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1、墨旱莲对香烟提取物杀伤NHBE细胞的保护作用及机制摘要 目的：研究墨旱莲提取物对香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract, CSE）作用的正常肺细胞NHBE细胞的保护作用及其机制。方法：MTT 法检测墨旱莲提取物对CSE诱导的NHBE细胞增殖的影响，DTNB比色法测定 GSH含量，CDNB比色法检测GST活力，NADPH与2, 6二氯靛酚钠（DCIP） 测试NQO1活力，Western blot测定蛋白的表达。结果：墨旱莲提取物可以降 低CSE对NHBE细胞增殖的抑制作用；恢复由CSE引起的细胞内GSH水平下 降，降低诱导细胞中GST与NQO1活力及NQO1蛋白表达。结论
2、：墨旱莲能够 减少CSE对NHBE细胞的损伤，其机制可能与II相解毒酶相关。关键词 墨旱莲；CSE； GSH； GST； NQO1墨旱莲（Ecliptae Herba）为菊科植物鳢肠的地上部分，性寒，味甘、酸， 富含皂苷、豆甾醇等物质7。具有止血、清热解毒、保护肝脏和心血管作用， 在临床上用于治疗肺结核咯血和痢疾。研究表明，墨旱莲可以通过降低NFkB的 表达进而抑制HeLa细胞增殖8。本实验研究了香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract， CSE）对人支气管上皮细胞 NHBE （normal human bronchial epithelial cells）中的还原型谷胱
3、甘肽（GSH）水平，GST与NQO1活力和相关 蛋白表达的影响，以及墨旱莲提取物（Ecliptae Herba extract， EHE）对诱导 模型的干预作用，探讨墨旱莲对CSE作用下的NHBE细胞保护作用和机制。1材料1.1细胞与试剂 人支气管上皮细胞 NHBE （ATCC）。胰蛋白酶、胎牛血 清（美国Gibco公司）；2,6二氯靛酚钠（DCIP，日本TCI公司，批号MOBTE）； 还原型辅酶II （NADPH， 批号20101210）、牛血清白蛋白（BSA）（瑞士 Roche 公司）；二甲亚砜（DMSO）；四噻唑蓝（MTT），十二烷基硫酸钠（SDS），Tris， 丙烯酰胺，过硫酸铵（AP
4、S），四甲基乙二胺（TEMED），苯甲基磺酰氟（PMSF）， 甘氨酸（美国Sigma公司）；RPMI 1640培养基（批号20110127）、谷胱甘肽 S转移酶测试盒（批号20110426）、谷胱甘肽测试盒（批号20110504） （南京 建成生物工程研究所）；RIPA细胞裂解液（编号P0013C， 碧云天生物技术研 究所）；抗NQO1抗体（批号D2711， 美国Santa Cruz公司）。1.2 仪器 Class II Biosafety Cabinet 生物安全柜（美国 Labconco 公 司）；Nikon Eclipse TS100倒置显微镜（日本尼康公司）；酶标仪（美国BIORAD 公司）；ZWA型微量振荡器（常州国华电器有限公司）；HH60型数显恒温搅 拌循环水浴锅（常州国华电器有限公司）；AL204天平（瑞士 METTLER TOLEDO公司）；LDZX50K型立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）； 5430R冷冻离心机（德国艾本德公司）；Nanodrop 1000微量紫外分光光度计； HERA CELL 500型CO2细胞培养箱（美国Thermo公司）；电泳仪（美国 BIORAD 公司）。
