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1、菏泽学院Heze University本科生毕业设计（论文）题 目 鸡源大肠杆菌的分离与鉴定姓 名学号系别制药工程系专业动物医学指导教师职称菏泽学院教务处制目录摘要 1 关键字 1 Abstract 1 Key words 1 引言 21 材料与方法 31.1 材料 31.1.1 培养基及配制 31.1.2 试验仪器 31.1.3 药敏纸片 31.1.4 生化发酵管 31.1.5 大肠杆菌 O 因子诊断血清41.1.6 试验动物 41.2 方法 41.2.1 病料采集 41.2.2 病原体分离 41.2.3 病原体的纯培养 41.2.4 革兰氏染色镜检41.2.5 生化试验41.2.6 动物试
2、验41.2.7 血清学鉴定51.2.8 药敏试验52 结果与分析52.1 病菌的培养及镜检结果52.2 生化试验鉴定结果52.3 抗原测定结果52.4 动物试验结果52.5 药敏试验结果53 讨论 6 参考文献 7 致谢 8鸡源大肠杆菌的分离与鉴定动物医学专业学生指导教师摘要：山东青岛即墨某鸡场所养雏鸡发生一种以败血症、高死亡率为特征的急性传染病，病鸡的临 床症状多表现为精神萎靡，食欲减退或废绝，排白绿色稀粪等，剖检发现肝脏纤维素性炎症，呈铜 绿色，脾充血、肿胀，心外膜水肿等。从病鸡中分离到一株致病菌，经细菌学检查和动物试验，确 定该致病菌为大肠杆菌，抗原鉴定该菌的优势血清型为078。环丙沙星
3、、丁胺卡那、卡那霉素、新霉 素、链霉素对该菌高敏；庆大霉素、罗红霉素对该菌中敏；对强力霉素、恩诺沙星对该菌低敏；对 林可霉素、四环素、阿莫西林对该菌耐药。关键词：鸡；大肠杆菌；分离与鉴定；药敏试验Isolation and Identification of E .coli from ChickenStudent Majoring in Veterinary MedicineTutorAbstract:An acute infectious diseases characterized by high mortality rate and sepsis was occurrenced in C
4、hicken farms of Jimi in Shandong province, most of the chickens showed clinical symptoms of listlessness,loss of appetite,evacuated white-green liquid manure,and pathological change was showed that liver was copper green with fibrinous inflammation,spleen was congestion and swelling,epicardium edema
5、 and so on.A strain was isolated from diseased chickens and was examined with bacteriology inspection and animal test,and the result shows that the strain is Escherichia coli,and the serotype of the bacterium is O 78 by antigenic identification.The bacterium is high-sensitivity with Ciprofloxacin,ka
6、namycin,neomycin and streptomycin,middle-sensitivity with Gentamicin and net-mycin,low-sensitivity with doxycycline and enrofloxacin,and drug resistance with lincomycin,tetracycline and amoxicillin.Key words:chicken;Escherichia coli;Isolation and Identification;susceptibility test引言鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起
7、的鸡的不同类型疾病的总称1，是一种急性 或慢性的细菌性传染病。本病广泛发生与雏鸡、肉鸡、蛋鸡，临床症状复杂多变，较难 防治，给养殖业带来严重危害，是影响养殖业的重要疾病之一。大肠杆菌是革兰阴性无芽抱的直杆菌，大小为0.4-0.7ymx2-3ym，两端钝圆，散在 或成对2，有鞭毛，有的菌株可形成荚膜，易于在普通培养基上增殖，适应性强。本菌 对一般消毒剂敏感，但粘液和粪便的存在会降低这些消毒剂的效果。本菌对抗生素等药 物极易产生耐药性。在畜禽舍内，大肠杆菌在水、粪便和尘埃中可以存活数周或数月之 久。根据抗原结构不同，已知大肠杆菌有菌体（0）抗原170种，表面（K）抗原近103 种，鞭毛（H）抗原6
8、0种，因而构成了许多血清型。在引起人畜肠道疾病的血清型中， 有肠致病性大肠杆菌（简称EPEC）、肠产毒素性大肠杆菌（简称ETEC）、肠侵袭性大 肠杆菌（简称EIEC）和肠出血性大肠杆菌（简称EHEC）等之分。在170种“。”型抗原 血清型中约1/2左右对鸡有致病性，但最多的是01、 02、 04、011、 018、026、 078、 088 等血清型3。本病一年四季均可发生，且不同地区的优势血清型往往有差别。在一些大型和个体 养鸡场中，由于环境卫生条件较差，时常暴发鸡大肠杆菌病。由于鸡大肠杆菌血清型较 多，且各地流行菌株不同，往往给本病的免疫预防带来许多困难。此外，由于临床上缺 乏化验条件，生
9、产上盲目滥用药物，造成大肠杆菌耐药菌株不断产生，致使该病治疗效 果下降，给养鸡业造成了严重的经济损失4-8。雏鸡发病率可达 30%-60%，病死率几乎 达到 100%。大型集约化养鸡场鸡群密度过大，通风换气不良，饲养用具及环境消毒不 彻底可加速本病流行9。大肠杆菌随粪便排出，并可污染蛋壳，或大肠杆菌从感染的卵 巢、输卵管等处侵入卵内，感染种蛋，是该病传播过程中的重要途径。健康鸡通过消化 道采食被大肠杆菌污染的饲料和饮水或通过呼吸道吸入粘有大肠杆菌的尘埃可以造成 水平传播。因此，预防本病十分重要，为使雏鸡获得被动免疫，可用本场流行的大肠杆 菌血清型制备的多价活苗或灭活苗接种种禽。本病的发病类型较
10、多，常见的有败血症、心包心肌炎、全眼球炎、关节滑膜炎、腹 膜炎、输卵管炎、脐炎、气囊炎和大肠杆菌性肉芽肿等。败血症大肠杆菌主要发生于 6-8 周龄的肉用仔鸡，但不满一周龄的雏鸡也可大批发 病死亡。若在鸡群中有经蛋感染的幼雏，则其发病后排出毒力强的致病菌。通过消化道 和呼吸道而发生水平传播，在短期内可造成大批幼雏发生败血性大肠杆菌病引起死亡。 症状为极度萎靡，排白绿色稀粪。尸体剖检，在4月龄以上的仔鸡，除具一般败血症变 化外，突出的病变是浆液性纤维素性心包炎、纤维素性肝周炎、纤维素性腹膜炎、纤维 素性气囊炎、肠炎，脾充血、肿胀，肝呈铜绿色，实质内有白色坏死点。心包心肌炎型：浆液性纤维素性心包炎伴
11、发心肌炎，通常是鸡败血症型大肠杆菌病 的主要病变之一。但在中雏尤其是肉用仔鸡，有时以心包炎心肌炎为表现形式，病鸡呈 亚急性经过，病鸡消瘦，贫血，逐渐衰竭死亡。尸体剖检，病变是心包炎和间质性心肌 炎。心外膜水肿，并被覆淡黄色的纤维素性渗出物，心包呈不均匀的增厚，心包内充满 淡黄色浆液和纤维素性渗出液。有些病例还有小化脓灶和肉芽肿样小结节。全球眼炎型：常发生于败血型流行后期，一般仅一个眼发炎，眼结膜充血、出血， 眼前房和角膜混浊，随后失明。镜检可见，全眼都有异嗜性粒细胞和单核细胞浸润，脉 络膜充血，视网膜完全破坏。关节滑膜炎型：多见于肩、膝关节。关节明显肿大，滑膜囊内有大量的灰白色或淡 红色渗出物
12、，关节周围组织充血水肿。卵黄性腹膜炎及输卵管炎型：本病发生于成年鸡，一般是散发性，俗称“蛋子瘟”。 本病可经泄殖腔上行感染，病禽腹泻，腹部肿胀，蹲伏，脱水，逐渐衰竭死亡。腹腔内 充满腥臭的卵黄和凝固的卵黄块，腹腔内各脏器和肠系膜表面充血，有纤维素性渗出物 附着，病程长者出现肠袢、内脏之间纤维素粘连。卵巢中的卵泡变性、瘪缩，呈灰色、 酱色、褐色等。破裂的卵黄凝结成大小不一的团块。输卵管粘膜充血、出血，管腔内有 蛋白和纤维素凝块，严重时，塞满凝固的蛋白和卵黄。脐炎型：主要发生于出壳不久的雏鸡，多见有脐环闭合不全，脐孔周围红肿，并常 有皮肤破损、发硬，呈黄色，时间长者脐孔周围发红或呈紫黑色，后腹部肿
13、大皮薄而发 红或呈紫青色，拉黄白色或黄绿色稀粪，极为腥臭。病鸡全身衰竭，闭眼，垂翅，不愿 走动，减食或废绝，出壳后最初几天死亡率较高。气囊炎型：气囊增厚，表面有纤维素渗出物被覆，呈灰白色，由此继发心包炎和肝 周炎，心包膜和肝被膜上附有纤维素性伪膜，心包膜增厚，心包液增量、混浊，肝肿大， 被膜增厚，被摸下散在大小不等的出血点和坏死灶。大肠杆菌性肉芽肿型：本病特征是肝、盲肠、十二指肠、肠系膜出现肉芽肿，一般 为粟粒大至玉米粒大，切面灰黄色略呈放射状或轮层状，中央有脓点。该养鸡场发现多只病鸡，剖检观察，疑似大肠杆菌病。为准确诊断、治疗和预防， 对该致病病原体进行分离鉴定。从病鸡体内分离该致病病原体后，通过一系列细菌学检 查、动物接种试验及药敏试验，确定该病原体和敏感药物，为临床用
