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1、TNBS诱导的大鼠炎性肠病模型的建立王园园 王金凤 蔡欣徐 涛 邹民吉 刘 深刘中成 王 旻 龙民慧 王嘉玺徐东刚摘要 目的 建立2, 4, 6-三硝基苯磺酸（TNBS诱导的炎性肠病动物模型，以用于相关药物评价。方法 雄性W istar大鼠 50只随机分为T NBS造模组、对照组及正常组,各组大鼠分别用2%T NBS、 50%乙醇及生理盐水灌肠。观察各组大鼠的粪便、精神状态和进食情况，并每日 称量体重及食重。分别在造模后第3、6和14天处死大鼠,分离结肠组织,制作 病理切片，HE染色后显微镜下观察结肠组织病理变化 。结果 T NBS造模组在 造模后第1天即表现出明显的肠道稀便和血便，并持续约8
2、天；造模后体重和进食 明显下降，持续710天后缓解；造模后第3天可观察到明显的肠道病理改变，并逐 渐加重，至第6天时可见黏膜的大量炎性细胞浸润以及肠壁的透壁性坏死。造模 对照组大鼠在造模后第1天部分稀便，第2天即恢复正常，造模后第3天肠道可见 轻度病理改变。正常组大鼠一切均正常。结论 T NBS诱导的大鼠造模后表现 出明显的炎性肠病症状，可作为I B D病因及治疗药物研究的有效模型。关键词 2, 4, 6-三硝基苯磺酸炎性肠病动物模型Est ablishm en t of I nfl am ma tory Bowel D isea se M odels I n duced by 2, 4, 6
3、-Tr i n itrobe nzen esulfo n i c Ac i W ang J infeng, W ang Yua nyuan, Cai X in, et al .Institute of B asic M edical Sciences, A cade m y of M ilitary ChinaAbstract O bjecti ve To devel op a model of in flammat ory bowel in duced 6- trinitr obe nzen esulfo nic acid (T NBS . M ethods FiftyW istar rat
4、s were ran dom ly divided model and nor mal gr oup. 2%T NBS, 50%etha nol and physi ol ogical sali ne were ad m ini stered per t o of gr oup s, res pectively . Feces, p sychosis and appetite were observed, body weight and food killed after 3, 6and 14d, and the col ons were is olated and hist ol ogica
5、l findin gswere exa m the rats in the model gr oup had l oose and bl oody st ools, and the sy mp t om s las 2ted f or about 8days . eate n were markedly decreased for 7-10days . Obvi ous pathol ogical cha nges in the col on were observed on third day on sixth day, characterized by mucosal n ecr osis
6、 and trans mutable infla mmati on .1 n the mock model gr oup, the rats had l oose ools on first day, and recovered on sec ond day . L ight pathol ogical cha ngeswere found on third day . I n the nor 2mal gr oup, no pathol ogical cha nges were f ound in col on . Con clusi on Rats treated with T NBS s
7、howed obvi ous characters of infla mmat ory bowel disease, which could be used as a model in study on eti opathoge nesis and evaluati on effects of medic ines .Key words 2, 4, 6-tri nitr obe nzen esulfo nic acid; I n flammat ory bowel disease;Ani m al model作者单位：100850 北京，军事医学科学院基础医学研究所基因工程研究室通讯作者：徐东
8、刚，电子信箱:xudg nic . bm i . ac . cn;王金凤，电子信箱:jf wa 炎性肠病（infla mmat ory bowel disease, I B D 是类病因不明的慢性肠道炎症性疾病，由于具有恶变倾 向因而对患者造成非常严重的威胁，是胃肠道中除恶 变外最严重的疾病之一。IBD主要包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC 和克罗恩病（Cr ohn s dis 2 ease, CD。其发病率在欧洲和北美最高，在亚洲等地区也呈逐年上升的态势13。 I B D确切的病因和发病机制尚不清楚，可能的致病因素包括环境微生物因素、免疫因素和遗传因素46。目前，
9、通过外源化学物刺激诱导肠黏膜产生免疫反应来建立I B D模型是较常用的方法。有研究报道利用2, 4, 6-三硝基 苯磺酸（2, 4, 6-trinitrobenzenesulfonic acid , T NBS诱导的I B D模型与人类的CD相似7。本研究利用T NBS诱导建立了炎性肠病大鼠模型并对该模型进行了初步评价。材料与方法1.材料：实验动物为SPF级雄性W istar大白鼠,体重160 0g,购自军事医学科学院 动物中心。T NBS为Sig ma公司 产品,浓度5%（即50g/L ,使用前配制成2. 0%TNBS （5%T NBS 10m l +无水乙醇10m l +生理盐水5m l。
10、2.方法：将50只雄性 Wistar大鼠随机分为3组,T NBS造模组20只,对照组18只,正常组12只。实验 动物禁食24h后,用30g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,大鼠用特殊的硅胶 导管导入 距肛门约8c m的结肠内,T NBS造模组缓慢注入210%T NBS,剂量为100mg/kg体 重；乙醇对照组灌注等量？24? 论 著？ J Med Res, July 2008, Vol . 37No . 750%乙醇，正常对照组仅灌注等量生理盐水。在导入药液的时候采取头低尾 高的体位，防止灌注液体外溢，并倒提大鼠30s。造模后大鼠平躺，自然清醒，常 规饲养。每天观察大鼠的粪便性状、进食情况和精神状态
11、，并记录体重和食重。 各组大鼠分别于造模后第3、6、14天用戊巴比妥钠麻醉后处死4只，取病变明显 部位结肠组织,进行病理切片制作，HE染色后显微镜下观察。3.数据处理：数据分析结果以x 表示，所测数据用SPSS 10. 0统计软件进行 单因素方差分析的LS D检验，以P FT VR *UH i*r肠壁水肿明图2 造模后大鼠食量变化显（封三彩图7B ;第14天肠黏膜结构基本恢复完 整，坏死腺体得以修复，腺体 数量较少,腺体间有纤维 组织修复瘢痕,许多腺体内可见黏液潴留（封三彩图7C o 造模对照组大鼠除仅在第3天镜下观察可见 黏膜轻度损伤，肠壁轻度水肿浸润,（封,（、7F o讨 论炎性肠病在西方
12、国家相当常见，尽管在亚洲国家 的发病率低于西方，但近10 年亦呈上升趋势。国内由于过去一直认为本病少见而重视不够，但近年据报道也 已经超过2万人，并且新病例还在不断发现。IBD病因和确切的发病机制至今尚 不清楚，治疗亦颇为棘手。理想的动物模型是进行病理、病因及相关治疗药物 研究不可缺少的工具。目前，T NBS诱导的大 鼠肠损伤模型已广泛用于人类各种 肠道病变发病机 制的研究812。 T NBS是一种弱有机酸,属于半抗 原,单独在 体内不能诱导免疫应答，只有在与组织蛋白等高分子物质结合后才能诱发免疫反 应，因此造模 时需用乙醇作为肠黏膜屏障的破坏剂，使得T NBS与肠黏膜角蛋白 结合成全抗原,从
13、而激发局部免疫反 应。T NBS造成的肠损伤与人类的CD在发 病机制、病理特点及临床表现等方面相似，其典型特征是结肠发生透壁性坏死和 广泛的炎性细胞浸润，并且伴随着 体重的持续下降7,13。以往有文献报道采用较 大剂量的T NBS诱导的炎性肠病模型，虽然模型制备成功 但病死率较高，约为 40%14。本研究采用较文献报 道剂量稍有降低的2%T NBS按100mg/kg体重对大 鼠进行灌肠，从实验结果中可以看到T NBS造模组在 造模后体重持续下降，直至 第10天才恢复至造模前 水平，病理切片观察在造模后第6天也发现肠壁坏死? 3 4?医学研究杂志2008年7月第37卷 第7期？论 著？并深达肌层
14、，炎性细胞浸润肠壁全层，这些都是典型的 炎性肠病特征，表明该方法制备炎性肠病模型是成功 的，并且采用上述方法造模使模型动物的病死率得到 显著控制，为15%。从本实验造模大鼠结肠组织的病理变化观察中我 们发现，T NBS造模后第3天就表现出明显的肠道损伤,并且在造模后第6天病理改变达到高峰，此后病理改变开始逐渐减轻。因此，T NBS造模后短期内可用于急性炎症性损伤的研究。此方法制备炎性肠病模型，周期短，方法简便，可作为研究人类炎性肠病发病机制及相关药物研发的理想模型。参考文献1 Zhon gW. Che mok ines orchestrate leukocyte trafficki ng in infla mmat orybowel diseaseJ .Fr o nt B i osci, 2008, 13:1654
