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1、动态浊度法定量检测复方苦参注射液中细菌内毒素【关键词】复方苦参注射液；，细菌内毒素；，动态浊度法；， 干扰实验摘要：目的成立定量检测复方苦参注射液中细菌内毒素实验 方式。方式采纳中国药典2005年版(III部)附录检测细菌内毒素 的动态浊度法。结果复方苦参注射液用细菌内毒素定量法检测无干扰 因素阻碍，内毒素回收率在50%200%范围内。结论利用动态浊度法 定量检测复方苦参注射液的细菌内毒素是可行的，可用细菌内毒素方 式代替兔热原检查法，同时又幸免了限量法内毒素检测时的干扰。关键词：复方苦参注射液；细菌内毒素；动态浊度法；干 扰实验Application of the Turbidimetric
2、-Kinetic Method for the Measurement of Endotoxin in Composite Radix Sophora Flavescentis InjectionAbstract ： ObjectiveTo develop an assay for determination of bacterial endotoxin(BET) in Composite RadixSophora Flavescentis was determined by turbidimetrickinetic method. ResultsThe content in Composit
3、e Radix Sophora Flavescentis Injection did not interfere with the quantitation of recovery of BET was between 50% and 200%. ConclusionThe method is proved to be suitable for determination of the BET in Composite Radix Sophora Flavescentis Injection and could be used as an alternative for the rabbit
4、pyrogen test to the injection.Key words ： Composite Radix Sophora Flavescentis Injection; Bacterial endotoxin; TurbidimetricKinetic method; Interfere factors test复方苦参注射液是苦参和白土苓溶液提取物的灭菌溶液，具 有清热利湿，凉血解毒，散结止痛的功能。目前我国药品标准对注射 剂采纳家兔法进行热原检查。但复方苦参注射液临床用量大，且为中 药制剂，采纳家兔法进行热原检查操作复杂，阻碍因素多，而细菌内 毒素限值检查又具有较大的干扰性，应选
5、用动态浊度法测定其细菌内 毒素可排除其干扰，结果准确靠得住，且对复方苦参注射液进行添加 内毒素回收实验及热原检查的对如实验，以成立此分析方式。1材料与仪器复方苦参注射液（批号；，山西金晶药业）；TAL试剂（批 号，入二・ml-1,规格ml・Amp-1,湛江海洋生物制品检 定厂）；细菌内毒素国家标准品（批号2006-3, 70EU・Amp-1, 中国药品生物制品检定所）；细菌内毒素检查用水（批号，规格10 ml・Amp-1,湛江海洋生物制品检定厂）；BET32C细菌内毒素测 定仪（天津大学无线电厂）。2方式与结果细菌内毒素限值的确信1公式为
6、：L=K・M-1, K 为规定的给药途径，即人每千克体重每lh最大可同意的内毒素剂量, 注射剂为EU・kg-l； M为lh每千克体重人的最大给药剂量为 ml・kg-l,计算得样品的内毒素限值L为EU・标准曲线制备及靠得住性1用细菌内毒素检查用水将内 毒素国家标准品进行10及2倍稀释，最终细菌内毒素浓度别离为，一 5, 3EU・m”1稀释系列；各取ml别离加到预先加有ml TAL 试剂反映管内，混合均匀，当即插入BET32c细菌内毒素测定仪内进行 自动检测,其中每一个浓度重复3管。结果见表1。回归方程：lgT二IgC, 其中相关
7、系数r=8；最低浓度入1=3 EU・ml-l,空白对照管 在检测时刻外，故标准曲线成立。表1标准曲线的靠得住性（略）干扰实验样品稀释倍数计算1公式为MVD=L・C・人 l-lo L为复方苦参注射液内毒素限值；C为&M2539; ml-1；入1为标 准曲线的最低内毒素浓度EU・计算得复方苦参注射液最 大有效稀释倍数MVD为16倍。样品溶液配制及干扰实验将复方苦参注射液用内毒素检查 用水依次稀释为2, 4, 8, 16倍溶液，记为Ai液；同时另取4管，进 行一样倍数稀释，但在稀释液中添加浓度为M（4X1）的细菌内毒素 标准溶液；作为样品添加内毒
8、素阳性对照管，记为Bi液；别离取上述 各液，加入预先加有ml TAL试剂的反映管内，混匀当即插入BET-32c 细菌内毒素测定仪内进行检测，其中每一个浓度重复3管，计算回收 率。回收率（） = （Bi液内毒素值-Ai液内毒素值）XM-1X 100%o结 果见表2o表2复方苦参注射液的干扰实验（略）标准曲线：IgT=7 IgC, 8。样品的添加内毒素平均回收 率均在50%200%范围内，符合中国药典2005年版规定，说明样品 的4个浓度溶液对量试剂无干扰阻碍。样品溶液正式实验别离取4批复方苦参注射液，用细菌内毒 素检查用水制成4倍稀释液,记为Ai液；同时另取4管进行4倍稀释, 并在稀释液中添加浓
9、度为M （4入1）的细菌内毒素标准溶液，记为Bi 液；别离取上述各液ml,加入预先加有ml TAL试剂的反映管进行检 测，其中每一个浓度重复3管，计算回收率。结果见表3。表3复方苦参注射液正式干扰实验（略）标准曲线：lgT= 7 IgC, 8, 4批复方苦参注射液的回收 率均在50%20096范围内，说明复方丹参注射液在本实验条件下对TAL 试剂无干扰阻碍，因此日常查验选用4倍即可。同时进行4批供试品 的家兔热原检查对如实验，结果一致，均为阳性。3讨论从复方苦参注射液的干扰实验结果发觉:复方苦参注射液用 细菌内毒素动态浊度法检测，由于内毒素回收率在50%200%范围内， 说明不存在干扰因素阻碍，且4批复方苦参注射液的内毒素含量均在 规定限度EU・ml-l以下。用传统的家兔法检测细菌内毒素，由于操作复杂，阻碍因素 多，对实验结果阻碍专门大。利用动态浊度法进行细菌内毒素定量检 测，具有操作简便，结果准确，检测灵敏度高等优势，尤其幸免了由 于家兔不同及人为主观判定所显现的假阳性或假阴性结果。通过对如 实验，样品的细菌内毒素定量检测结果与家兔热原检测结果一致，说 明利用细菌内毒素动态浊度法测定复方苦参注射液的细菌内毒素是可 行的，可用细菌内毒素定量检查法代替家兔热原检查法。参考文献：Ci国家药典委员会.中国药典，ni部s.北京：化学工 业出版社，2005：附录XIXF.
