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1、溯源性和标准化、基本概念（一）溯源性定义：通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准， 通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。VIM: 1993,定义6.10 :临床检验的目的：对患者新鲜标本检验报告可靠的结果。临床检验的传统：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告。因此，发出报告的可靠性必须体现两个基本要求：精密度：重复性好；准确度：和参考方法具有可比性。在临床检验中，公认：在参考实验室内，由具有认可资格的操作人员使用参考方法、或以参 考品为标准，对新鲜标本进行的检测结果是参考值结果。可是，在参考实验室内的所有参考方法是手工方法；或使用参考品
2、校准的方法，在实现参考值的传递上非常烦琐。在日常检测中，无法使用这样的参考方法或参考品进行大量病人标本的检测，出报告。因此，现实问题 是：是否可以让常规的检测系统，对病人标本的检测，在计量单位一致的前提下，得到和参 考系列相同的检测量值。 这就是通过一条不间断的比较链，使检测结果或检测标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来。为此，生产厂商必须对完成检测涉及的检测系统各组分（仪器、试剂、校准品、和操作程序）进行严格的标准化程序，实 现溯源性。（二）标准化1972年，由ISO出版，T. R. B. Sanders主编的标准化的目的与原理一书对标准 化下的定义是：“标准化是
3、为了所有有关方面的利益，特别是为了促进最佳的、 全面的经济并适当考虑到产品使用条件与安全要求，在所有有关方面的协作下，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程。”可以简单理解为：为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商的所有努力的过程为标准化。（三）理解检验的特点1 .检验的检测对象是病人标本，而且一定是新鲜的标本。实验室使临床和病人满意的是检验结果的可靠性。实现结果可靠性的质量管理有许多内容。 在保证收集和处理的标本质 量、在检验后不存在处理检测数据和发出报告的差错前提下，获得可靠结果的主要阶段是分析过程的质量。2. 检验的习惯是对每份病人标本只做一次检测，就发出报告；而且，每
4、个标本内究竟内含多少分析物无法知道。因此，度量检验的分析质量不能以工业上的多次采样、多次检测或测量、取均值和预定标准比较等方式来观察。3. 病人结果可靠性的含义是准确度。国际上准确度的定义为：检测结果和被检测物/ 分析物真值间的一致性。（VIM93-3.5 ）。注：a）作为结果，在真值和该值间的差异，通常表示为相同的计量单位；此时，表示差异的更确切的词为“不准确度”。b）可以使用“可接受的参考值”替代“真值” 。（ISO3534-1,3.11 ） c）特别是对每个标本只作一次测定时，差异不仅包括分析过程的不准确度，也包括了分析过程的不精密度。4. 检验质量的首要问题是分析过程（即检测的）精密度
5、。定义为：各个重复检测值间 的一致性。度量精密度的指标是不精密度。也即：临床要求结果的重复性好。5. 自动化在临床检验的应用，极大地提高了检验的效率和质量。而且，在多年的实践 中，认识到：保持检验必需的自动化仪器、试剂、校准品、和操作程序的固定组合，是实现 溯源性的前提。否则，一事无成。因此，要使检验结果的量值和参考系统结果一致，也就是 对涉及检验的检测系统各组分的标准化。（四）、如何理解校准品1 衡量一个检测系统（检验方法）的基本分析性能有4点：不精密度、不准确度、病人结果可报告范围、 分析灵敏度。使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得到了显著的提 高；在优良试剂盒的配合下， 病人结果的可报
6、告范围也可以满足临床要求；大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要求。 这样，结果的可靠性的关键是准确度，即对校准品值的调节。因此，实现新鲜病人标本结果的溯源性，成为使校准品值实现溯源性。2. 认识标准品传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品（Standard）。以临床化学检验的比色测定为例，常作三个检测：空白、标准、测定。用空白液调整吸光度为零， 读出测定比色液和标准比色液的吸光度，分别为As和Au ;已知标准液浓度为 Cs。在一定范围内，某分析物浓度和吸光度呈良好比例关系，则样品内某分析物浓度Cu为：AuCu 二丄 XCsAS一般而言，检验工作使用的标准品属应用标准。配制
7、或供应这类标准品的实验室或厂商具有符合质量标准的纯品。 称取一定量的纯品， 然后将其溶解，在容量瓶内用溶剂稀释至容 积刻度，混匀，标准液配制完成。由称量法获得的称量值和容量法配制的容积，计算出该标 准品浓度。检定部门抽样测定，结果在规定范围内属合格。即使测定检定结果在范围的上、 下限，也不能将实测值作为标准值。因为测定值的可靠性取决于检定方法，一般的分析方法的可靠性不如分析化学公认的称量法和容量法。所以标准品的定值由称量和容积计算确定。 检定不合格即报废，决不可将实测值替代修正。3. 校准品和定值为了克服因纯标准液和病人样品间的基体差异，对检验结果的严重误差，20年前开始引用具有与病人样品基体
8、相似的校准品替代标准品，用于日常工作。可是，尽管校准品的主要来源是人的血清，为了使校准品内的一些分析物水平达到某个程度，而且形成稳定的产品，所有的校准品、控制品、室间调查品等都是处理过的血清。和原来的天然血清间又产生了新的基体差异。（1）校准值随方法而异校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能倚赖于分析方法。 校准品的校准值必须取决于分析方法或检测系列。（2）新鲜病人标本是最佳校准品由于所有校准品都是处理过的样品，和新鲜病人标本有着基体差异。若使用公认的参考方法去标化测定校准品， 测定程序是严密的， 测定值是可靠的。但使用该测定值去校准常规 的检测系列时，校准品中被检分析物参与反
9、应时的表现明显不同于新鲜病人标本，不能将参考方法系列的准确度通过校准品传递给病人标本。须明确的，所有用于检验中的检测方法、 仪器、试剂等都是用来检测病人新鲜标本的，不是用来检测校准品这样的处理过样品。如果先用公认的参考方法检测病人标本，再以具有参考值的病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器），此时该检测系列再检测其他新鲜病人标本时，这些病人标本结果的溯源 性可上溯至公认的参考方法。也即用新鲜病人标本是校准检测系列的最佳校准品。用这种方式校准，能使同一个检测系列在不同实验室检测新鲜病人标本时，检验结果在实验室间具可比性。一些大公司正是按照这样的认识为校准品定值。原则上，以具有参考值的新鲜
10、病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器）后，检测系列再去检测候选的校准品（处理过），得到的检测值为初始校准值。以初始校准值反过来再校准组合的检测系列后，该检测系列又去检测病人的新鲜标本。观察病人标本的检测值是否和参考方法的测定值具良好的可比性。实践说明，只有不断地调整校准值，直至用该校准值校准指定的检测系列（加上具有校准值的校准品，即组合成检测系统）后，检测 系统再检测病人标本，得到的测定值和病人标本的参考方法测定值具有满意的可比性，此时，校准品的校准值可以确认。二、公司标准化的大致内容和步骤（一）实现溯源性的必备条件1 建立“公司一级参考品”：准备多个混和血清，经离心、过滤等处理后，
11、各个混和血 清分装成小包装。-70C保存。试验说明，这样保存的血清复融后具有的性能和新鲜血清相似。所以，这些血清组是公司产品标准化的“公司一级参考品”。由参考实验室使用参考方法，或采用参考品对这些血清定值，使血清具有参考值。2 设立公司内部使用的“一级校准品”：由于参考系统或参考材料的使用常常是很有限的，因此，必须设立内部使用的参考系统 （或材料）复制品一即设立公司一级校准品（MasterCalibrator ）。对公司一级校准品的定值方案见以下内容。除了有公司一级校准品外，还需要建立公司生产用的应用校准品（Working Calibrator ）。日常供应的校准品为商品校准品（Bus in
12、ess Calibrator ）。所有各种校准品的原料要求和加工制备工艺一样。只是在定值方案 上有区别。大致上，定值按照下列两个步骤的方法：（i）按照参考标准化方式对公司一级校准品定值，（ii）常规校准品（routine calibrator）按照常规标准化方式定值。3自始至终以方法学比较实验为确定、验证、或传递定值的手段。因此，除了上述的 混和血清组外，随时还需要实际的新鲜病人标本，供方法学比较用。4. 进行定值的实验室：按照德国法律规定，为Roche诊断公司控制品和校准品确定定值的实验室，遵从法律上受委托的质量导则，所以完全符合专业实验室的规定。选择合适的实验室是定值质量的先决条件。参加定
13、值的实验室要求见表1。为了确保实验室独立完成工作，Roche公司很少参与实验室为进行靶值设定的实施，并且确保所有数据的及时返回。对于公司“一级参考血清”的参考值定值，由公司选择国际上知名的参考实验室委托 定值。这些参考实验室在国际上的数量很少，每个实验室只是对某一个或几个项目接受定值委托，费用昂贵。但是，这是公司校准品定值的依据。表1外部实验室参与靶值设定的质量要求组织机构有明确的职责，有训练有素的检验人员 有明确的操作程序检测仪器有具体说明和注意保养加样系统加样器的校正（分析天平） 有控制图样品处理对冻干样品的复溶有具体说明， 对深低温冰冻样品的冻融有具体说明内部QC系统有QC图室间QC系统
14、参加室间质量评估，有相应的反馈万案有合适的计算机系统，用于方案储存有合适的储存条件，对储存温度有记录和检查实验室和Roche诊断公司的联系有反馈，实验室主任参加会议，互相联系5确定公司产品对病人标本检测结果可溯源的参考方法或参考品目前，公司的部分产品指定以表2中所列的参考方法或参考品为溯源目标。表2罗氏公司校准品的溯源性项目名称参考方法或参考品ACP酸性磷酸酶（磷酸酚酞）罗氏试剂，手工方法Alb白蛋白（plus）CRM470Alb白蛋白（BCP）CRM470a-1-抗胰蛋白酶（免疫透射）CRM470ALP碱性磷酸酶（IFCC）IFCC1983推荐的手工方法ALP碱性磷酸酶（DGKC 1972
15、）罗氏试剂，手工方法ALP碱性磷酸酶（SFBC/AMP ）罗氏试剂，手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基转移酶（IFCC加/或不加PYP ）IFCC 1985推存的手工方法ALT/ALAT 丙氨酸氨基转移酶（DGKC ）罗氏试剂，手工方法Amy淀粉酶（IFCC）依据IFCC 1998推荐罗氏试剂，手工方法P Amy胰淀粉酶（液体）罗氏试剂，手工方法Apo-A1 载脂蛋白A1 （免疫透射）WHO，国际参考品SP1-01ApoB载脂蛋白B （免疫透射）WHO，国际参考品 SP3-07ASLO抗链球菌溶血素 O （颗粒增强，免疫透射）内部标准AST/ASAT天门冬氨酸氨基转移酶（IFCC加/或不加PYP ）IFCC 1985推存的手工方法AST/ASAT天门冬氨酸氨基转移酶（DGKC ）罗氏试剂，手工方法碳酸氢盐新标准（纯物质称量）TBIL总胆红素（DPD）D
