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1、专业：XX医学 年级：xxxx级 姓名：XXX 学号：xxxxxxxxxx实验三荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量、实验目的和要求：1. 荧光分光光度计的基本结构及操作方法；2. 荧光产生及测量的过程；3. 荧光分析法的定量分析方法（标准曲线法）4. 影响荧光强度的因素。二、实验原理：奎尼丁是抗疟疾奎宁的右旋体，属于生物碱类抗心律失常药。主要用于阵发性心动过速、 心房颤动、早搏；预防室房性心动过速及对房室结折返性心动过速；还何以预防有症状的室 上性和室性早搏。奎宁丁的有效血药浓度是36mg/L, 8mg/L以上可发生严重不良反应。硫酸奎宁丁的分子式为C20H24O2N2 H2SO4 2H2O,分子量
2、为728.96,分子结构式如图所示：其结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分根据其喹啉环结构部分具有产生荧光的特性,采用荧光光度计测量其荧光强度,可以实现硫酸奎宁丁含量的测定。三、实验仪器与试剂：1.F93 型荧光光度计2硫酸奎宁丁标准储备液（100ug/ml）3. 硫酸溶液（0.050mol/L）4. 硫酸奎宁丁样品溶液5.50ml 容量瓶6 个6.5ml移液管2个7.1cm 石英荧光比色皿 1 个四、实验步骤：1标准系列溶液及样品溶液配制按照下表配制硫酸奎尼丁标准系列溶液及样品溶液编号123456（硫酸奎尼丁样品溶液）100卩g/ml硫酸奎尼丁标 准溶液1.00ml2.00ml3.00ml4.00
3、ml5.00ml2.50ml说明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中 用0.050ml/L硫酸溶液稀释至刻度并摇匀系列标准溶液浓度卩 g/ml2.004.006.008.0010.00专业：XX医学 年级：xxxx级 姓名：XXX 学号：xxxxxxxxxx2测定灵敏度的选择和荧光光谱的绘制（1）用lcm石英荧光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置于荧光光度计样品室中， 盖上样品室舱盖，调节荧光光度计灵敏度，使其荧光强度读数在100 左右，测定测定的灵敏 度。（2）荧光波长调节为380nm，用1 cm石英荧光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置 于荧 光光度计样品室中，盖上样品室舱盖，调节荧光
4、光度计灵敏度，使其荧光强度读数在5 以内，然后按照下表依次调节荧光波长，测定不同荧光波长下5 号溶液的荧光强度；在坐 标纸上以测定的荧光强度为纵坐标，荧光波长为横坐标制图，绘制荧光光谱，并从荧光光谱 曲线上找出做最大荧光波长。激发波长365nm荧光波长380nm390nm400nm410nm420nm430nm440nm450nm460nm荧光强度值2.36.918.537.555.367.973.571.863.5激发波长365nm荧光波长470nm480nm500nm510nm520nm530nm540nm550nm560nm荧光强度值55.749.428.819.713.08.35.03
5、.02.0选择的最大荧光长为：入2=440（nm）荧光强度值（激发波长365n m）荧光波长（n m ）专业：XX医学 年级：xxxx级 姓名：XXX 学号：xxxxxxxxxx3.标准曲线制作将激发波长，荧光波长分别调节为上面实验选择的365nm, 440nm，荧光光度计灵敏度 调节为上面实验选择的灵敏度档次，用1cm石英荧光比色皿，按照下表依次测定标准系列溶 液、样品溶液、0.050mol/L硫酸溶液荧光强度，平行测定两次，计算荧光强度的平均值； 在坐标纸上以荧光强度的平均值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标制图，绘制标准曲 线。隆强光荧-0-0-0-8 7 6 5o40.Dr-nn J
6、 JnT J Jn JD 电卜rt-LA .卜Ife-4.卜 LL 卜r卜IFt-LWr TF7QP4-二亠士*r:Dr004.006.r-.008.00 10.00 12.00编号l23456 （样品）7硫酸溶液荧光强度Fl17.132.47.360.673.618.10.3荧光强度标准曲线系列标准溶液浓度ug/ml样品62.15 卩 g/ml7五、实验数据处理：1样品溶液中的硫酸奎宁丁的含量根据 6号样品溶液荧光强度测定的平均值，在标准曲线上采用作图法求出其对应的 浓度值，采用下式计算样品溶液中铁的含量：C = C X50.00X 读取值 2.50Cx=2.15X50.00/2.50=43
7、.00yg/ml六、注意事项： 1测定系列标准溶液和样品溶液时，必须使用同一只比色皿。 2比色皿放入荧光光度计样品室前，必须用吸水纸将表面擦拭干净 3比色皿在换装不同浓度溶液时，必须用待测溶液润洗至少三次。 4在比色皿未放入荧光光度计测定光路时，必须将样品室舱盖打开。专业：XX医学 年级：xxxx级 姓名：XXX 学号：xxxxxxxxxx七、讨论与思考1实验过程中，有一调零步骤，其作用是什么？ 答：调零是为了消除溶剂中离子发荧光而干扰实验结果。2如果不进行调零操作，对实验结果有无影响？为什么？ 答：无影响。标准曲线不调零也可以读出样品溶液的浓度。3什么情况下，必须进行调零操作？ 答：用比较法测定样品的浓度时必须要调零。4比较绘制的激发光谱和荧光光谱，二者有何特点？答：激发光谱和荧光光谱都有吸收峰，但是大部分物质的激发光谱接近365nm，而不同物质 的荧光光谱最高峰不同，这是定性的依据。
