《茶多酚和咖啡碱综合提取及初步纯化》由会员分享，可在线阅读，更多相关《茶多酚和咖啡碱综合提取及初步纯化（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验一茶多酚和咖啡碱综合提取及初步纯化、实验目的掌握多酚类、咖啡碱综合提取分离技术的原理和方法。并通过薄层层析法对茶多酚 和生物碱进行初步纯化，学会初步纯化的方法与步骤。二、实验原理许多研究已表明茶叶中多酚类具有抗氧化性能，使食品的天然抗氧化剂，它对食品 油脂的抗氧化能力为VE、BHT （二丁基羟基甲苯）及BHA（丁基羟基茴香醚）的3-9倍， 而毒性比BHT和BHA低2-3倍。茶叶中嘌吟碱主要组分是咖啡碱，其含量占整个嘌吟 碱99%左右。咖啡碱具有兴奋神经中枢、消除疲劳、兴奋和强心作用，同时咖啡碱还 有增加肾脏流血量，提高肾小球过滤率、有利尿等作用。茶叶中咖啡碱易溶于80r热水和氯仿的。先用热
2、水浸提，然后用三氯甲烷萃取即 可得到咖啡碱粗制品。茶叶中多酚可用乙酸乙酯萃取得到粗制品。三、实验设备、试剂电炉、旋转蒸发仪、烘箱、分液漏斗、烧杯、量筒试剂1：三氯甲烷、试剂2：乙酸乙酯四、实验步骤（1）多酚类、咖啡碱综合提取技术1、取干燥的茶叶10g，按比1:8的比例加沸水，煮沸30min，浸提过程搅拌数次。8层 纱布过滤，合并滤液。2、用等体积试剂1萃取三次，再用旋转蒸发仪浓缩蒸干得到咖啡碱粗品，然后用约 2ml三氯甲烷溶解倒入小烧杯内，50C蒸干。回收试剂1，以便重复利用。称量计算得率。3、用等体积试剂2萃取上一步的水层3次，再用旋转蒸发仪浓缩蒸干得到茶多酚粗 品，然后用约2ml乙酸乙酯溶
3、解倒入小烧杯内，70C蒸干。回收试剂2，以便重复利用。称 量计算得率。流程图：（2）咖啡碱和茶多酚的薄层层析1、将浓缩蒸干的咖啡碱粗品用少量三氯甲烷溶解，作为样品溶液1;蒸干的茶多酚粗品 同样用乙酸乙酯溶解作为样品溶液2,然后进行薄层层析。取出两块硅胶板分别在距离薄层 板底端1.52cm处，用铅笔划一条线，作为起点线。用毛细管吸取样品溶液1和2,分别垂 直地轻轻接触到薄层板起点线上。样品量不能太多，否则易造成半点过大。互相交叉或拖尾， 不能得到很好的分离效果。2、将选择的分别适合溶液1和2的展开剂放在两个层析缸中，茶多酚展开剂为正丁醇： 冰乙酸：水（4:1:5），咖啡碱展开剂为（氯仿：甲醇：甲
4、酸28:10:1）。使层析缸内空气饱和，再将点好样品的薄层板放入层析缸中进行展开。使用足够的展开剂使薄层板底部浸入溶剂 3-4mm。但溶剂不能太多，否则样点在液面以下，溶解到溶剂中，不能进行层析。当展开剂 上升到薄层板的前沿（离顶端510mm处）或各分组已明显分开时，取出薄层板。3、在溶剂蒸发前进行显色。茶多酚用显色剂喷雾显色，显色剂：百分之一香荚蓝盐酸 溶液。咖啡碱在紫外下照射进行显色。用铅笔的划出前沿的位置后进行测量可观察。根据 Rf值的不同对各组进行鉴别。五、结果与计算1、咖啡碱的粗提图1得到的咖啡碱粗品烘干得到的咖啡碱粗品的质量为0.02g，经计算，咖啡碱的得率为0.2%2、咖啡碱薄层
5、展开结果图2咖啡碱的TLC结果点样后，在紫外线下照射显示出两个点，分别距原点距离为4.5cm，7.0cm，溶剂前沿距离原点为8.5cm；经计算，Rf值分别为0.529, 0.8233、茶多酚的粗提图3得到的茶多酚粗品烧杯底部乳黄色的物质即为多酚类粗品，烘干得到的茶多酚粗品的质量为0.50g,经计算， 茶多酚的得率为5.00%.4、茶多酚的薄层层析图4茶多酚TLC显色结果原点到溶剂前沿为8.8cm，点样点到斑点中心1、2、3、4、5距离分别为2.4cm、2.5cm、3.0cm、 3.7cm，计算得 Rf1= 0.273 、Rf2=0.284、Rf3=0.341 、Rf4=0.420六、结果分析与讨论咖啡碱的薄层层析结果，在紫外灯下显示每个点样有两个点，距离原点较近的为可可碱，较 远的为咖啡碱。茶多酚薄层层析结果，显色后出现四个点，从原点到溶剂前沿依次为EGCG、ECG、EGC、EC。咖啡碱和茶多酚的得率都比较低，可能是因为在使用三氯甲烷和乙酸乙酯萃取时乳化层的出 现造成了萃取时的损失，还可能是在旋转蒸发过程中，溶解时有部分损失。
