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1、脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业：学号：姓名：一实验目的：从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理，树立牢固的无菌观念。二实验器材：试管架,酒精灯，污物盘，普通冰箱，隔水式电热恒温培养箱，奥林巴斯CX21型生物显微镜，乙醇乙醚，吸水纸，石蜡油，拭镜纸，染色架，革兰染色瓶，1500W电炉，石棉网，手套，酒精棉球，镊子，碘酒棉球，接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、冷藏室、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1%。新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、
2、牛皮纸、橡皮筋、尺子三方法与步骤： 培养基的制备、消毒和火菌：1. 调配t溶化t矫正pHt分装t灭菌t检定t保存。2. 干粉培养基T蒸馏水T加热溶化T分装T火菌T检定T保存。 细菌的分离培养:采用平板划线分离法，将取脓汁和粪便标本中混杂的多种细菌，分别在普通平板和伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37C培养1824h，从而分离出单个菌落。 细菌的纯培养：脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落；粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。挑选这四种不同菌落分别在斜面培养基上接种 细菌的形态学检查：涂片制备t干燥t固定t革兰染色 细菌的生化试验等：糖发酵试验，细菌药物敏
3、感性试验，血浆凝固酶试验，半固体接种法，痢疾血清玻片凝集反应 结果观察、分析、总结四结果与讨论脓汁和粪便标本细菌检测结果标本菌落形态血浆凝固酶葡乳半福痢血清青链庆结论脓汁黄色G+球+金黄色葡萄球菌白色G+球-+白色葡萄球菌粪便紫黑八ZG杆+-+大肠埃布菌粉红G杆卜-+-+福氏志贺菌结果讨论：1. 在制备好培养基后，我们首先采用的是平板划线分离法，从脓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落t在显微镜下观察，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌t再结合菌落或菌苔颜色，可初步断定，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌t再通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌
4、。2. 用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和福氏志贺菌。在实验过程中，出现以下情况：1. 开始做实验的时候，可能是第一次做微生物实验，很多操作都不规范。例如，没有在无菌操作区进行操作；没有坐着操作；操作时经常会和旁边同学交流；棉塞下端接触到管口外的地方；试管用完后忘记将管口迅速通过火焰3次等等。这些错误的操作的发生，都因为没有养成无菌操作的习惯，应加以改
5、进。2. 在培养基上接种培养细菌后，出现有的培养基显示的细菌数量聚集在一起，没有形成单菌落，这是因为，划线的时候力度不对，把琼脂给划破了，标本都渗进了琼脂里面，再用接种环划线时也不能将细菌分离。3. 在进行糖发酵试验时，结果显示该有气体产生的却没有气体产生。这可能是因为我们试验完成后，管口朝上，反应过程中产生的气体溢出，观察不到正确的实验结果。综上所述，对病原菌的正确检测对指导临床用药具有重要意义，只有在正确知道细菌种类的情况下才能对菌用药，否则就会容易造成耐药性的产生，不容易治愈疾病。在试验过程中必须严格按照试验的要求去做，操作者应树立一种无菌概念，尽量在无菌环境下操作，既能确保能够得出正确的实验结果，又保证操作者的安全和环境不受污染。
