参数 C=1,B=121000； 血钾的测定选用离子选择电极间接法。6.3 溶血程度H 与血钾相关性取抗凝血，离心去 除血浆，用生理盐水洗涤红细胞3次，以压积红细胞的容积为准，加入等体积的生理盐水， -70冻存1小时，立即放入37水箱5分钟，反复冻溶2次，3000转离心5分钟，分离出Hb溶液，并用生理盐水调节至H=200的标 准液，然后用生理盐水稀释成H为150， 100， 75， 50， 45， 40， 35， 30， 25， 20， 15， 10， 8， 6， 5，4, 3, 2, 1共20种浓度Hb溶液,检测血钾浓度（当H20时，用6.0mmol/L KC麻
7、准液替代生理盐水进行稀释，血钾浓度通过计算得 到 ）。1.5 不同人群红细胞溶血H=50时血钾的测定选取我院2010年6月至2010年12月住 院新生儿40例、成年男性40例、成年女性40例标本，制备Hb法同上，将H5整为50,检测各标本血钾浓度。1.6 验证试验 1 选取上述120例标本（新生儿40例、成年男性40例、成年女性40例标本）进行血清钾浓度检测，制备H=200的Hb标准液，向上述血清中加 入不同比例的Hb标准液，检测标本溶血程度H及血 钾浓度。1.7 验证试验 2 选取上述120例标本（新生儿40例、成年男性40例、成年女性40例标 本 ）进行血钾浓度检测，同时吸取少量红细胞到血
8、清中，反复冻溶2次（方法同上），3000转离心5分钟，吸取上清，检测标本溶血程度H及血钾浓度。1.8 统计学分析采用 SPSS 17.0统计软 件包对检测结果进行分析。数据资料呈正态分 布，以均数标准差表示；多组间比较采用方差分析，组内两两比 较采用SNK-q 检验 ， 配对资料采用配对 t检验，以 P0.05 为差异有统计学意义。结果1 .溶血程度H与血钾相关性 以H为横坐标，K+浓度（mmol/L）为纵坐标，经统计学处理H与K +浓度成正相关（r=0.9996）,班方+程 K =0.1068H+0.2789，当 H 在 1200 （Hb 约为 95g/L）内成线性，见图 1。H图1溶血程度
9、H与血钾相关性2 .不同人群红细胞 溶血H=50时血钾的测定 由于H和K +浓度成线性关系，故选择H=50时，检测K +浓度，40例新生儿K械度+6.020.42 ; 40例成年男性K浓度5.920.39; 40例成年女性 K浓度5.840.34;经单因素方差检验，三组间差异无统计学意义 (F=2.306, P=0.104)。3 验证公式1 将H=200的标准Hb液按1: n的比例加入到已知K+浓度的不同血清标本中，按公式 K理论=n/(n+1)+ 、 一XK +0.1068H+0.2789可得到理论上 K浓度，并将理论上 K与实际检测值之间进行配对t检验，统计结果表明理论上 K+与实际检测值
10、基本一致(t=1.263, P=0.209),比统计学差别，理论值平均相对误差3.0%,最大相对误差7.0%。表1为1例标本(K=4.52 mmol/L)加入不同比例H=200的标准Hb液后理论K和实际K的比较，其他标本结果类似。表2为20例不同样本加入1/9体积H=200的标准Hb液后理论K与实际K的比较，其余标本均得到类似结果。表1 H=200的标准Hb液不同稀释度时理论K与实际K浓度的比较nH理论K实际K相对误差19813.0113.322.3626510.2310.250.153498.909.213.344387.958.051.205327.467.16-4.236287.147.
11、210.927267.017.151.958246.866.90.589206.486.581.4810196.426.34-1.2211176.246.15-1.4312156.055.98-1.2213145.975.87-1.7214135.895.55-6.0515125.805.65-2.6216125.815.81-0.0817115.725.64-1.4618115.745.59-2.6119105.645.42-4.0820105.655.35-5.64注：将H=200的标准Hb液按1： n的比例加入已知 K +浓度为4.52mmol/L的血清标本中，理 论 K+= n/(n+
12、1) X K+0.1068H+0.2789表2不同血清样本中加入 标准Hb液后理论K与实际K浓度的比较n标本原始浓度理论K实际K相对误差13.455.265.04-4.2725.266.886.78-1.5334.356.076.212.3344.656.346.431.4855.687.267.452.5264.125.865.76-1.7073.895.655.43-4.0783.585.375.685.4293.695.475.520.89104.235.966.254.69114.966.616.48-2.07124.125.866.286.72133.675.455.29-3.081
13、43.485.285.19-1.77153.765.535.652.05164.356.075.81-4.39174.786.456.581.95184.626.316.12-3.07193.955.715.893.14204.055.805.850.94注：将H=200的标准Hb液按1: 9的比例加入已知 K +浓度的20个血清标本中，理论 K= 0.9 X K+0.1068H+0.27894 验证公式2溶血标本中标本原来的血清K + 浓度应该为实际测得的K+浓度减去因溶血造成K +浓度升高部分即K未=K的0.1068H- 0.2789,并将计算得到的校正后血清 K +浓度与实际检测值 之间
14、进行 配对t检验，统计结果表明溶血标本校正后K +浓度与未溶血标本实 +际测得K浓度基本一致，差异无统计学意义(t=0.165, P=0.869), 校正值平均相对 误差2.9%,最大相对误差6.9%。6.59,5口,596 5 5 4 4度咨清血后正校3.53.01111113.03.54.04.55.05.56.06.5实际血?tK浓度图2校正后血清K浓度与实际血清K浓度的比较讨 论血清信息是对血清的混浊程度（Lipemi简写:L）、济通程度（Hemolytic简写:H）、黄疽程度Icteric简写:I）的测定，并提供指数的一 种功能，利用无色透明试剂分别与胆红素标准液，人溶血液标准，浊 度标准液按一定 比例混合用不同波长扫描吸光度。日立760蜂自动 生化分析仪利用 这个原理当采用血清信息功能后仪器在（1/ 2） 入480/505, 570/600, 660/700（nm）自动测定 I、H、L。在 5
