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1、液相色谱峰有拖尾现象是什么原因A、 峰拖尾1、筛板阻塞（a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱）2、色谱柱塌陷（填充色谱柱）3、干扰峰（a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱）4、流动相PH选择错误 （调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰）5、样品与填料表面的溶化点发生反应（a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、换柱子）B、 峰前延1、柱温低（升高柱温） 2、样品溶剂选择不恰当 （使用流动相作为样品溶剂）3、样品过载 （降低样品含量） 4、色谱柱损坏 （见A1、A2）C、 峰分叉1、保护柱或分析柱污染图 （取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分
2、析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。）2、样品溶剂不溶于流动相 （改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。）D、 峰变形1、样品过载 （减少样品载量）E、 早出的峰变形1、样品溶剂选择不恰当 （a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂）F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应（a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池）G、 K增加时，脱尾更严重1、二级保留效应，反相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离
3、子化样品）d、更换一支柱子）2、二级保留效应，正相模式（a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法）3、二级保留效应，离子对 (加入三乙胺（或碱性样品）)H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不合适 (a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液)I、 额外的峰1、样品中有其他组份 (正常)2、前一次进样的洗脱峰 (a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速)3、空位或鬼峰 (a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积)J、 保留时间波动1、温控不当 (调好柱温) 2、流动相组分
4、变化 (防止变化（蒸发、反应等）)3、色谱柱没有平衡 (在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱)K、 保留时间不断变化1、流速变化 (重新设定流速) 2、泵中有气泡 (从泵中除去气泡)3、流动相选择不恰当 (a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相)L、 基线漂移1、柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。 (控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图)2、流动相不均匀,流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。(使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使
5、用氦气。)3、流通池被污染或有气体 (用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1M的硝酸。（不要用盐酸）)4、检测器出口阻塞,高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线 (取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗)5、流动相配比不当或流速变化 (更改配比或流速,定期检查流动相组成及流速)6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 (用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗)7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 （检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂）8、样品中有强保留的物质（高K值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个
6、逐步升高的基线。（使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子）9、使用循环溶剂，但检测器未调整（重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相）10、检测器没有设定在最大吸收波长处。（将波长调整至最大吸收波长处%HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。色谱双峰指的是明明是同一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。这种情况
7、分为四种原因。1 色谱柱 如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题保护柱污染或柱头固定相变脏或流失，或颗粒聚集在色谱柱的入口筛板上。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术
8、，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。 2 溶剂极性及进样量许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的hplc的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前hplc分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前(相对进样
9、量少而言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。这是上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。如果样品溶剂与流动相不溶或互溶性不好，当样品注入色谱分离体系中，会析出并接着再溶解的可能，这时相当于二次进样，也非常容易产生双峰。.3 样品的特性及pH值 有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡
10、存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，甚至三峰.这时一般双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC-MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显.pH对峰形的影响在缓冲液流动相平衡过程中非常明显，当连续进样时，受pH的连续变化影响会经常遇到这种双峰的情况。另外，在样品分析时，流动相的pH尽量远离被分析物的等电点，否则也容易引起双峰的产生。在用离子对试剂分析时，选择不好条件也会容易引起双峰的产生。 4 仪器参数记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如CR3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC 为5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。还有一种情况是，参比波长设置错误，例如设置分析波长254nm，参比波长400nm，这个对于大多数化合物可能没影响。但是如果被测化合物，在400nm处也有强的紫外吸收，比254nm更高。这样其出峰时，由于背景的抵扣作用，本来一个峰会变成对称的二个峰，而且如果将二峰之间的峰谷反转180度，恰好是一个完整的峰。这时要将参比波长设置更大，或者取消。
