《液相色谱质谱联用仪(TQXS)操作维护规程》由会员分享,可在线阅读,更多相关《液相色谱质谱联用仪(TQXS)操作维护规程(3页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、液相色谱质谱联用仪(沃特世操作维护规程Xevo TQXS)1操作规程1.1使用仪器前必须征得仪器保管人同意。1.2开机:1.2。1打开电脑,首先打开自动进样器电源,再逐一打开质谱电源和UPLC各电源,各部件通过 自检后,双击工作站图标进入Masslynx工作站.1.2。2选择InstrumentMS Tune进入调谐界面.从调谐界面选择Vacuunpump,打开真空 泵,开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开始工作.1。2。3质谱上的真空灯开始闪烁,当系统达到真空状态,灯变为绿色,不再闪烁,同时观察调 谐界面DiagnosticsTTurbo Speed泵转速达到100%即可,达到实验状态大约要抽真
2、空4小时 (注意:真空规,测量工具,无异常状况通常无需打开,尤其在刚开始抽真空时不要打开。)1.2。4气源压力设置:氮气:90100psi。氯气:0.05Mpa,不超过0。1Mpa(实验前确认氯气瓶 压力,低于1Mpa时需更换氯气。)1.3准备UPL C系统1。3。1准备流动相:(1)A和B所有的缓冲液和超纯水都要新配制,超纯水和缓冲液使用不得 超过二天。缓冲盐一定要可挥发的,而且浓度在2 mM-5mM之间,不要超过10mM(注:若流动相含 有缓冲盐,用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和色谱柱,若流动相含有酸,必须为挥发性 酸,浓度范围为0。01%-0。1%,进样器高压密封垫要求PH2,不能使
3、用三氟乙酸、七氟丁酸等 离子对试剂)。有机相要使用原装进口的色谱纯。(2) SW+Purge (弱洗:10%ACN+90%纯水或 者与流动相梯度初始比例相同)用于清洗泵头和密封清洗;Wash (强洗:90%ACN+10%纯水),质 谱端wash (70%ACN+30%纯水);1。3。2初始化UPLC泵:在Masslynx主页面上点击MS Console,进入系统控制界面,点击左边 Quaternary Solvent Manager选择CONTROLPrime A1/B1/B2/A1solvent,设定时间,按 start。1。3。3初始化UPLC自动进样器:UPLC控制台上选择Sample
4、Manager,选择Control Primeseal wash,灌注进样器和洗针系统。完成后,UPLC自动进样器准备好。1。3。4灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。1.4准备质谱(word完整版)液相色谱质谱联用仪(TQXS)操作维护规程1。4。1 MS Tune,首先打开氮气,再开高压.(注:一定要打开氮气和高压才能开流动相,关闭流动相后才能关高压和氮气)。1。5 ESI调谐1.5。1把调谐液放入A号位(注:浓度在0。05-0o 1ppm之间,根据实际的灵敏度调整样品浓 度)。1o5o 2把流动相的流速设为0.2ml/min,有机相和水相比例为1:1.点击Tune界面下的Fluidic
5、s,点击Purge syringe灌注注射器.设置Infusion流速5uL/min,根据灵敏度可适当 调整。设置Flow State模式(Infusion:直接进样;Combined:液相和样品混合进样;LC:液 相进样;Waste:废液)。1o5o3 选择 Xevo TQ一S MS Detector 下面的 IntelliStart: Sample Tune and Develop Method点击Start,调出界面,输入各参数,系统开始自动优化目标化合物的质谱参数。1.6建立质谱的MRM方法.选择InstrumentMS Method进入质谱方法编辑界面.打开新建质谱方法窗口,再点击M
6、RM,按 调谐结果输入下列参数:离子模式、化合物名称、母离子质量数、子离子质量数、离子驻留时 间、锥孔电压、碰撞能量和MRM运行时间等。1o 7建立UPLC方法。选择InstrumentInlet Method进入UPLC方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、自动进样器 的方法和紫外检测器的方法等。最后把UPLC的方法命名保存。1o 8建立样品运行序列表,运行采集数据。在Masslynx主界面上点击FileNew,新建序列表,输入文件名、注释、质谱方法、液相方 法、瓶号、进样体积等参数,最后把编辑好的序列表命名保存.1o 9数据采集。新建项目project,新建sample list,输入文件名,选
7、择质谱方法,质谱调谐方法,液相方 法,样品瓶位置,保存序列名,点击start sample list run采集数据。可设置自动待机程序, 关碰撞器,停流速,关高压,等待两分钟,关氮气。1.10数据分析在sample list中选中要打开的色谱图,单击chromatogram;要提取质量色谱图,菜单栏: DisplayMass 出现质量色谱图窗口,单击 select all) OK积分 processintegrate定量分析,建立sample list,输入样品类型,标准品浓度,确定积分参数,建立定量方法, 处理样品,查看定量结果。1.11关机一般质谱仪部分不需要关机,不用时只要保持在Sta
8、ndby状态下即可。但如果长时间不 用,或是对仪器进行清洗和维修时需要关机。1.11。1首先停止液相色谱流速,如果还需要冲洗色谱柱,可以将液相色谱管路从质谱移开 到废液瓶。1。11.2点击MS Tune进入调谐窗口,点击Standby,关闭高压,让MS进入待机状态时,指示 灯会由绿色变成红色。1.11.3等脱溶剂气温度降到常温,关闭氮气。1.11。4选择OptionVent,这时质谱开始泄真空,待机械泵停止运行,同时观察调谐界面 DiagnosticsTTurbo Speed泵转速为0时即可关闭质谱电源。关闭计算机和显示器,关闭气 路。2。仪器基本维护与使用注意事项:2。1仪器室要保持整洁、干
9、净、无尘;配套设施布局合理。2。2开高压之前一定要先开氮气,关氮气之前一定要先关高压.2.3溶剂和流动相的要求,所有的流动相都要用022m的滤膜过滤,水相要用前新配,并 不得超过两天.样品必须使用022m的滤膜过滤。样品响应值不能超过10e7.2。4 ESI离子化与溶剂密切相关,在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面:三氟乙 酸(TFA )多用于蛋白质和多肽分析,但对ESI离子化有抑制效应:三乙胺(TEA)在m/z 102处有 较强的M+H +峰,有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化,也有可能会增 强某些碱性化合物在负离子ESI条件下的响应.注意!下列的溶剂添加剂会产生严重的离子化 抑制,建议禁用:强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐(如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等)、表面 活性剂、离子对试剂。2。5定期清洗样品锥孔:关闭隔断阀,取下样品锥孔,用专用烧杯,镊子,先用甲醇:水: 甲酸(45:45: 10)的溶液超声清洗20min,然后先后用超纯水和甲醇各溶液超声清洗20分钟, 待氮吹吹干后再安装到仪器上。