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1、课题1微生物的实验室培养- # -平4 。法、万等营养物质。干热灭菌和高2.实验室常用的火菌方法有灼烧火菌、压蒸汽火菌等。3 固体培养基的配制过程为：计算一f称量溶化 f火菌 f倒平板。y1.培养基中含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子用 常7出-士.白1 ；、少 HI的是杀死物体表面或内部一部分对人体有 也 A * X 、体内外所有的微生物，包括知识点一孢子和芽孢。培养基及无菌技术自读教材夯基础培养基(1) 概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养物质。液体培养基刼入琼脂等礙固剂)(2) 种类彳 J固休培养基微生物在匕面可形成两落(3) 营养成分：水、无机盐、碳源
2、、氮源，此外还要满足微生物生长对pH特殊营养物质及氧气的要求。2 .无菌技术(1) 目的：获得纯净培养物。(2) 关键：防止外来杂菌的入侵。(3) 不同对象的无菌操作方法连线:1方法类型伽烧天菌yLtt种针环)干热况做 /丸消硯、/巴氏弋(/1L培养皿紫扑线/、P灭谓/肛脚柞厝职手化学蓟荊応压蒸汽/、IV一水滋地:思孝抹究1下面是查氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，请根据下述培养基，回答下列问题:蔗糖15 gNaNO3 gK2HPQ1 gKCl0.5 gMgSQ 7H2O0.5 gFeSQ0.01 g琼脂15 20 g水定容至1 000 mL(1) 该培养基根据物理性质划分应是什么培养基？为
3、什么？提示：固体培养基。因为该培养基加入了凝固剂琼脂。(2) 该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的几类营养物质？分别是什么？提示：4类物质。分别是碳源、氮源、无机盐和水。(3) 蔗糖提供的是哪类营养物质？NaNO提供的是哪类营养物质？提示：蔗糖提供的是碳源。NaNO提供的是氮源和无机盐。(4) 在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物所需要的哪些条 件？提示：满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的需要。2 探讨培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶所采用的灭菌或消毒方法。 提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。3 消
4、毒与灭菌的相同点与区别分别是什么？提示：消毒是杀灭病原微生物和有害微生物，并不要求杀灭一切活的微生物；而灭菌则 是杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。跟随名师解疑难1 培养基的成分营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO、NaHCO等;有机化合物：糖类、脂肪酸、 花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH、铵盐、 硝酸盐等；有机化合物：尿 素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等量有机物水在生物体内含量
5、很高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、 氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生 理调节物质，某些化能 自养菌的能源，酶的激 活剂无机化合物2.实验室常用的消毒和灭菌方法项目概念常用方法应用范围消毒使用较为温和 的物理或化学 方法仅杀死物 体表面或内部 一部分微生物 （不包括芽孢和 孢子）煮沸消毒法：在 100 c煮沸56min般物品巴氏消毒法：在7075 C煮30 min或在80 C煮15 min一些不耐咼温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法：紫外灯照射 30 min接种室、操作台火菌使用强烈的
6、理 化因素杀死物 体内外所有的 微生物（包括芽 孢和孢子）灼烧火菌：酒精灯火焰接种工具的灭菌和试管口的火菌干热灭菌：在 160170 C下灭菌12 h玻璃器皿、金属工具的火菌咼压蒸汽火菌：在压力为 100 kPa, 温度为121 C的条件下，灭菌1530 min培养基及容器的火菌|知识点兰大肠杆菌的纯化培养1 W自读教材夯基础1 .制备固体培养基计算1边称i1溶化灭歯似平板依摒牛肉膏蚩白陈培养基I唯左 比钊，计算各诙分的用擅牛肉膏比较黏稠，可用称挺紙称 取，牛肉有和责白脏都易吸潮， 称取的动作要迅速，称后及时盖I;瓶盖牛肉膏和称註纸+水史豐取 出称植纸一加蛋包淼和氯 牝钠一加琼脂(注盘:不斷
7、用玻璃棒搅拌，防止球脂炯底 而导致烧杯破亂.)一补加鹽 您水至100 mL培养皋：高绘蒸汽灭菌 培养皿：园干热灭菌待培养基冷却至50 T左右时， 在風洒幕灯火焰附近倒平板2.纯化大肠杆菌方法： 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步 稀释分散到培养基的表面。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布 到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(2) 鉴定：将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_ C恒温箱中，培养 12 h和24 h后，分别记录观察。(3) 菌种保存：对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏法；对于需要长期保存的
8、菌种，可以采用甘油 管藏法。1培养基灭菌后，需要冷却到50 C左右时，才能用来倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸，感觉上以刚不烫手为准。2 .如果需要调节培养基的 pH,应在哪一步骤后进行？提示：溶化后，灭菌前。3 在用平板划线法接种大肠杆菌时，第一次划线前、每次划线前及划线操作结束后，都 要灼烧接种环，请分析其目的分别是什么。提示：第一次灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种 环上残留的微生物，使每 次划线的微生物来自上次 划线末端杀死接种环上残留的菌 种，避免细菌污染环境和 感染操作者4 .在纯化大肠杆菌操作中
9、，如何验证培养基灭菌是否彻底？提示：将接种后的培养基和一个未接种的培养基，都放在 37 C恒温箱中培养，观察并记 录结果。跟随名师解疑难1 .微生物培养中有关实验操作的注意事项(1) 倒平板操作： 培养基灭菌后，需冷却至 50 C左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 C以下凝固。 培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开。 整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 平板冷凝后要倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，造成污染。 若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应丢弃。(2) 平板划线操作： 第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环
10、。 灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 划线时最后一区域不要与第一区域相连。 划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。2 稀释涂布平板操作(1) 稀释操作时：每支试管及其中9 mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰12 cm处。(2) 涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”，应特别 酒精灯与培养皿的距离要合适。 吸管头不要接触任何其他物体。 吸管要在酒精灯火焰周围使用。3 平板划线法和稀释涂布平板法的比较项目优点缺点适用范围平板划线分离法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数
11、，可以观察菌落特 征吸收量较少、较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌4. 两种菌种保存方法的比较项目适用对象培养基类型临时保藏法频繁使用的菌种固体斜面培养基甘油管藏法长期保存的菌种液体培养基方法菌落长成后于冰箱中保存，每36个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存缺点把握菌种易被污染或产生变异温度考向一培养基的成分例1下列描述正确的是（）A. 同一种物质不可能既作碳源又作氮源B. 除水以外的无机物仅提供无机盐C. 凡是碳源都能提供能量D. 有些无机氮源也能提供能量解析对异养型微生物来说，含 C H O N的化合物既
12、是碳源，又是氮源。如蛋白胨 既是碳源又是氮源和能源，葡萄糖是碳源同时又是能源。除水以外的无机物种类繁多，如CQ和N2是无机物，但也是某些微生物的碳源和氮源。CO是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。NaHCO可作为自养型微生物的碳源和无机盐。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源。答案D归纳拓展卜几种微生物的营养能量来源微生物类型碳源氮源能源举例化能异养型糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物大肠杆菌化能自养型CQNHNH硝化细菌光能自养型CONH NQ等光能蓝藻共生固氮微生物糖类等有机物N2有机物根瘤菌自生固氮微生物CQN2光能固氮蓝澡潘向二例2下列有关平
13、板划线的操作，正确的是（）A. 使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B. 打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C. 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划35条平行线即可D. 最后将平板倒置，放入培养箱中培养解析在培养基上接种时，一定要做到无菌操作，以防止杂菌污染影响实验或研究的 结果。微生物无处不在，包括空气中也充满了各种微生物，所以无菌操作显得很困难，但在 酒精灯火焰附近约 10 cm的四周为无菌区，因而菌种试管和待接种试管管口不能离开火焰附 近，接种环、棉塞也不能离开火焰附近。接种完毕之后为了防止菌体污染，要在火焰上灼烧 管口和接种环。为防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，应将平板倒置。答案D易错提醒* 要建立有菌观念，接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有被污染的 可能，必须严格地消毒灭菌。同时，在实验室中，不可吃东西、喝水，离开时一定要洗手， 以防被微生物感染。使用过的培养基要经过高压蒸汽灭菌后才能丢弃，以免污染环境。随堂基础巩固1. 下列叙述正确的是（）A. 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B. 培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C. 固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D. 微生物在固体培养基上生长时，可
