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1、常用溶液的配制一、常规溶液（一）1/15mol/L PBS（磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution, PBS）甲液：1/15mol/L Na2HPO4 溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4 溶液KH2P049.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内，于4C冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液，见下表:pH甲液ml乙液mIpH甲液ml乙液mI5.292.597.56.8150.050.05.595.095.06.9860.040.05.9110.090.07.1770.030.06.2
2、420.080.07.3880.020.06.4730.070.07.7390.010.06.6440.060.08.0495.05.0（二）0.3%台盼兰染液称取台盼兰（Trypan blue）粉 0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤 纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。（三）0.5%酚红指示剂酚红0.5g0.1N（0.4%）NaOH 15ml双蒸水85ml将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。（四）5.6%NaHCO3 溶液称NaHCO35.6克
3、，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可（如需要也可10磅15分钟高压 灭菌，4C冰箱保存）（五）10g/ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4C冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。（六）0.4 % KCl-0.4 %柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。（七）2 %柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。（八）0.2%次甲基兰染液称次甲基兰（Methylene blue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。（九）0.5%醋酸洋红（Aceio Carmine）染液洋红lg醋酸90ml蒸
4、馏水110ml将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速 冷却过滤，加饱和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红 沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。（十）1% 甲苯胺兰（Toluidine blue）称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。（十一）1/3000中性红染液取中性红（Neutral red）0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。（十二）Giemsa 染液1. 贮备液Giemsa 粉1g纯甘油66ml甲醇66ml先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加
5、 入，放入56。温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。2. 工作液临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。（十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液苏木精1.0g乙醇50ml醋酸5ml甘油50ml硫酸铝钾5g蒸馏水50ml将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油 加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将 其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经 常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。二、细胞化学和细胞组分分离溶液(一)
6、 M 一缓冲液3.404g眯唑(Imidazole)KCI3.7gMgCl26H2O101.65mgECTA380.35mgEDTA29.224mg巯基乙醇0.07ml甘油297ml蒸馏水加至1000ml用lNHCl调pH至7.2室温保存。(二) 2%Triton X 一 100 溶液量取2mlTriton X 一 100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。(三) 0.2%考马斯亮兰R-250染液甲醇46.5ml醋酸7.0ml考马斯亮兰0.2g蒸馏水加至100ml(四)A. 0.1%碱性固绿染液(pH8.08.5)1. 0.1%固绿水溶液固绿(Fast green)0.1g蒸馏水
7、100ml2. 0.05%Na2C03 溶液Na2C0350mg蒸馏水100ml用时按1:1体积混合即可。B. 0.1%酸性固绿染液(pH2.2)1. 0.1%固绿水溶液。2. mol / Lx75 盐酸液盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml用时按l：1混合。(五)甲基绿一哌咯宁染液1.1mol/L 醋酸缓冲液(pH4.8)：(1) 醋酸17ml蒸馏水加至200ml(2) 醋酸水13.5g蒸馏水加至lOOml 用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。2.甲基绿一哌咯宁(methyl greenPyrcnln)5%哌咯宁水溶液6ml2%甲基绿水溶液6ml蒸馏水16mllmol
8、/L醋酸缓冲液16mllmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。（六）Schiff试剂将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50C时过 滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25C时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡， 避光过夜。次日取出（呈淡黄色）加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。 避光低温保存。（七）联苯胺混合液联苯胺（4.4 Diamino benzidine）0.2g95% 乙醇lOOml3%过氧化氢2滴此液临用时配制。（八）l%番红水溶液番红（Safranin）1.0g蒸馏水100ml（九）1%SDS（十二烷
9、基硫酸钠 Sodium dodecyl sulfate,SDS）SDS10g45% 乙醇100ml（十）1mol / LTris（三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL）pH7.8Tris12.114g蒸馏水lOOml先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml（十一）Ringer Solution氯化钠（冷血动物用0. 65克）0.9克氯化钾0.042克氯化钙0.025克蒸馏水100ml（十二）淀粉肉汤培养基蛋白2g淀粉6g牛肉汤100ml用 10%NaHCO3 调 pH 至 7.07.2（十三）0
10、.25mol / L蔗糖一 0.003mol/L氯化钙溶液蔗糖85.5g氯化钙0.33g蒸馏水1000ml（十四）1%詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿（Janus green B）1.0g Ringer 氏液 100ml（十五）1%刚果红染液刚果红1g蒸馏水100ml（十六）Gomori硝酸铅作用液0.05mol/L 醋酸缓冲液（pH5）lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200mlB-甘油磷酸钠2g醋酸铅2g5 %氯化镁5ml以上作用液在临用时配制，最终在pH55.2，过滤使用。（王世藩汇编）三、细胞培养和细胞融合溶液（一）0.01
11、mol / LPBS（磷酸盐缓冲液 Phosphate Buffer Saline, PBS）pH7.2。0.2mol/L磷酸氢二钠液（甲液）：NaH2PO4-12H2O35.814g双蒸水加至500ml0.2mol/L磷酸二氢钠液（乙液）：NaH2PO4-12H2O15.601g双蒸水加至500ml取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经 高压灭菌后保存于4C冰箱备用。（二）50%PEG（聚乙二醇 Polyethyleneglycol mwl500）称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37C予热的MEM培 养液，
12、混匀，保温在37 C水浴中待用。（三）MEM培养液（含10%小牛血清）MEM培养液（日本制药株式会社）9.4g双蒸水1000mlNaHCO31.5g谷氨酰胺（L-glutamin）0.292g56C灭活30分钟的小牛血清110mlMEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1（因在抽滤过程中pH升高0.20.3），然 后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4C冰箱 保存备用。（四）0.25%胰蛋白酶一 0.02%EDTA混合消化液胰蛋白酶（Trypsin）粉0.25gEDTA 粉20.0mg0.01mol / L PBS100ml液体呈透明为止），用G5抽
13、滤，分装置4c冰箱中保存。先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37C水浴中 1小时左右（待彻底溶解，（五）Hanks 液1.原液甲160g8g2g2gNaClKClMgSO4-7H2OMgCI2-6H2O溶于800ml馏水中。2.8gCaCl2（无水）溶于100ml蒸馏水中。将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4C冰箱备用。原液乙3.04g1.2g20.0gNa2HPO412H2O kh2po4 葡萄糖溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5%酚红80ml，再加水至1000ml,最后加入2ml氯仿防腐，置4C冰箱备用。
14、2. 使用液甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4C 冰箱中保存。使用时用5.6%NaHCO3调pH值到所需要求。（六）1640培养液（含lO%小牛血清）RPMI-1640 粉10.39g双蒸水加至1000ml通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全溶解。用NaHCO31.5克调pH值到7.2。双抗1万u/ml10ml灭活小牛血清110ml混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4C冰箱备用。（七）青、链霉素溶液青霉素钠盐（40万u /瓶）链霉素（100万u /瓶）2瓶将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水，分装小瓶，-30C保存。双抗在培养基中的终浓度 为各lOOu为宜。（八）二甲基亚飒诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4%。（九）BrdU 溶液（200ug/m1）用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解， 混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。（十）2xSSC溶液用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸
