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1、胶体金方法的优势以及灵敏度比对数据*公司新推出的胱抑素C测定试剂盒，采用胶体金包被抗体，胶体金颗粒在546nm有最大吸收，当胶体金颗粒和样本中的CysC抗原发生凝集时，在546nm的吸光度下降，吸光度值决定于CysC的浓度。此 方法避免了抗体在反应系统中初始吸光度较低造成灵敏度低的缺陷。采用546nm可见光区检测胶体金颗 粒吸光度的改变，使得测试结果特异性更强，而且吸光度变化更为稳定。1.1概述免疫胶体金技术（Immunogold Technique）是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原-抗体反应的一种免疫标记技术。胶体金（colloidal gold）是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂（如白磷
2、、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等）的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用形成一种稳定的胶体状态。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合只是 静电结合，所以蛋白质的生物学特性不受影响。胶体金除了可以与蛋白质分子结合以外，还可以与许多 其它生物大分子（如：SPA、PHA、ConA等）结合。利用胶体金的一些物理性质（如：高电子密度、 颗粒大小、形状及颜色反应等）以及结合物的免疫和生物学特性，胶体金被广泛地应用于免疫学、组织 学、病理学和细胞生物学等许多领域，并且发展出了一系列实验和检测技术。1.2反应机理利用免疫胶体金技术进行液相免疫测定是基于金溶胶
3、的重要特性：金颗粒与抗原（抗体）形成的结 合物在溶胶状态颜色基本上保持不变，当与相应抗原或抗体发生专一性反应后出现凝聚，溶胶颗粒极度 增大，光散射随之发生变化，颗粒也会沉降，溶液的颜色变淡甚至变成无色或蓝色（图1、图2）。这一原理可应用于定性或定量的免疫反应。Assay PrincipleColloidal gold particles combined with antibodies (Red-purple)0.005101520Points253035Time Course (Hitachi 7170)O 5 O- 52 L LO.Doucuqosq图2： Cys C反应曲线图1：胶体金液
4、相免疫测定原理免疫胶体金技术与胶乳增强免疫比浊法相比，该方法检测的灵敏度有了很大的提高。1.3与同类检测产品（胶乳加强免疫比浊法）比较:取*公司的试剂与B公司的试剂同在日立7060上对比检测，测试结果如下: 【定标数据对比】 校准液：B公司校准液，浓度为：0.00； 0.50； 1.00； 2.00； 4.00 mg/L共计五点校准校准液：*公司校准液，浓度为：0.00； 0.50； 1.00； 2.00； 4.00 ； 8.00 mg/L共计六点校准B公司：Cyscl定标数据如下:S1S2S3S4S5Cysc1-2425527427354424711443572754457-14209244
5、27055428211743112624387*： Cysc定标数据如下:S1S2S3S4S5S6CYSC-22220244-47419852-125320187-417318492-848716932-1053115509-20820274-49619972-121419461-414218862-833316733-10539155921）通过实验测试以吸光度的变化率来看：从标准液各点的吸光度变化上看，B公司试剂的变化远远小于*试剂的变化。B公司标准液浓度由0.5mg/L到1.0mg/L,吸光度变化率为27即：0.0027。*公司标准液浓度由0.5mg/L到1.0mg/L,吸光度变化率为7
6、50，即：0.0750。*公司的试剂吸光度 变化的敏感程度远远高于B公司的产品。2）通过实验测试以吸光度的重复性来看：B公司标准液浓度0.5mg/L，S2变化率分别为：27/24，重复性很好，差异仅有3,但是对比与其自 身的偏差达到：3/27=11%。*公司标准液浓度0.5mg/L，S2变化率分别为：474/496，重复性很好，差异为22，但是对比与其 自身的偏差为：22/496=4.4%。附录2：试剂精密度数据-1胱抑素 C Between-day 和 Within-day 数据Serum 11st run2nd run3rd run121212Mean10.800.790.810.810.
7、820.810.8120.780.800.800.810.800.830.8030.800.790.810.800.810.800.8040.810.790.800.800.800.770.8050.800.820.830.800.820.820.8260.800.810.790.790.800.790.8070.790.800.820.830.790.790.8080.800.840.820.800.810.800.8190.810.790.780.780.770.770.78100.790.800.820.790.820.810.81110.810.810.820.810.800.820.
8、81120.800.790.770.770.810.770.79130.800.800.790.790.790.800.80140.810.810.780.780.820.780.80150.790.810.810.810.830.790.81160.810.780.800.790.790.790.79170.820.820.810.800.810.800.81180.790.810.800.780.800.780.79190.820.800.820.810.810.830.82200.800.810.790.800.800.810.80Mean:0.80项目变动自由度分散SDCVBetwee
9、n-day0.009497190.0005000.010.9%Within-day0.0164331000.0001640.011.6%合计0.025930Serum 21st run2nd run3rd run121212Mean1.461.461.481.471.491.501.481.461.461.461.441.481.451.461.471.461.471.481.451.491.471.451.441.471.471.431.471.461.451.441.461.461.481.471.461.451.421.431.441.401.411.431.481.441.451.48
10、1.461.471.461.491.461.431.461.471.481.471.471.441.441.491.481.481.471.461.431.391.441.441.421.431.431.421.431.431.451.461.441.411.431.391.451.431.431.421.471.441.451.441.451.471.451.461.451.431.451.441.471.451.461.431.461.471.471.461.461.461.421.451.461.451.461.451.481.451.461.441.461.481.461.461.43
11、1.441.421.441.451.441.481.461.481.481.481.481.481.491.451.471.451.441.451.46Mean:1.45分散分析表项目变动自由度分散SDCVBetween-day0.028143190.0014810.011.0%Within-day0.0279171000.0002790.021.1%合计0.056059Serum 31st run2nd run3rd run121212Mean1.961.972.032.032.022.012.002.011.951.981.981.992.001.991.981.972.031.951.9
12、91.921.971.971.942.001.951.991.931.961.981.922.001.971.991.961.971.991.941.981.921.941.921.952.011.941.991.951.991.971.982.001.951.961.942.001.961.971.991.942.001.942.011.981.981.961.901.981.971.951.921.951.951.931.981.951.981.931.951.961.971.951.941.941.961.951.971.982.012.011.991.941.982.021.981.981.951.961.921.971.981.932.001.972.021.961.981.981.952.001.971.971.961.971.961.961.981.961.981.991.972.001.921.951.911.991.941.95
