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1、女贞子膜分离提取物对实验动物免疫功能影响研究【摘要】 目的：研究女贞子膜分离提取物对小鼠免疫作用的影响。方法：用陶瓷微滤膜分离女贞子水煎液药效部位，取膜分离所得过滤液作受试液，上清液作阳性对照；将小鼠分为5组，分别为2.5、5、10 g/kg低、中、高3个剂量组和空白对照组、上清液对照组，小鼠连续灌胃30天后分别进行免疫指标测定。结果：各剂量组与空白组比较，中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应，明显增强小鼠碳廓清能力，明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力，明显升高小鼠血清溶血素含量，明显增强抗体生成细胞能力；高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能；各剂量
2、组对NK细胞活性增强无显著性。结论：女贞子膜分离所得过滤液有提高实验动物免疫功能的作用，其提高免疫功能作用优于阳性对照上清液组。 【关键词】 女贞子； 小鼠； 免疫功能女贞子又名冬青子 , 系木樨科常绿乔木女贞（ligustrumucidum ait） 的干燥成熟果实，性味甘、微苦、凉，归肝、肾经，具有滋补肝肾，明目乌发的功能1。现代膜分离技术因高效、节能等优势，正日益在中药制剂中得到应用2，目前国内膜分离在中药制备的应用研究不多，同时由于陶瓷膜化学性质稳定、机械强度、耐高温、耐腐蚀等特点，在中药有效部位分离应用中充分展示了其独特的优点。本研究采用Al2O3陶瓷微滤膜对女贞子水提液分离不同药效
3、部位，通过吞噬细胞吞噬功能和小鼠血清溶血素等的测定，探讨其对小鼠免疫功能的影响，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 动物材料 NIH雌性小鼠，1822g，由中山大学实验动物中心提供。动物合格证号：粤监证字2006A070。 1.2 受试物制备 女贞子药材经鉴定符合中华人民共和国药典2005年版一部规定。定量粉碎女贞子成极细粉，第1次10倍量水，煎煮1.5h，第2次7倍量水，煎煮1h，合并煎煮液，微滤（滤材为无机陶瓷膜，孔径为0.2m），得上清液和滤液，以滤液作为受试液，上清液作为阳性对照液。上述受试液和阳性对照液分别作为受试样品进行药效评价。 1.3 实验方法 1.3.1 剂量分组 每实验组
4、包括空白对照组和阳性对照组、低、中、高剂量组（2.5、5、10 g/kg），各剂量组实验动物数为10只。小鼠连续灌胃30天后开始试验。各实验组均按0.20ml/10g容量经口灌胃给予。 1.3.2 迟发型变态反应试验 二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应(DTH)。方法:用DNFB致敏小鼠后，第5天再用DNFB攻击右耳，24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直经8mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差来表示DTH的程度。 1.3.3 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验 制备20的鸡红细胞悬液，每只鼠腹腔注射1mL该悬液，30min后处死动物，将其仰位固定于鼠板上，开腹，经腹腔注入生理盐水2mL，
5、转动鼠板1min，然后吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，37温育30min，育毕用生理盐水漂洗，晾干，以1:1 的丙酮甲醇溶液固定，4Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞，计算吞噬率和吞噬指数。 1.3.4 小鼠碳粒廓清实验 根据注入墨汁2min、10min 后血中碳浓度(测吸光值)，计算出各组小鼠的吞噬指数。 1.3.5 NK细胞活性测定 NK细胞活性测定采用乳酸脱氢酶（LDH）测定法。 1.4 统计方法 采用统计软件包，用方差分析对数据进行处理。 2 实验结果 2.1 二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应 从表1可见，与阳性对照
6、组比较，受试物中、高剂量组显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应(P<0.05)。表1 对小鼠细胞免疫功能影响注：* 与阳性对照组比较。 2.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 从表2可见，与阳性对照组比较，高剂量组均明显提高吞噬百分数、吞噬指数(P<0.05)。 2.3 碳粒廓清实验 从表3可见，与阳性对照组比较，中、高剂量组可显著性提高小鼠碳廓清吞噬指数(P<0.05)。 2.4 NK细胞活性测定 从表4可见，与阳性对照组比较，各剂量组对NK细胞活性增强无显著性。表2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响注：* 与阳性对照组比较。表3 对小鼠碳廓清功能的影响注：* 与阳性
7、对照组比较。 表4 对小鼠NK细胞活性的影响 3 讨论 采用陶瓷膜对女贞子水煎液进行处理，得含不同化学成分的药效部位，为明确药效部位的药效作用和进一步分离有效成分或部位，故开展上述药效实验对其筛选和评价。 本研究结果证明, 中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应，明显增强小鼠碳廓清能力能明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力，升高小鼠血清溶血素含量，增强抗体生成细胞能力；高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能。它是一种免疫促进剂，对增强机体的抵抗能力和预防疾病具有一定的临床意义。本实验为无机陶瓷膜今后分离和精制何首乌制剂提供一些基本依据，从上述结果看，女贞子膜过滤所得过滤液高中剂量对免疫影响功能作用较上清液明显，就女贞子膜滤过液和上清液的化学成分与药效作用的关系有待进一步研究。【参考文献】 1 黄婉，杨耀芳.女贞子及其有效成分的药理及临床研究进展. 现代中西医结合杂志， 2003，12（7）：772774.2 郭立玮,金万勤,彭国平.21世纪的植物药深加工现代化技术-膜分离.南京中医药大学学报,2000,16(2):133. / 文档可自由编辑打印
