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1、淀粉含量测定侯曼玲，食品分析，化学工业出版社，北京，20041 实验原理样品经除去脂肪和可溶性糖类后，其中的淀粉用酸水解成具有还原性的单 糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的 糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖、麦芽糖是还原 糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被 还原为棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物 质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在 540nm 波长下测定光密度值， 查对标准曲线并计算，便可求出样品
2、中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单 糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以 0.9。2.材料与方法2.1 实验材料谷物种子2.2 主要仪器本实验用到的实验仪器有具塞玻璃刻度比色管：25mLxl9；烧杯：100mLx4；三角瓶：lOOmLxl；容 量瓶：100mLx3, 50mLx3；刻度吸管：1mLx4； 2mLx3； lOmLxl；沸水浴；冰 浴；扭力天平； 72l 型可见分光光度计2.3 实验试剂乙醚，乙醇溶液(俨85%), HC1溶液(1+1), NaOH溶液：配制的质量浓度分 别为 10%和 40%, Pb(Ac)2 溶液(200g/L), Na2SO4
3、溶液(100g/L) 甲基红指示剂(2g心溶解0.2g甲基红于60mL乙醇中，加水稀释至100mL1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80C烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸 馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4C冰箱 中保存备用。3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠 的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容 至1000mL，贮于棕色瓶中备用。2.4 实验步骤2.4.1 制作葡萄糖标准曲线取7支25mL具塞刻度试管编号，按
4、表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖 标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂，配成不同葡萄糖含量的反应 液。表 1 葡萄糖标准曲线制作管号lmg/mL葡萄糖标准液(mL)蒸馏水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm0021.5010.21.81.50.220.41.61.50.430.61.41.50.640.81.21.50.851.01.01.51.061.20.81.51.271.40.61.51.481.60.41.51.6将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min,取出，冰浴冷却至室温，用蒸馏水 定容至25mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比
5、色。调波长540nm,用 0号管调零点，测出16号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量(mg) 为横坐标，做出标准曲线。2.4.2 样品处理准确称取2-5g磨碎、过40目筛的样品,置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30mL 乙醚分三次洗去样品中的脂肪，弃去乙醚。再用乙醇溶液约 150mL 分数次洗涤 残渣，以除去可溶性糖类。滤干乙醇后用100mL水将残渣转入250mL锥形瓶中， 加入盐酸(1+1)30mL，连接好冷凝管，置沸水浴中回流2h。回流完毕后，立即置流动水中冷却至室温，加入2滴甲基红指示剂，将水解 液调至近中性(先用 40%NaOH 溶液调至黄色，再用盐酸(1+1)校正至水解液刚变
6、红色为宜；若水解液颜色深，可用精密pH试纸测试，调至pH约为7)。加中性 Pb(Ac)2溶液20mL，摇匀。放置10min，使蛋白质等干扰物质沉淀完全。再加等 量的 Na2SO4 溶液，以除去多余的铅盐。摇匀后将全部溶液及残渣转入 500mL 容量瓶中，用水洗涤锥形瓶，洗液合并于容量瓶中。用水定容至刻度，混匀、过 滤(初滤液弃去)。2.4.3 样品中含糖量的测定取7 支大试管，分别按下表加入各种试剂：管号空白123456数量项目样品量(ml)01.01.01.01.01.01.0蒸馏水(ml)2.01.01.01.01.01.01.0DNS 试剂(ml)1.51.51.51.51.51.51.5加热均在沸水浴中加热5min冷却立即用液动冷水冷却蒸馏水(ml)21.521.521.521.521.521.521.5光密度(D540)将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式推算出谷物种子内还原糖与总糖的百分含量。还原糖 =还原糖毫克数X样品稀释倍数x 100总糖量 =水解后还原糖毫克数X样品稀释倍数样品重量x100
