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1、液相色谱法测定混合物中荼、联苯、菲实验目的1. 巩固色谱分析的原理2. 掌握液相色谱的分析原理及过程3. 了解LC 5500高效液相色谱仪的基本结构和工作原理4. 掌握LC 5500高效液相色谱仪的基本操作步骤5. 掌握HPLC定性、定量（外标）分析的方法实验原理根据混合物中萘、联苯和菲在固定相与流动相间分配性质的不同，进行分离。本次实验 采用ODS-C18色谱柱，以甲醇为流动相，检测器采用紫外分光（UV）检测器，检测波长为 254nm。仪器与试剂仪器：LC5500液相色谱仪 1台KQ-50B超声波清洗器1台AP-01P真空泵 1台过滤装置 1套微量注射器 50p L1支容量瓶 50mL 7只
2、药品：甲醇（G.R.）、萘（G.R.）、联苯（G.R.）、菲（G.R.）、苯（G.R.）、丙酮（G.R.）实验步骤一、流动相的准备1. 流动相的选择根据待分离组分性质，选择适当的流动相。本次实验采用无水甲醇作流动相。2. 流动相的配制本次实验采用无水甲醇为流动相，故流动相无需配制。3. 流动相的过滤选用0.45p m的有机相过滤膜，安装抽滤装置，过滤试剂甲醇。4. 流动相的脱气将盛有过滤好甲醇的试剂瓶放于超声波清洗器中，进行脱气处理。视试液总量，脱气时 间控制在1530min。二、仪器的准备1. 更换流动相2. 排除气泡3. 开启主机、高压泵电源4. 进行“梯度淋洗”调整高压泵显示窗口为仪器工
3、作状态显示窗口，在“方法”菜单中选择“梯度淋洗”命 令，设定“时间一一流量”关系表，执行“梯度淋洗”命令，以使色谱柱适应流量的变化。三、分析步骤1. “梯度淋洗”结束后，分别设定“分析参数”、“仪器条件”和“样品信息”2. 设置高压泵流量F 1=1.00mL/min3. 待仪器各参数稳定后，完成标样与试样的分析1）定性分析：分别吸取各个单组份试液完成分析，获取各组分的保留时间2）定量分析：A. 按要求吸取适量标样进行分析B. 根据定性结果，对各组分检测信号进行判定C. 依据标样的检测信号，建立组分表，确定“检测信号”与“浓度”的关系4. 吸取试样，完成分析过程四、数据处理选择适当格式的报告格式
4、，打印报告。五、仪器的清理（结束工作）1. 更换流动相将流动相重新更换为处理过的甲醇，以利于色谱柱的保护。2. 清洗“进样阀”用适量的甲醇清洗进样器、进样阀，以避免样品组分的残留。液相色谱法的条件试验实验目的1. 掌握色谱分析的原理2. 掌握高效液相色谱仪的基本结构和工作原理3. 掌握SY-8100高效液相色谱仪的基本操作步骤4. 掌握HPLC条件试验的方法以及分离条件的确定实验原理本次实验采用ODS-C18色谱柱，以甲醇+水混合液为流动相，根据混合物中萘、联苯和 菲在固定相与流动相间分配性质的不同，进行分离。不同比例的甲醇+水混合液为流动相， 流动相的极性发生改变，因此混合液的分离条件也发生
5、了改变，选择能将混合液中各组分能 充分分离并且相对分析时间短的条件，综合确定HPLC法分析萘、联苯、菲的分析条件，完 成对混合液的分析。检测器采用紫外分光（UV）检测器，检测波长为254nm。仪器与试剂仪器：SY-8100高效液相色谱仪1台KQ-50B超声波清洗器1台AP-01P真空泵 1台过滤装置 1套微量注射器 50 L1支容量瓶 50mL 7只药品：萘（G.R.）、联苯（G.R.）、菲（G.R.）、甲醇（G.R.）、二次蒸馏水实验步骤一、流动相的准备1. 流动相的过滤安装抽滤装置，选用有机相过滤膜，过滤试剂甲醇；选用无机相过滤膜，过滤二次蒸馏 水。2. 流动相的脱气将盛有过滤好甲醇、二次
6、蒸馏水的试剂瓶分别放于超声波清洗器中，进行脱气处理。二、仪器的准备1. 更换流动相将A泵的输液管放入处理好的甲醇试剂瓶中；B泵的输液管放入处理好的二次蒸馏水试 剂瓶中。2. 分别排除A、B两个泵输液管中的气泡3. 开启高压泵A、高压泵B、UV检测器、混合器的电源，打开工作站三、分析步骤1. 分别设置两个高压泵的流量，使总流量为F = 1.00mL/min，分别启动两泵2. 待基线稳定后，完成标样的分析，记录分析所获得的各组分的保留时间、理论塔板 数、分离度。数据填表3. 选择最佳流动相配比，调整A、B两泵的流量。待基线稳定后吸取标样，完成分析后建立组分表，再完成试样的分析，测得试样中萘、联苯和
7、菲的含量，完成实验A泵流量mL/minB泵流量mL/min总流量mL/min组分名称保留时间min分离度1.00.01.0萘4.390.00联苯4.610.95非5.202.290.980.021.0萘4.620.00联苯4.941.40非5.642.810.960.041.0萘4.920.00联苯5.351.74非6.193.070.940.061.0萘5.180.00联苯5.752.15非6.743.400.920.081.0萘5.620.00联苯6.392.60非7.623.700.900.101.0萘6.110.00联苯7.133.14非9.644.07四、仪器的清理（结束工作）1. 更换流动相将流动相重新更换为处理过的甲醇，以利于色谱柱的保护。2. 清洗“进样阀”用适量的甲醇清洗进样器、进样阀，以避免样品组分的残留。
