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1、姓名 高熹科目遗传实验学号 168615140001 同组人题目环境中诱变物质的微核测试组别一、背景介绍微核（micronucleus,简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构， 是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂 对分裂细胞作用而产生的。微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食 品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。微核试验在对外来化合物（如药品、食品添加剂、农药、化妆品、环境污染物等）遗传毒 性和职业暴露人群遗传损害监测和现场生态环境检测方面，在诊断和预防肝癌、食管癌、肺 癌等恶性肿瘤
2、方面得到了大量的应用。微核试验最大的优点是经济、简单、快速，而国内外 大量的对试验研究，比较一致的看法是该方法在敏感性、特异性和准确性方面，与经典的染 色体畸变分析方法基本相当川。因而，特别适合作为大量化合物和现场人群初筛的实验方法。 微核试验创建于20世纪70年代中期，目前许多国家和国际组织，己将其规定为新药、食品 添加剂、农药、化妆品等毒理安全性评价的必做实验。二、实验目的1、了解微核测定的方法与意义。2、寻找新的测试系统或测定更多的环境因素。三、实验用具培养皿，剪子，镊子，解剖刀片，载玻片，盖玻片，大蒜，双筒体视显微镜，滤纸条，移液 枪，Eppendorf 管等。四、实验试剂实验室药品：
3、改良苯酚品红，1mol/LHCl，蒸馏水，卡诺固定液，70%酒精，叠氮化钠，生理盐水。自备的药品：阿奇霉素，甘草片，可乐。五、实验步骤1）大蒜泡于水中25C或室温发根，约24小时后根长0.51cm。2）各培养皿中加入各种浓度的处理药物。一皿中加入NaN3溶液处理作为阳性对照。一皿中 只加水作为阴性对照。3）根尖浸入各药物皿中，25C或室温培养2448小时。4）根尖浸入水中恢复培养24小时。姓名 高熹科目遗传实验学号 168615140001 同组人题目环境中诱变物质的微核测试组别5）分皿固定。从根部切下大蒜根，在3甲醇：1冰醋酸的卡诺固定液中，约24小时后转移 到70%酒精中，室温0.5小时后
4、换至新的70%酒精，可长期冰箱保存。6）取大蒜根，水洗两次以除去酒精。1mol/LHCl室温水解10min，水洗3次（最好使用生理 盐水）。7）切适当大小（23mm）根尖，改良碱性品红染液中切成或用镊子夹成小块，染色15 min， 压片观察。六、实验结果微核的判定标准：1、凡主核大小的三分之一以下的小核；2、小核着色不论深浅；3、小核形态可以是圆形，椭圆形，不规则形；4、小核可以与主核分离，与主核有丝或蒂相连，与主核相依，但各自轮廓楞楚的都可作为微 核计入，但须注意不要将染色中心当作微核计入。实验仅在叠氮化钠培养的样本中观察到了微核，其他材料均无观差到微核的存在。阳性对照阴性对照七、实验讨论微
5、核的细胞应处于靠近分生区的伸长区中，压片观察此区域中的细胞呈正方形，或稍偏 长方形，若观察到细胞明显拉长，且细胞核呈长条状的细胞，则为伸长区细胞。选用三个材料均无观察到有微核产生，可推测无诱变作用或者诱变作用很弱，而叠氮化姓名 高熹 学号 168615140001 同组人 科目遗传实验题目环境中诱变物质的微核测试组别 钠中观察到了大量的微核，说明其诱导作用很强。敲片的力度一定要掌握好，不能过重，也不能过轻。力度过大会导致细胞破裂，无法观 察和计数含有微核的细胞。过轻会导致出现多层细胞重叠的现象，也影响微核的观察与计数。部分组采用洗衣粉液作为培养液，观察到有类似微核产生，推测为高浓度的洗衣粉液导 致根尖细胞破裂，内容物流出引起的。在制作玻片时，有一玻片制作失败，推测原因可能为清洗不够，残留的HCl与染液反应， 造成染色不深。另外，改进本次实验应设立不同浓度的叠氮化钠，观察不同浓度的影响。
