2019 年钦州市蚊虫抗药性监测工作方案一、监测目的 规范白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养方法，抗药性监测方法，为卫 生杀虫剂、器械杀灭效果提供依据二、监测范围 白纹伊蚊/埃及伊蚊三、监测内容与方法1.白纹伊蚊/埃及伊蚊的饲养1.1 目的 规范白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养方法，为卫生杀虫剂、器械杀天效 果测定提供标准试虫1.2 适用范围 适用于白纹伊蚊/埃及伊蚊饲养的操作1.3 职责1.3.1 蚊虫饲养人员必须掌握蚊虫饲养技术1.3.2 与饲养无关的人员木经许可不得进入饲养室，不允许饲养 人员在饲养室干与饲养无关的事，饲养室内严禁吸烟1.4 饲养1.4.1 器材:方形塑料盆（或搪瓷盆）、蚊笼、饲养架、吸管、平 皿、烧杯等1.4.2环境条件:温度26+1C,相对湿度75%+5%，光照时间14小 时1 . 4. 3饲料:猪肝和馒头晒干后按1 : 1的质量比用粉碎机磨碎后， 过 60 目或者 80 目网筛1. 4. 4饲养方法1.4.4.1 成虫饲养成蚊在蚊笼中饲养，每笼密度为 200-300 只蚊虫，蚊笼上部放置 10%糖水浸透的海绵作为饲料，每天更换一次成蚊在大量羽化 后第 2 天多数可完成交配，此时即可供雌蚊吸血。
供血时，将小 白鼠腹部朝上固定在塑料板上，放入笼内喂血24-48 小时，雌蚊 吸血后2-3天可产卵，产卵期间笼内放入1个250mL的烧杯，内 放三分之二水，将圆形滤纸对折2次后，成一圆筒状放入烧杯内， 滤纸筒外缘高于烧杯外缘，且下部接触水面，使滤纸筒润湿便于 伊蚊在滤纸上产卵经常观察烧杯内水是否不足，及时补水每 日观察产卵量，如产卵量大可一天一换滤纸，如卵量少可以两天 一-换一次供血可以连续产卵 3 天1.4.4.2卵纸的保存:将产有伊蚊卵的滤纸筒拿出，自然晾干后 放于实验室环境内，可保存2个月1.4.4.3 幼虫饲养:在方形塑料盆（或搪瓷盆）内盛脱氯水，饲养 幼虫200-300条，每日加饲料1-2次，1-2龄幼虫加料要少，如 水面有膜:需要及时去膜幼虫化蛹后，用吸管将蛹移入盛有脱 氯水的烧杯中，置于蚊笼内待其羽化1.4.5 注意事项1.4.5.1 控制环境条件:温度、湿度、光照1.4.5.2 幼虫饲养盆需每天观察水面是否起膜、添加饲料;成蚊 饲养需每天换糖水1.4.5.3 饲养幼虫的方形塑料盆（或搪瓷盆）应保持清洁，饲养用 的自来水必须放置一夜以脱氯1.4.5.4 饲养室要严格密闭，进出要随手关门，严防饲养昆虫外 逃。
1.4.5.5 幼虫饲养容器需罩纱网防止逃逸成蚊产卵1.4.5.6 对死亡和要废弃的蚊虫以及被污染的工作衣物等必须进 行消毒杀菌、无害化处理1.4.5.7 卵纸应标明蚊虫种类、产卵日期，分类存放 1.5.记录表格（见附表 1.2）1.蚊虫饲养记录表2 环境监控记录表2.成蚊接触筒法2.1 实验目的 依据杀虫剂对敏感品系的毒力回归线，确定一个能够区分敏感个 体和抗性个体或抗性杂合子的剂量一般用2倍敏感品系的LC99 值作为诊断剂量根据待检测蚊虫种群在诊断剂量下的死亡率作 为抗性判定标准2.2 试虫羽化后 3d~5d 未吸血健康雌蚊2.3 试剂丙酮、乙醚、白油、杀虫剂原药2.4 设施和器材蚊笼、滤纸、 接触筒、吸蚊器、 电子天平（感量为0.1 毫克）、容量瓶、微量移液器、光照培养箱、通风橱等2.5 测试条件温度:25°C±1°C，光周期：14L:10D.相对湿度:60%~80%2.6 步骤2.6.1 接触筒和恢复筒的准备组装接触筒和恢复筒 恢复筒:在恢复简的底端安装层纱布，纱布要平整、严密（防止蚊 虫逸出），然后把恢复简安装到隔板上，编好号，放置-边备用 接触筒:先在接触筒内放置一张滤纸，然后放入药膜纸，纸的放 入应迅速，放入完毕用玻璃棒或其他没有药的东西，沿接触筒内 侧转一圈（保证药膜纸与接触筒接触紧密）。
然后再在接触筒的两 端各固定一铁圈最后在接触筒底部固定一层纱布（纱布应平整 严密）2.6.2 实验过程2.6.2.1先把恢复筒接装在放隔板的一面，用吸蚊器吸20-30只 雌蚊，轻轻吹入筒内，然后瞬间关闭隔板（防止速度过慢导致蚊 虫从隔板夹缝逸出），平行放置15分钟，剔除不健康蚊虫1.6.2.2 在隔板另一面装上已衬贴药纸的接触筒，让恢复筒与接 触筒竖直放置，轻轻拍打恢复筒让蚊虫聚集于恢复筒底部，然后 瞬间把隔板抽开，旋转接触筒与恢复筒 180 度，让接触筒底部在 下端，将恢复筒内蚊虫轻吹入接触筒，迅速关上隔板将筒平放， 即开始计算接触时间不同的杀虫剂接触时间参考 WHO 推荐的几 种杀虫剂对蚊虫成蚊的区分剂量表1.6.2.3 接触完毕后将蚊虫转移至恢复筒，关上隔板，将筒垂直 放直，用浸有 10%葡萄糖水的棉花团置于尼龙网上（棉团含水不 可过多，避免水珠落入恢复筒底部或者粘附于蚊虫身上,增加其 死亡率棉团蘸水后，用手轻轻挤压一.下即可）对照组药纸为 白油和乙醚的混合物，试验重复三次，从接触完毕后24 小时计 算死亡率2.7 记录表格（见附表 3）1 病媒生物抗药性测定记录表2.8 结果及分析1.记录每个处理的死亡数，若对照死亡率超过 20%，试验视为无 效。
2 结果用死亡率表述:死亡率=死亡虫数/试虫总数* 100% 对照组死亡率小于 5%无需校正，对照组死亡率在 5%-20%之间， 用 Abort 公式进行校正校正死亡率= （处理组死亡率-对照组死亡率） / （1-对照组死亡率） *100%抗性倍数表述:抗性倍数二待测种群LCso/敏感种群LCso附表1 蚊饲养情况记录表日期（月/日）化蛹数备注日期（月/日）化蛹数备注附表2环境监控记录监控地点: 年度: 第—页日期时间温度C相对湿度％记录人备注月日时分附表3病媒生物抗药性测定记录表（毒力回归线）_______省（自治区、直辖市） 地（市） 县（区）试虫名称：药剂名称：测定人：虫态： 虫龄：培育温度： °C；相对湿度： %虫源地名：经度： 纬度：英文药名：处理日期： 年 月 日至月 日测定室温： C；相对湿度： %处理浓度/剂量单位重复1重复2重复3合计死虫数总虫 数死虫 数总虫 数死虫 数总虫 数死/总对照/////////处理虫数： 毒力回归线： X2： 斜率b值（95%置信限）： LD : 95%置信限：50LD :99备注：蚊幼虫测定LC （mg/L），家蝇成虫测定LD （口 g/雌）50 50监测单位： 监测人： 审核人： 。