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1、淋巴细胞亚群测定在同种异体肾移植术后的应用 作者：邬露丹 徐炜峰 丁金飞 【关键词】 肾移植免疫排斥反应是引起实体器官移植失败的主要原因，其发生发展与患者的T、B、NK细胞水平有关。为了准确地反映患者体内的免疫功能，作者应用流式细胞仪，对120例临床肾移植术后患者外周血淋巴细胞亚群的绝对值进行测定，同时对不同的分组情况进行分析，现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料 1995年3月至2006年12月，在本院接受同种异体肾移植（RT）手术的120例患者，男68例，女52例；年龄2378岁。手术后常规剂量应用环孢素A、骁悉、强的松等抗排异药及新生霉素、氧哌嗪等抗炎药物。根据其术后是否顺利恢复，
2、有无急、慢性排斥反应及各种并发症分组：(1)肾移植后顺利恢复组：38例肾移植术后6个月内，无急、慢性排斥反应，无各种细菌、病毒感染及各种手术并发症，给予环孢素A、骁悉、强的松等抗排异治疗，查肾功能正常。(2)肾移植后急排组：11例肾移植术后早期肾功能恢复正常。术后3个月内发生急性排斥反应，经激素冲击治疗，移植肾功能逆转。(3)肾移植后慢性排斥组：21例肾移植术后，8个月11.5年间出现肌酐、尿素氮升高、尿蛋白等肾功能减退症状，被诊断为慢性排异反应，给予强的松，新塞地平等抗排斥反应治疗后有所稳定。(4)肾移植后有并发症组：20例肾移植术后有各种细菌、病毒感染如尿路感染、巨细胞病毒感染等给予头孢呋
3、辛等抗感染治疗后身体及肾功能恢复良好者。(5)正常对照组：为本院健康体检者30例。1.2 仪器与试剂 FACS Calibur流式细胞仪、试剂购置于美国B-D公司，包括荧光标记单克隆抗体试剂盒，溶血素（FACS Lysing Solution）等；美国贝克曼-库尔特公司的LH 750血球计数仪及其相应的配套试剂。1.3 检测方法 取空腹静脉血，用EDTA抗凝，按照说明书要求，经四色荧光微球校准流式细胞仪后，用Simulset软件获取与分析，测得T淋巴细胞各亚群的百分比，同时通过检测患者的血常规，测得淋巴细胞绝对值，把上面两数值相乘，得到每l全血中T淋巴细胞亚群的绝对值。见表1。1.4 统计学处
4、理 采用SPSS 12.0统计软件，所有资料均用（xs）表示，采用成组t检验。表1 肾移植术受者淋巴细胞亚群绝对值测定结果（略）与对照组比*P<0.05，P<0.013 讨论 随着免疫抑制剂的不断推陈出新，肾移植作为治疗终末期肾衰竭的重要措施被较多地采用。移植术后患者会有多种不同的临床表现，其中每个个体的免疫状态的不同与其疾病的发生、发展、预后呈现一定的关系1。为全面评价肾移植受者的免疫状况，作者检测了肾移植术后临床表现不同的患者淋巴细胞亚群的绝对值，分别代表TH、TC、NK、B四种主要淋巴细胞的分化抗原,可特异地反映受者机体细胞免疫及体液免疫的功能状态。 肾移植术后顺利恢复组大部
5、分淋巴细胞亚群免疫表型阳性细胞数接近临床正常值，由于免疫抑制剂的联合应用对NK细胞有明显抑制作用2，又由于CSA对免疫系统的作用主要是抑制CD4+细胞及对T细胞的活化有重要作用的IL-2、IL-4等因子的基因表达，对CD8+细胞作用较小，所以该组患者CD3+、CD4+细胞和NK细胞都受到一定程度的抑制，其中NK细胞下降尤其显著(P<0.05)。肾移植术后急性排斥组CD3+、 CD3+CD4+、CD3CD19+细胞数增加明显（P<0.01），NK细胞数增加（P<0.05），CD4+CD8+比值增高（P<0.01），在排斥反应发生前期，淋巴细胞绝对值增加，虽然有许多细胞参与
6、急性排斥，但T细胞是绝对必需的，因为针对外源蛋白抗原的体液和细胞介导的免疫反应都需要CD4+ T细胞的识别后才会有一系列后续的效应。本实验中的NK细胞也有明显增加,此研究结果与国内外相关研究结论相吻合3，4，在同种器官移植排斥反应的效应阶段，可检测到NK细胞活性增高，且与排斥反应的程度有一定的相关性。因此，早期监测T、B细胞、NK细胞的变化对预测排斥反应的发生有重要意义。肾移植术后慢排组表现为CD3+、CD3+CD8+细胞数增加（P<0.05），NK细胞数降低（P<0.01）、CD4+/CD8+比值下降（P<0.05），在移植免疫中，CD3+CD8+细胞数增高即CTL对靶细胞
7、的杀伤已成为免疫系统清除同种异体细胞最重要的方式和途径，遏制CTL的活化才有助于延缓移植物的排斥；在本实验中可能促使排斥反应发生的NK细胞尽管有一定程度的抑制，但依然有慢性排斥反应的发生。究其原因，依据Banff分类标准，肾移植术后慢性排斥反应被定义为慢性同种移植肾病（Chronic allograft nephropathy）5,作为一种独立的疾病，它是由自身抗原依赖和非自身抗原依赖的多种因素作用的结果。 肾移植术后并发症组CD3+、CD4+和NK细胞数降低（P<0.05）、CD3+CD8+细胞数增加（P<0.05），CD4+/CD8+比值降低（P<0.01），而CD4+
8、/CD8+比率的变化是预测感染与排斥的重要指标6，此结果提示可能有免疫抑制过量，导致感染发生的可能。所以作者通过观察肾移植受者外周血CD4+、CD8+ 、CD16+CD56+、CD19+、CD4+ /CD8+的改变，有助于综合评价受者细胞及体液免疫状态，同时结合受者临床表现以及血肌酐，尿素氮,尿常规检验，移植肾B超形态，结合血中免疫抑制剂浓度的测定进行综合分析。能较为准确地了解移植术后患者的免疫状态，预测移植物排斥反应倾向，及时调整免疫抑制剂用量，为临床诊断、判断预后提供依据。【参考文献】 1 Thibaudin D, Alamartine E, Mariat C, et al. Long-t
9、erm kinetic of T-lymphocytesubsets in kidney transplant recipients: influence of anti -T-cell antibodies and association with posttransplant malignancies.Trans -plantation，2005，80(10):15141517.2 Vacher-Coponat H, Brunet C, Moal V, et al. Tacrolimus/mycophenolate mofetil improved natural killer lymph
10、ocyte reconstitution one year after kidney transplant by reference to cyclosporine/azathioprine. Transplantation， 2006，82(4):558566.3 Bravo Soto JA， Esteban de la Rosa RJ，Luna del Castillo JD，et al. Effect of mycophenolate mofetil regimen on peripheral blood lymphocyte subsets in kidney transplant r
11、ecipients.Transplant Proc， 2003，35(4):13551359. 4 傅耀文,张志宏,李胜文, 等.T细胞亚群的检测在肾移植术后急性排斥反应时的临床意义. 中国免疫学杂志 , 1997, 13 (3):179180.5 Solez K,Axelsen RA ,Benediktisson H , et al. International standardization of criteria for the histologic diagnosis of renalallograft rejection : the Banff working classification of kidney trans-plant pathology. Kidney Int ,1993 ,44(2) :411422.6 费继光,吴培根,陈立中,等. 测定CD38+ CD8 + T 淋巴细胞在监测肾移植后巨细胞病毒感染中的作用. 中华肾脏病杂志,2002 ,18 (4) :251253. / 文档可自由编辑打印
