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1、。透射电镜样品制备方法由于电子束穿透能力限制， 必须把标本切成厚度小于0.1um 以下的薄片才适用，这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中， 超薄切片技术是最基本、 最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似， 需要经过取材、固定、脱水、渗透、包埋聚合、切片及染色等步骤。一取材的基本要求组织从生物活体取下后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部的各种酶作用，出现细胞自溶现象。此外还可能由于污染，微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏，因此，为了细胞结构尽可能保持天然状态，必须做到快、小、准、冷。（1）动作迅速，组织从活体取下后应
2、在最短的时间内（争取1分钟内）投入 2.5%戊二醛固定液。（2）所取组织的体积要小，一般不超过1mm*1mm*1mm。也可将组织修成 1mm*1mm*2mm大小长条形。因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。（3）机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。（4）操作最好在低温（ 04）下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。-可编辑修改 -。（5）取材部位要准确。二取材方法将取出的组织放在洁净的蜡版上，滴一滴预冷的固定液，用新的、锋利的刀片将组织切下并修小，然后用牙签或者镊子将组织块移至盛有冷的固定液的1.5ml 离心管中。如果组织块带有较多的
3、血液和组织液，应先用PBS洗几遍，然后切成小块固定。1. 动物及人体组织的取材（在冰浴上进行）动物组织的取材，应麻醉（ 1%戊巴比铵 5ml/kg 体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官，用解剖剪刀剪取一小块组织，放在干净的纸板上， 滴一滴冷却的固定液， 用新的、无油污的锋利双面刀片将材料切成大约 1mm宽， 23mm长的小3块并从中选出受损伤较小的小条， 再将其切成 1mm的小块，最后用牙签将这些小块逐一放入盛有预冷的、新鲜固定液的1.5ml 管内，放入冰箱冷藏室低温固定（04）2-4 小时或以上。*固定结束后，将固定液用 PBS稀释三倍，样品于该溶液中在 4冰箱保存。送样前请用 PB
4、S浸泡清洗 3 次，贴好标签送至电镜室。2. 体外培养细胞的取材（在冰浴上进行）培养在培养瓶中的细胞取材时，先倒出部分培养液，然后用刮刀轻轻刮下瓶壁上的细胞，将细胞悬液转移到离心管中，离心机 4低速离心 （2000 转/ 分）10 分钟，使细胞聚成团块，-可编辑修改 -。弃去上清，沿壁小心加入新鲜的固定液，保持细胞成团状态，于 4冰箱中固定 2 小时以上。*固定结束后，将固定液用 PBS稀释三倍，样品于该溶液中在 4冰箱保存。送样前请用 PBS浸泡清洗 3 次，贴好标签送至电镜室。对于血液及其他细胞悬浮液，不宜直接固定，可在取材后将其放入离心管， 以 2000-4000 转/ 分的速度离心 1
5、0-15 分钟，待样品在离心管底部集结成团块状后，用吸管吸出上清液，再缓缓滴入固定液稍加固定，然后用刮铲将样品取出并切割成小块，再行固定。3. 植物组织取材植物组织的取材比较容易，它的细胞离体后变化不像动物细胞那么迅速，但植物细胞的细胞壁阻碍着固定液的迅速渗透，因此，植物材料的取材宜切成薄片状或牙签状，经适当的固定后再切成小方块。*固定结束后，将固定液用 PBS稀释三倍，样品于该溶液中在 4冰箱保存。送样前请用 PBS浸泡清洗 3 次，贴好标签送至电镜室。4. 细菌及藻类等样品取材对于不易成团的样品，需先清洗，加入固定液后吹散，于4冰箱中固定2 小时，固定结束后， PBS清洗 3 次，继续按照
6、文献琼脂铸模法制备透射电镜样品（白焕红）内描述方-可编辑修改 -。法进行琼脂预固定。再将琼脂预包埋后的样品于4冰箱中固定过夜。* 固定结束后，将固定液用 PBS稀释三倍，样品于该溶液中在 4冰箱保存。送样前请用 PBS浸泡清洗 3 次，贴好标签送至电镜室。缓冲液配方磷酸盐缓冲液（三个步骤）1. 磷酸盐缓冲液（ 0.2M）甲液 ： 0.2M 的磷酸氢二钠溶液乙液： 0.2M 的磷酸二氢钠溶液Na2 HPO42H2O35.61gNaH2PO4H2O27.60g(Na HPO7H O)53.65g( NaH PO2H O) 31.21g242242(Na HPO12H O)71.64g242加蒸馏水溶解成1000ml加蒸馏水溶解成 1000ml2. 按下表混合甲、乙两液既得所需 pH 的 0.2M 缓冲液 0.2M 磷酸盐缓冲液的配制pH6.46.66.87.07.27.47.67.88.0甲液 (ml)26.537.549.061.072.081.087.091.594.7乙液 (ml)73.562.551.039.028.019.013.08.55.33. 将溶液用蒸馏水 1：1 稀释，则配得 0.1M 的缓冲液。-可编辑修改 -。欢迎您的下载，资料仅供参考！致力为企业和个人提供合同协议，策划案计划书， 学习课件等等打造全网一站式需求-可编辑修改 -
