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1、实验三多糖含量的测定1、分光光度法测多糖的原理和方法2、用Office excel作标准曲线二、仪器与试剂1、仪器:7200分光光度计、水浴锅、电子天平2、试剂:1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓H2SO4、dH2O3、器皿:50ml容量瓶、10ml量筒、玻璃棒、洗耳球、烧杯、试管、试管架三、步骤1、标准曲线的绘制 取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶,加入dH2O溶解并小心稀释至刻度,再取5ml于50ml 容量瓶中,加dH2O稀释,即1.0mg/ml; 分别量取0.25ml, 0.5ml, 1.0ml, 1.5ml,2.0ml,2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶中, 加dH2O定容; 分
2、别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓H2SO4,摇匀后, 室温放置5min,然后置于90oC水浴15min,冷却至室温;空白对照:同样取2ml dH2O +1ml 5%苯酚+ 5ml浓H2SO4,摇匀后,室温放置5min, 然 后置于90oC水浴15min,冷却至室温;吸光度A得,浓度C与吸光度的线性方程y=ax+b2、准确量取多糖溶液(待测)2.0ml于50ml容量瓶中,加dO定容,方法同上述。四、实验结果 实验主要步骤(记录) 用Excel作图,并选择性粘帖至Word到PDF 计算浓度(待测液)五、实验注意1、高毒一一苯酚(强腐蚀)!2、高腐蚀一一浓硫酸
3、!一实验步骤标准曲线的绘制 取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶,加入dH2O溶解并小心稀释至刻度,再取5ml于 50ml容量瓶中,加dH2O稀释,即1.0mg/ml;待测溶液也用同法,空白对照组同法 分别量取0.25ml, 0.5ml, 1.0ml, 1.5ml, 2.0ml, 2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶 中,定容;取待测2.0ml于50ml容量瓶中,定容,空白对照组用2ml蒸馏水。(图为定容好以后的,0.25ml, 0.5ml, 1.0ml,1.5ml, 2.0ml, 2.5ml 葡萄糖溶液) 分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓H2SO4,摇匀 后,室温放置5min,然后置于90oC水浴15min,冷却至室温;(加入苯酚,试管颜色仍为透明无色,加入浓硫酸以后,试管变热,反应激烈,立马有细小气泡产生,且颜色变黄,葡 萄糖溶液浓度越高,黄色越深)(全部试管滴加完浓硫酸以后 的试管颜色按浓度由高到低摆放,最左边的是待测溶液,颜色为浅黄色)n心 .叱i0.70.60.50.4030.20.1 = 1332)(-0.0526、十=3,-1丄” 10.010.020.030.040.D50.06X轴为浓度Y轴为吸光度三计算浓度待测溶液的吸光度为0.013由此推算出待测液浓度为0.004925