《散发性乳腺浸润性导管癌患者BRCA1BRCA2基因的表达及临床意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《散发性乳腺浸润性导管癌患者BRCA1BRCA2基因的表达及临床意义（15页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、散发性乳腺浸润性导管癌患者BRCA1、BRCA2基因的表达及临床意义【摘要】 目的： 研究散发性乳腺浸润性导管癌患者乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)、乳腺癌易感基因2的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法: 采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法对95例乳腺浸润性导管癌、28例乳腺腺病患者的BRCA1、BRCA2基因进行检测,并从病理科资料中提取患者的肿瘤大小、淋巴结转移情况以及雌激素受体(estrogen receptor,ER)、人表皮生长因子受体2 (human epidermal growth factor rec
2、eptor2,HER2)的表达结果,分析BRCA1、BRCA2基因水平和患者的肿瘤大小、淋巴结转移情况及ER、HER2表达的关系。结果: BRCA 1、BRCA 2基因在癌组织的阳性率分别为50.5%(48/95)、52.6%(50/95),癌旁组织阳性率66.3%(63/95)、72.6%(69/95),乳腺腺病组织阳性率89.3%(25/28)、92.9%(26/28)。癌组织与癌旁组织、乳腺腺病组织比较,BRCA1、BRCA 2基因的阳性率均下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。BRCA1、BRCA 2的阳性率与淋巴结转移呈负相关(r值分别为-0.228,-0.223,P<
3、;0.05),与ER的表达均呈负相关(r值分别为-0.37,-0.289,P<0.05),与HER2的表达均呈负相关(r值分别为-0.282,-0.498,P<0.05),与肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。结论: 乳腺上皮中BRCA1和BRCA2基因对乳腺癌的发生、发展具有一定的作用,检测此两种基因的表达可协助筛查出乳腺癌高危患者及早期发现乳腺癌。BRCA1和BRCA2基因亦可作为评价乳腺癌生物学特性和预后的潜在指标。 【关键词】 乳腺癌易感基因; 雌激素受体; 乳腺浸润性导管癌; 乳腺腺病Abstract Objective: To investigate the l
4、evel of breast cancer susceptibility gene 1(BRCA1) and BRCA2 in sporadic invasive ductal carcinoma and to analyze its relationship with other clinicopathologic parameters. Methods: RTPCR was used to detect the level of gene BRCA1 and BRCA2 in 95 cases of sporadic invasive ductal carcinoma tissue sam
5、ples and 28 adenosis tissue samples. The clinicopathologic parameters including tumor size, axillary nodal status, estrogen receptor and HER2 expression were obtained from pathological documents.The level of BRCA1/BRCA2 was compared between the sporadic invasive ductal carcinoma tissues and adenosis
6、 tissues. In sporadic invasive ductal carcinoma, the correlation between BRCA1/BRCA2 and other clinicopathologic parameters mentioned above was further analyzed. Results: The positive rates of BRCA1 gene were 50.5%(48/95)in breast cancer tissues and 89.3%(25/28)in adenosis tissues, while in breast c
7、ancer adjacent tissues, the rates were 66.3%(63/95).The positive rates of BRCA2 gene were 52.6%(50/95)in breast cancer tissues and 92.9%(26/28)in adenosis tissues, while in breast cancer adjacent tissues, the rates were 72.6%(69/95). The positive rates of BRCA1 and BRCA2 were lower in breast cancer
8、tissues than in cancer adjacent tissues and adenosis tissues,with a significant difference(P<0.05). The gene BRCA1/BRCA2 was negatively correlated with lymph node metastasis, and negatively correlated with the expression of estrogen receptor and HER2 expression(P<0.05). No correlation was foun
9、d between BRCA1/BRCA2 and tumor size(P>0.05). Conclusion: The gene BRCA1/BRCA2 in breast epithelium may play an important role in the development of breast carcinoma. To detect them helps to choose patients at high risk of developing breast carcinoma and achieve early diagnosis. The gene BRCA1/BR
10、CA2 may be a potential marker for estimating the biological behavior and prognosis of breast cancer.Key words breast cancer susceptibility gene; estrogen receptor; invasive ductal carcinoma; adenosis乳腺癌是指发生于乳腺导管或乳腺小叶上皮细胞的恶性肿瘤,占女性全部恶性肿瘤的22%,在欧美发达国家甚至高达26%1,其中浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)是临床最常
11、见的病理类型。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)和乳腺癌易感基因2(BRCA2)是迄今发现的与乳腺癌发生有关的易感基因。乳腺癌以遗传性和散发性两种形式存在,遗传性乳腺癌约占5%10%,这些遗传性乳腺癌中的21%40%与BRCA1、 BRCA2基因突变有关2。但BRCA1和BRCA2与非遗传性、散发性乳腺癌相关性的报道较少3。我们检测了散发性浸润性导管癌、癌旁组织及腺病组织中BRCA1、BRCA2基因的阳性率,比较BRCA1、BRCA2基因在三者之间的差异,并对散发性浸润性导管癌中BRCA1、BRCA2基因与临床相关病理特征之间
12、的关系进行了分析。1 材料与方法1.1 材 料1.1.1 临床资料及标本 收集江苏大学附属人民医院2008年5月到2009年5月经病理证实的乳腺浸润性导管癌患者手术切除标本95例及乳腺腺病患者手术切除标本28例,所有乳腺癌病例无一级或二级亲属患乳腺癌,患者年龄4275岁,平均54岁;乳腺腺病患者年龄3564岁,平均49岁。所有标本术后0.51 h迅速-70 冻存备用。1.1.2 主要试剂与仪器 Trizol(Invitrogen公司),RTPCR试剂盒(Fermentas公司),PCR仪(7300型,美国ABI公司),凝胶成像仪(英国Gene公司)。1.2 方 法1.2.1 RNA的提取 采用
13、Trizol一步法快速提取组织总RNA,通过紫外分光光度法测定D(260 nm)与D(280) nm,计算RNA的浓度和纯度;取D(260 nm)/D(280 nm)1.8至2.0之间的样本。琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。1.2.2 逆转录反应 反应体系为50 l。RNA 2 l,DEPC水8 l,随机六聚寡核苷酸引物(0.05 g/l) 4 l,共14 l,65 5 min,取出后冰上放置5 min,再加入下列体系:DEPC水 20.5 l,5RT 缓冲液10 l, dNTPs 2.5 l, 逆转录酶MMLV 2.0 l,RNasin 1.0 l,反应条件为42 60 min,-20 保
14、存。1.2.3 聚合酶链反应(PCR) 反应体系为25 l,包括10缓冲液2.5 l, MgCl2 2.0 l,dNTP 0.5 l,Taq酶(1 U/l) 1 l, H2O16 l,cDNA 1 l, 引物1 1 l,引物2 1 l。BRCA1上游引物:5GATTTGACGGAAACATCTTAC3,下游引物:5CCAGCATCAGTAGTATGA3;反应条件为94 5 min,95 30 s,57 30 s,72 30 s，30个循环后72 延伸10 min。BRCA2上游引物:5GTTGTGAAAAAAACAGGACTTG3,下游引物:5CAGTCTTTAGTTGGGGTGGA3。反应条
15、件为94 5 min，95 30 s，56.9 30 s，72 30 s, 30个循环后72 延伸10 min。肌动蛋白上游引物:5CTCGCGCTACTCTCTCTTTC3,下游引物:5CATGTCTCGATCCCACTTAAC3。以看家基因肌动蛋白为内参照进行质控和标化。每个PCR反应均重复3次。扩增产物在含0.5 mg/L溴乙啶的2.0%琼脂糖凝胶中电泳分离,于凝胶成像仪上扫描分析条带。BRCA1/2表达水平的相对值=BRCA1/2 D值/肌动蛋白D值。2 结 果2.1 BRCA1基因在乳腺癌、癌旁及乳腺腺病组织中的检出情况经RTPCR 分析发现,乳腺癌组织中BRCA1 mRNA 的相对水平为0.415 30.155 6,而在乳腺癌旁及乳腺腺病组织中其表达水平分别为1.112 70.233 3 和1.007 40.193 1,后两者明显高于前者(图1)。BRCA1基因在乳腺癌、癌旁组织及乳腺腺病组织中的阳性表达率分别为50.5%(48/95)、66.3%(63/95)、89.3%(25/28)。经2检验分析得出,在乳腺癌、癌旁组织及乳腺腺病组织中BRCA1阳性率呈递增趋势,具有相关性(2=14.953, P=0.001<0.005)。与乳腺腺病比较,BRCA1在乳腺癌及癌旁组织中的阳性率皆明显下降(2=13.466, P<0.001, 2=5.6
