饲料中磷的测定(精)

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1、饲料中总磷含量与植酸磷含量的测定、饲料中总磷含量的测定(钼黄比色法)1. 适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料和单一饲料中总磷的测定。2. 测定原理将试样中有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钳酸铵处理，生成黄色的络合物(NH ) PONHVO - 16MoO (磷-钒-钳酸复合体)，在波长4004 34433nm下进行比色测定。此法测得结果为总磷量，其中包括动物难以吸收利用的植酸磷。3. 仪器和设备(1) 实验室用样品粉碎机或研钵。(2) 分析筛：孔径0.42 mm(40目)。(3) 分析天平：感量0.0001g。(4) 分光光度计：有10mm比色池，可在400 n

2、m下进行比色测定。(5) 高温炉：可控炉温在(55020)C。(6) 坩蜗：瓷质。(7) 容量瓶：50，100，1000mL。(8) 刻度移液管：1.0，2.0，3.0，5.0，10mL。凯氏烧瓶：250或500 mL。(10)可调温电炉：1000 W。4. 试剂及配制(1) 盐酸(GB 622，化学纯)溶液，1+1水溶液(V+V)。(2) 浓硝酸(GB 626)化学纯。(3) 高氯酸(GB 623，分析纯)，70%72%。(4) 钒钳酸铵显色试剂：称取偏钒酸铵(HG 3-941，分析纯)1.25g，加浓硝酸 250 mL；另取钼酸铵（GB 657，分析纯）25g，加蒸馏水400 mL,加热溶

3、解，冷却 后，将此溶液倒入上溶液，且加蒸馏水定容至1000 mL，避光保存。如生成沉淀 则不能使用。（5）磷标准溶液:将磷酸二氢钾在105C干燥1 h，在干燥器中冷却后称0.2195 g，溶解于蒸馏水中，转入1000 mL容量瓶中，加浓硝酸3mL，用蒸馏水稀释到 刻度，摇匀，即成50四g/mL的磷标准溶液。5. 试样的选取和制备取有代表性试样用四分法缩减至200 g，粉碎至40目，装入密封容器中，防 止试样成分的变化或变质。6. 测定步骤（1）试样的分解。 干法（不适用于含磷酸氢钙的饲料）：称取试样25g于坩蜗中（准确至 0.0002 g），在电炉上低温炭化至无烟为止，再将其放入高温炉于（55

4、020）C下 灼烧3h（或测灰分后继续进行），取出冷却，在坩蜗中加入盐酸溶液Q+1，V+V） 10 mL和浓硝酸数滴，小心煮沸约10 min。将此溶液转入100 mL容量瓶中，并 用热蒸馏水洗涤坩蜗及漏斗中滤纸，冷却至室温后，定容，摇匀，为试样分解液。 湿法：称取试样0.55 g于凯氏烧瓶中（准确至0.0002 g）。加入浓硝酸 30 mL，小心加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后加入高氯酸10 mL，继续 加热煮沸至溶液无色，不得蒸干（危险！）。冷却后加蒸馏水50 mL，并煮沸驱逐 二氧化氮，冷却后转入100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，为试样 分解液。 盐酸溶解法（适用于微量元

5、素预混料）：称取试样0.21 g （精确至 0.0002g）于100mL烧杯中，缓慢加入盐酸溶液（1+1，V+V） 10mL使其全部溶解， 冷却后转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。（2）标准曲线的绘制。准确移取磷标准溶液0，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0 mL 于50 mL容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色试剂10 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇 匀，放置10 min。以0 mL溶液为参比，用10 mm比色池，在400 nm波长下， 用分光光度计测定各溶液的吸光度。以50mL溶液中磷含量(四g)为横坐标，吸 光度为纵坐标绘制标准曲线。(3) 试样的测定。准确移取试

6、样分解液110 mL (含磷量50750四g)于50mL 容量瓶中，加入钒钼酸铵显色试剂10 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10 min以上。以0 mL溶液为参比，用10 mm比色池，在400nm波长下，用分光光 度计测定各溶液的吸光度。用标谁曲线查得试样分解液的含磷量。7. 测定结果计算(1) 计算公式。样品中总磷质量分数按式(7-4)计算。/ , a x10-6 Vw( p) =x 7-4m Vi式中：m为试样质量，g； V为试样分解液总体积，mL； V1为比色测定时所移 取试样分解液体积，mL； a为由标准曲线查得试样分解液含磷量；10-6为从g 转化为g的系数。所得结果应精确到两

7、位小数。(2) 允许差。每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。含磷量在0.5%以上(含0.5%)，允许相对偏差3%；含磷量在0.5%以下， 允许相对偏差10%。8. 注意事项比色时，待测液磷含量不宜过浓，最好控制在1mL含磷0.5mg以下。(2) 待测液在加入试液后应静置10 min，再进行比色，但不能静置过久。二、饲料中植酸磷的测定(三氯乙酸法，TCA法)1. 适用范I本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中植酸磷的测定。2. 测定原理用30 g/L三氯乙酸作浸提液提取植酸盐，然后加入铁盐使植酸盐生成植酸 铁沉淀，与氢氧化钠反应转化为可溶性植酸钠和棕色氢氧化铁沉淀，用钼黄法

8、直 接测出植酸磷含量。3. 仪器和设备(1) 实验室用样品粉碎机或研钵。(2) 分析筛：孔径0.42mm(40目)。(3) 分析天平：感量0.0001g。(4) 分光光度计：有10 mm比色池，可在400nm下进行比色测定。(5) 容量瓶：50，100mL。(6) 移液管：10，50 mL。(7) 吸量管：5，10mL。(8) 卧式振荡机。(9) 凯氏烧瓶：100mL。(10) 具塞三角瓶：250mL。(11) 离心机。(12) 具塞离心管：50mL。4. 试剂及配制(1) 30 g/L三氯乙酸溶液，称取3g三氯乙酸(分析纯)，加水溶解至100mL， 混匀。(2) 三氯化铁溶液(1mL相当于2

9、mg铁)：称取三氯化铁(FeCl3 6H2O) 0.97g， 用30 g/L的三氯乙酸溶液溶解至100mL，混匀。(3) 1.5 mol/L氢氧化钠溶液，称取氢氧化钠(分析纯)60g，加水溶解至 1000mL，混匀。(4) 浓硝酸(分析纯)：比重1.4,煮沸起去游离二氧化氮(NO，使其成为无 色。(5) 硝酸溶液1+1，(V+V)；硝酸溶液1+3，(V+V)。均用上述浓硝酸(4)配 制。(6) 混合酸硝酸+高氯酸= 2+1, (V+V)，按比例配制。(7 )显色剂。 100g/L钼酸铵溶液:称取分析纯钼酸铵10g,加入少量水，加热至5060C, 使溶解。冷却后，再用水稀释至100 mL,混匀。

10、 3 g/L偏钼酸铵溶液：称取分析纯偏钼酸铵0.3g，溶于50 mL水中，再加 50mL硝酸溶液(1+3, V+V)溶解，混匀。使用时将溶液徐徐倒入溶液中，应边加边搅拌，然后再加入已赶尽二氧 化氮的浓硝酸18mL，混匀。(8)标准磷溶液(1mL相当于100 p g磷)。准确称取105110C烘干12h 的优级纯磷酸二氢钾0.4349g,用水溶解后移入1000 mL容量瓶中，并用水稀释 至刻度，摇匀。5. 试样选取与制备同饲料中总磷量测定方法。6. 测定步骤(1) 磷标准曲线的绘制。准确吸取1mL=100p g磷的标准溶液0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0,

11、 7.0 mL，分别盛入50 mL容量瓶中，用水稀释至20mL 左右，各加硝酸溶液(1+1, V+V) 4mL，显色剂10 mL，再用水稀释至刻度，混匀。 此时系列浓度为每50 mL中分别含磷量为：0, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600,700网，静置20 min,在分光光度计上在波长400 nm处，用10mm比色池， 测定其吸光度。最后，以50mL中磷含量(四g)为横坐标，用相应的吸光度为纵 坐标，绘制出磷的标准曲线。(2) 试样的测定。称取饲料样本36 g (含植酸磷在530 mg范围内)于干操的250 mL具 塞三角瓶中，准确加入30 g/L三氯乙酸溶液5

12、0 mL,浸泡2h,机械振荡浸提30 min,离心(或用干漏斗、干滤纸、干烧杯进行过滤)。准确吸取上层清液10 mL 于40 mL离心管中，迅速加入三氯化铁溶液（1mL相当于2mg Fe2+）4mL，置于沸水 浴中加热45min，冷却后，3000r/min离心10 min，除去上层清液，加入30 g/L 三氯乙酸溶液2025mL，进行洗涤（沉淀必须搅散），水浴加热煮沸10min，冷却 后3000r/min离心10 min，除去上层清液，如此重复2次，再用水洗涤l次。 洗涤后的沉淀加入35 mL水及1.5mol/ L氢氧化钠溶液3mL，摇匀，用水稀释 至30 mL左右，置沸水中煮沸30 min，

13、趁热用中速滤纸过滤，滤液用100 mL容 量瓶盛接，再用热水6070mL，分数次洗涤沉淀。滤液经冷却至室温后，稀释至刻度，准确吸取510 mL滤液（含植酸磷 0.10.4mg）于100 mL凯氏烧瓶中，加入硝酸和高氯酸混合酸3mL，于电炉上低 温消化至冒白烟，使余0.5mL左右溶液为止（切忌蒸十），冷却后用30 mL水，分 数次洗入50mL容量瓶中，加入硝酸溶液（1+l，V+V） 3mL，显色剂10mL，用水 稀释至刻度，混匀，静置20 min后，在分光光度计上在波长400nm处则定吸光 值。查对磷标准曲线，并计算植酸磷的含量。7. 测定结果计算试样中植酸磷质量分数按公式（7-5）计算。Va

14、x x 10 -6w（植酸磷）= 7-5m式中：a为由磷标准曲线查得的含磷量网数（此数是比色时50 mL容量瓶中 所含磷的曲数），V为试样分解液总体积，mL； V为比色用吸取的试样消化液体 积，mL； m为试样质量，g。8. 允许差每个试样称取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。9. 注意事项（1）试样粉碎粒度要求不小于40目。颗粒太粗造成试样浸提不完全，使分析 结果波动太大，重现性差。(2) 在离心法洗涤植酸铁沉淀过程中，注意不要损失铁沉淀物。(3) 显色时的硝酸酸度要求在5 %8 % (V+V)。(4) 显色时温度不能低于15C，否则显色缓慢。三、饲料级磷酸氢钙中磷含量的测定(HG

15、2636-2000)1. 测定原理在酸性介质中，试样溶液中的磷酸根全部与加入的哇钼柠酮形成磷钼酸哇琳 沉淀，过滤、干燥、称量，计算出磷含量。2. 仪器和设备(1) 玻璃砂坩蜗：孔径515Mm。(2) 电烘箱：温度能控制在(180 5) Co3. 试剂及配制(1) 盐酸溶液：1十1，V十V。(2) 硝酸溶液：1十1，V十V。(3) 哇钼柠酮溶液的制备。 称取70 g钼酸钠溶解于150 mL水中。 称取60 g柠檬酸溶解于150mL水和85mL硝酸中。 在搅拌的情况下将溶液倒入溶液中。 在100 mL水中加入35mL硝酸和5mL哇琳。 将溶液倒入溶液中，放置24h后，用坩蜗式过滤器过滤，再加入280 mL 丙酮，用水稀释至l 000 mL，混匀，并贮存于聚乙烯瓶中。4. 测定步骤(1) 试样溶液的制备。称取1g试样(精确至0.0002g)，置于250 mL容量瓶中， 加10mL盐酸溶液，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液为试样溶液A，用于磷含量 的测定。(2) 空白溶液的制备。除不加试样外，其他加入的试剂量与试样溶液的制备完全相同，并与试样同时进行同样处理+的采样与羽样(3)