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1、DNA 提取各种缓冲液的配制精品资料植物总 DNA 的提取一、所需仪器设备及消耗品剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（ 1000、500、200、 100、50ml）、量筒（ 1000、 500、 100、10ml）、烧杯（ 1000、500、 200、100ml）、 pH 试纸、电子天平、高压灭菌锅、研钵、液氮罐（液氮）、水浴锅、离心机、移液器（ 1 套）、枪头（ 1ml、 200ml、20l）、枪头盒、离心管（ 1.5ml）（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片二、所需化学药品及试剂CTAB 、 NaCl
2、、 EDTA-Na 2 2H2O、Tris、冰乙酸、硼酸、 -巯基乙醇、NaAc、氯仿（三氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、溴酚蓝、琼脂糖、蔗糖、溴化乙锭（ EB）、 RNase、 NaOH、HCl （浓）、 ddH2O三、各种缓冲液的配制（一） 2%CTAB 提取缓冲液（ 300ml）（高压灭菌）4mol/L 的 NaCl35ml3=105ml1mol/L 的 Tris-HCl10ml3=30ml0.5mol/L 的 EDTA4ml3=12mlCTAB2g 3=6g（二） 1TE（母液 pH8.0）（ 50ml）（高压灭菌）1mol/L 的 Tris-HCl （pH8.0）500l0.5mol/L
3、 的 EDTA （pH8.0）100l最后加 ddH2O 定容到50ml工作液为 0.1 TE （45ml 灭菌的 ddH2O 中，加入 5ml 已灭菌的 1TE）（三） 4mol/L 的 NaCl（150ml）（高压灭菌）35.055g的 NaCl，加 ddH2O120ml 溶解，再加水定容到150ml（四） 1mol/L 的 NaCl（400l）（用于配制 RNase储存液）仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢 1精品资料取 4mol/L 的 NaCl（已灭菌） 100l，加 300l 灭菌的 ddH2O。（五） 3mol/L 的 NaAc 溶液（ pH5.2）（ 50ml）（高压灭
4、菌）NaAc3H2O20.405g加 ddH2O30ml用冰乙酸调节 pH 至5.2加 ddH2O 定容到50ml（六） RNase储存液（ 10mg/ml）（ 1ml）1mol/L 的 Tris-HCl （pH7.5） 10l1mol/L 的 NaCl15lRNase10mg沸水浴 1520min（七） EB 储存液（ 1mg/ml）EB30mgddH2O30ml磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保存于室温。制胶时 EB 终浓度为 0.5g/ml （30ml 加 15l、40ml 加 20l）（八） 10TBE 缓冲液（电泳缓冲液） （高压灭菌）Tris 碱54g硼酸27.5g0.5
5、mol/L 的 EDTA （ pH8.0） 20ml以上溶于 400ml 的 ddH2O 中，在定容到 500ml工作液为 1TBE 或 0.5 TBE（九） 6上样缓冲液（ 4保存）0.25%的溴酚蓝（ 2.5mg/1ml 40%（w/v ）的蔗糖水溶液）仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢 2精品资料40%（w/v ）蔗糖水溶液（ 2g/5ml 的 ddH2O，加热溶解，注：温度不能太高）（十） 1mol/L 的 HCl 溶液（不用灭菌）8.62 ml 的浓盐酸，加灭菌ddH 2O 91.38ml，混匀，室温保存（ 100ml）。（十一） 5mol/L 的 NaOH 溶液（ 50ml
6、，10g 的 NaOH 溶于 50ml 灭菌的 ddH 2 O中）（不用灭菌）200g 的 NaOH，溶于灭菌的 ddH2O 中，定容至 1000ml（十二） 1mol/L 的 Tris-HCl （pH8.0）（ 100ml）（高压灭菌）12.11g的 Tris 碱80ml 的 ddH2O加浓盐酸调节 pH 值至 8.0（大约加 4.2ml）（十三） 0.5mol/L 的 EDTA （pH8.0）（ 50ml）（高压灭菌）9.305g的 EDTA-Na 22H2O1g 的 NaOH磁力搅拌器剧烈搅拌40ml 的 ddH2O最后加水定容到50ml，用 NaOH 调节 pH 值至 8.0DNA 定
7、量用紫外分光光度计法，1 OD260 50 g/ml双链 DNA 。仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢 3精品资料PCR （聚合酶链反应）一、所需仪器设备及消耗品冰箱（ 4、20 ）、高压灭菌锅、离心机、移液器（1 套）、枪头、枪头盒、 PCR 管（包括盒和架）、 PCR 仪、离心管（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、塑料胶带（宽）、微波炉、凝胶成像系统、垃圾桶、冰盒（自制）、记号笔、单面刀片二、所需化学药品及试剂质粒（阳性对照）、引物（1、 2）、 4dNTP、 DNA 模板、 buffer（ MgCl2）、 TaqDNA 聚合酶、 ddH2O、琼脂糖、 DNA 标准样品（
8、DNA ladder）、溴化乙锭（ EB）、 5TBE 电泳缓冲液（ Tris、硼酸、 EDTA ）三、 PCR 反应体系与反应程序仅供参考成分母液浓度各成分加入量（ l/20l）各成分终浓度或含量无离子水9.7缓冲液1021（buffer）MgCl 225mmol/L1.21.5 mmol/L4dNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物5pmol/L20.5pmol/L仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢 4精品资料TaqDNA 聚合酶5U/ l0.63U模板 DNA20ng/ l2.550ng操作顺序： 水、 4dNTP 混合 buffer、taqDNA 聚合酶混合，、混合 加
9、入引物 混匀、分装 PCR 管 向每个 PCR 管加入模板 DNAPCR 扩增反应程序：94预变性 35min。进入循环： 94变性 30s56退火 3045s72延伸 12min，3036个循环。循环结束后再 72延伸 7min。外源脱水应答转录因子 DREB 基因在转基因小麦中的诱导型表达与抗旱生理效果Induced Expression ofDREB Transcriptional Factor and Study on Its Physiological Effects of Drought Tolerance in Transgenic Wheat成分母液浓度各成分加入量（ l/25
10、l）各成分终浓度或含量无离子水13？缓冲液102.51仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢 5精品资料（buffer）4dNTP2mmol/L20.2 mmol/L引物 15？1mol/L ？引物 25？1mol/L ？TaqDNA 聚合酶5U/ l0.2？1U模板 DNA20ng/ l1？50ngPCR 扩增反应程序：94预变性 5min。进入循环： 94变性 45s45 退火 45s72延伸 1min，35 个循环。循环结束后再 72延伸 10min。一般 PCR 反应中引物的终浓度为0.21.0mol/L ， 1.0mol/L 时，特异性降低或形成引物二聚体，0.2mol/L 时，降低产量。PCR 反应中每种 dNTP 的终浓度为 20200 mol/L。所用引物浓度是5mol/L 吗？PCR 反应时，每个引物的终浓度是多少？ 4dNTP 的终浓度是多少？ TaqDNA 聚合酶的终浓度是多少？模板 DNA 的终浓度是多少？仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢 6
