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1、1.1DNA重组技术的基本工具教学教学内容教学手段预期过程和方法目标1创设情师：1973年转基因微生物一转基因大境，引入对肠杆菌问世；1980年第一个转基因动基因重组技物一转基因小鼠诞生；1983年第一例联系旧知识，术工具的学转基因植物一转基因烟茸出现，实现习。了一种生物的某些性状在另一种生物中的表达。拿出两种使学生认识到基因工程同学们，性状的表达与我们从前学过的什么过程后关？生：与基因控制蛋白质的合成有关。师：假若这是一个DNA上的能指导合成某种药物蛋白的基因（老师用手指不同颜色的等宽的纸条。学生讨论。也是建立任基因控制蛋白质合成的基础理论上的，不可割出纸条上的该区段），而这是一条烟茸裂。的
2、DNA（老师拿出另一纸条）。同学们分析，要实现药物基因在烟茸中的表第三个内抽象艾直观，增强诱思的达，提前要做哪些关键工作？咨不好回效果。生：1.要将药物基因切割卜来；答,教师要2.要将药物基因整合到烟茸的DNA引导。上。师：同学们说得对！但还应该实际考使学生认识虑问题，这两条纸带所代表的DNA是在同一个细胞中吗？生：不是。赞扬也是教育的一种方式。到科学的发展信赖于技术的创新。师：所以这里就存在一个基因转移的实际问题，谁能具体说一下？生：就是如何将控制合成药物的基因转入烟茸细胞的问题。师：同学们思考的问题，正是科学家们思考的问题。刚才我们所探讨的工2.学习分子手术刀”TS制酶。作，都是在分子水平
3、上进行的，切割也好，连接也好，转移也好，无一例外。中国有句俗语叫没有金刚钻儿，不揽瓷器活儿”。科学家们在实施基因工程之前，苦苦求索，终于找到了实施基因工程的三种金刚钻儿”，使基因工程的设想成为了现实。这三种金刚钻儿”，一是准确切割DNA的工具，分子手术刀”一限制酶；二是DNA片段的连接工具，分子缝合针”DNA接酶；三是基因转移工具，分子运输车”一基因进入受体细胞的载体。下面我们就来学习这方面的内容。师：在进入对限制酶的学习时，你们可能最关心的是这种工具酶到哪里去寻找。我们不妨从以往学过的知识谈起，引起思考。自然界中有各种生物，它们所处的环境不是真空。一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。
4、这种可能，同学们可用什么实例来说明？生：噬菌体侵染细菌的实验。师：那么现今存在的生物为什么没有在长期的进化过程中被外源DNA的入侵而绝灭，仍能保持一种稳定状态呢？生：生物体有的有免疫系统，如动物；引导大家思考。学生讨论。讨论中及时发现有创新思维的学生，鼓励发表意见。学生再次议论。及时鼓励学生。以上教学也是将三种操作工具整合到一个完整的过程之中将直白的教学内容变得有思维力度培养学生思维的创造性。以上教学改 变直白的教 学方式，通过 诱思，提高学 生的思维能 力。引导学生与 DNA酶作对 比，在比较中 准确认识限 制酶。让文字与插 图结合，使抽 象的文字在 直观的插图 中得以体现。学生看插图。学生
5、看书有的有保护作用的组织、器官，如植物。师：那么作为单细胞的生物来讲，怎么会有那么复杂的结构和系统？它如何来抵抗入侵的外源DNA,保护自身学生看书呢？生：只有让外来的DNA失效，才能保护自身。师：那么怎样才能让DNA失效？生：用DNA酶，因为在必修课本中学过。教师点拨师：用DNA酶，那么生物自身的DNA不也要失效了吗？生：一种特殊的酶，能切割外来的DNA,而对自身不切割。师：根据你们的分析可知，这种酶可能是一种不同于DNA酶的、我们还没有认识的酶。我们讨论至此，同学们是否有了从哪里获得这种酶的意向？生：到单细胞的生物中去找。师：科学家的基本意向也和同学们一样。单细胞生物比多细胞生物更容易受到外
6、源DNA的侵入。在长期的进化过程中，使其必须有处理外源DNA的酶。科学家们经过不懈的努力，终于从原核生物中分离纯化出这种酶，叫做限制酶。迄今已从近300种微生物中分离出4000种限制酶。这种酶与我们以前知道的DNA酶的作用是不同3.学习分子缝合针”DN连接酶。的。请同学们看书，学习限制酶特有的作用。师：书中告诉我们这种特殊的酶有什么作用？生：它们能够识别双链DNA分子的某种特定核甘酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核甘酸之间的磷酸二酯键断开。师：以上这句话，说出了两层意思。一是识别特定核甘酸序列。请同学们看图，EcoRI只能识别GAATTC的核甘酸序列，SmaI只识别CCCGGG的核甘酸序
7、列。第二层意思是从特定部A、，,、一，、，一、，位的两个核甘酸之间切开。请同学们看图，EcoRI就从G和A之间切开，SmaI就从C和G之间切开。师：刚才我们提到科学家们已经分离出4000多种限制酶。由于酶的不同，它们识别的特定核甘酸序列也不同，这样就为我们切割DNA提供了多种特定的手术刀”。但它们切割DNA后形成的末端有两种可能，请同学看图回答。生：一种形成黍占性末端，一种形成平末端。师：那么这两种末端是如何形成的呢？请从书中找到答案。生：限制酶在它识别序列的中心位置两侧将DNA两条单链分割开，就形成学生看书，接着议论。教师点拨。利用插图。看书学习。将局部问题整合到实际工作联系旧知识，提供一个
8、比较的对象，在比较中加深对DNA连接酶的认识。提高学生思维的深刻性。准确认识DNA连接酶的作用部位。解决本课的难点。4 .学习分子运输车”一基因 进入受体细 胞的载体。5 .布置作业。黏性末端，而从识别序列的中心位置 切开就产生平末端。师：切断的DNA片段要与受体细胞的 DNA连接，同学们根据以往学习的经 验，能说出用什么酶吗？生：用DNA复制中的DNA聚合酶。 师：同学们想到用DNA聚合酶是很正 常的，但是现在我们学习的这种连接 与DNA复制中的连接有所不同。请看 书后议论，由同学来回答。生：DNA连接酶是将双链的DNA片 段连接起来，而DNA聚合酶则是将一 个个脱氧核甘酸连接起来。师：同学
9、们说得对，但还不深刻。比 如刚才说DNA连接酶是将双链的的全过程中思考。学生讨论学生归纳提出问题，诱 导思考，解决 难点。培养思维的广阔性。培养学生的归纳能力。DNA片段连接起来，就是说DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核甘酸连接起来。相同之处都是通过形成磷酸二酯键来连接的。请同学们在图中正确指出其位置。师：开始时，我们学习了限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接，所用DNA连接酶是否可以不加选择？同学们应从书中求得真知，自己解答这个问题。学生结合 插图寻找课内与课 外结合。利用插图加 深对载体必 须具备条件 的
10、认识。体现基础知 识的准确运 用。在运用中 加深对基础 知识的深层生：应该有所选择。因为EcoliDNA连接酶只能将双链DNA片段黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间连接起来。T4DNA连接酶既可缝合”双链黏性末端，也可缝合”双链DNA的平末端，但平末端之间连接的效率比较低。师：单纯的DNA片段是很难导入受体细胞的，所以我们将切割卜来的目的基因导入受体细胞就需要有一个分子运输车”帮助。不是任何的分子运输车”都可以用来作目的基因进入受体细胞的载体的。其中的理由要从实际情况出发考虑才能清楚。卜向老师提出四个问题供大家思考。1 .假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？2 .作为载
11、体没有切割位点将怎样？3 .目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？4 .如果载体对受体细胞肩害将怎样？不能分离会怎样？生：1.导入受体细胞的目的基因/、能复制，将在细胞增殖中丢失。5 .载体没有切割位点，外源的目的基因不可能插入。6 .如果载体上有遗传标记基因，这样，在载体进入受体细胞后，就可通过标记基因的表达来检测。7 .载体对受体肩害，将影响受体细胞新陈代谢，进而使转入的目的基因也无立足之地。载体不能分离，就不能获得更多带有目的基因的载体。师：可见以上内容，都是在选择合适载体时必须考虑的。请同学们阅读课文，归纳出充当基因进入受体细胞载体的必要条件。生：1.能自我复制；2 .有切割位点；3
12、 .有遗传标记基因；4 .对受体细胞无害、易分离。师：目前通常利用的载体是质粒”。质粒是能友好”寄宿在细菌细胞内的小型的环状DNA。卜间让我们通过插图T来认识质粒，尤其要在质粒载体结构模式图上找出刚才归纳几个条件的具体体现。生：找到复制原点”一说明质粒能复制并能带着插入的目的基因T复制。找到目的基因的插入位点”一说明质粒肩切割位点。找到氨节青霉素抗性基因”一说明有标记基因的存在，将来口用含青毒素的培养基鉴别。找到此质粒来自大肠杆菌一说明没有危害，大肠杆菌是非致病菌，大肠杆菌分裂快，也便于从大量复制个体中分离出来。1.完成书后练习题。2.认真完成模拟制作DNA组模型。希望大家动手、动脑协调配合，体会每一步骤在基因重组中的真实含义。最后结束时加强反思，回答书中提出的两个问题。经典例题剖析下图表示限制酶切割某DNA的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列及切点是（）A.CTTAAG,切点在C和T之间B.CTTAAG,切点在G和A之间C.GAATTC,切点在G和A之间D.CTTAAC,切点在C和T之间【解析】由图不难看出该限制酶识别的碱基序列是GAATTC,切点是G与A之间。答案C
