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1、临床检验方法学评价目前,临床实验室中所使用的检验方法,多为常规分析方法,一 般使用商品试剂,基本上可以满足临床检验的要求。由于作为常规分 析方法的商品试剂种类繁多,其检验结果的质量也不相同,因此,临 床实验室在建立新的检验方法时,应对该方法的基本性能进行评价, 以掌握方法的特征,判断其能否满足使用要求。在选择方法并对其进 行评价时,可主要考虑以下几个方面:检验结果的可溯源性检验结果的准确性,是临床医生对疾病进行诊断和治疗的重要依 据。在临床实验室中如何确保检验结果的准确, 是每个检验人员必须 关心的问题。通常,在检验过程中使用可溯源性校准品是保证检验结 果准确性的前提,而参加室间质评价活动,可
2、以发现实验室结果准确 性的偏倚。检验方法学分类包括:决定性方法(definitive method ): 经详尽研究尚未发现 不 准确度或不确定性原因的方法;参考方法(referenee method): 经详尽研究证实其 不准确度与不精密 度可以忽略的方法;常规方法(routine method):可满足临床或 其他目的需要的日常使用的方法。标准物质又称参考物质(refere nee material ),是一类充分均 匀,并具有一个(或多个)确定的特性值的材料或物质,用以校准仪器设备、评价测量方法,或给其它物质赋值。标准物质的定值结果一 般表示为:标准值士总不确定度。“标准物质证书是介绍标
3、准物 质的技术文件,是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明。附有证书的标准物质称为有证标准物质(certified refere nee material,CRM ),其特性值由建立了溯源性的程序确定,使可溯源至准确复 现的表示该特性值的计量单位,且每个标准值都附有给定置信水平的 不确定度。一级标准物质( primary referenee material ):稳定、均 一,采用高度准确、可靠的若干方法定值,可用于校准决定性方法及为二 级标准物质定值。在我国,一级标准物质是测量准确度达到国内最高 水平的有证标准物质,由国家技术监督局批准、颁布并授权生产。女口: 人血清无机成分分析标准物质
4、(GBW09135 )和血清胆固醇标准物 质(GBW 09138 )。二级标准物质( sec on dary refere nee material):用一级标准物 质校准,参考方法定值。女口:红细胞微粒标准物质 一GBW ( E ) 090001、胆红素标准物质 一GBW ( E )090002、氰化高铁血红蛋白溶液标准物质 一GBW ( E )090004和纯化血红蛋白标准物质 一GBW ( E )090011。校准物(calibrator ):用二级标准物质校准,常规方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。质控物(control material ):具有与检测过程相适应的特性, 其成份与
5、检测样本的基质相同或相似。应使用充分均一和稳定的质 控物,其瓶间变异 必须小于监测系统预期的变异,其常规检测应有 助于确认报告范围。为了保证质控方法对系统性能提供独立的评 价,必须将 质控物与 校准物区分开来。分析系统与可溯源性:分析系统是指检验方法所涉及的仪器、试 剂、参数和校准品,其检验结果经一系列合理实验的验证能够满足厂 家声明的要求,其量值能够溯源到高级标准物质。在实际工作中,实 验室使用分析系统进行检验,其检验结果具有可溯源性。改变分析系 统中的任一因素,其检验结果的可溯源性将被打断。 如果必须改变分 析系统中的某种因素,实验室在应用该方法前,则应对改变后的系统 作出 适当的性能评价
6、,以确定方法准确性的偏倚和检验结果的可溯 源性。精密度评价1、精密度的内容:精密度通常用 不 精密度表示,精密度评价的目 的是评价检测设备的总不精密度,是设备在一定时间内的变异性。许 多变异源可在不同程度上影响设备的精密度, 通常在进行精密度评价 时要充分考虑所有影响总不精密度的来源, 但不必去评价每个来源的 相对大小。用于描述与时间相关的 不 精密度的内容包括:批内、批 间、日内和 日间 不 精密度。其中,批内 不 精密度和总不精密度 的内容最为重要。2、一般实验要求:为减少对结果的影响因素,全部实验过程中应使 用单一批号的试剂和校准物。实验样本可采用稳定化、蛋白基质、可 模拟临床样本特性的
7、产品,必要时,可采用稳定化的混合冷冻血清。选择样本浓度时应考虑医学决定水平,推荐使用2个或以上浓度的样本。3、实验程序:精密度评价实验应在操作者完全熟悉实验过程和评价 方案以后(通常需要5天时间)进行。每天分2批测定样本,各批 实验间至少间隔2小时。每批测定2个浓度样本,每个样本重复测 定2次。按表1记录实验结果。4、结果计算(略)测定线性范围评价线性是分析方法的一个特征,不同于准确度和精密度。线性范围(Lin ear Ra nge )是指系统最终的输出值(浓度或活性)与被分 析物的浓度或活性成比例的范围。线性范围的测量即测定浓度曲线接 近直线的程度,它反映整个系统的输出特性 。线性检验系统反
8、应, 包括校准、线性化技术、系数和仪器反应。一般要求: 执行分析过程的实验人员必须掌握仪器操作和维护 程序、样本准备方法和校准。对较简单的设备需要5天或更少的时间,对较复杂的多通道设备需要 5天或更长的时间。在完成仪器熟 悉过程后开始实验并收集数据。实验样本:线性实验应使用与病人样本相似的样本或注明样本的基质类型,最少使用4个浓度水平,推荐5个水平。高值样本应 高于线性上限30%,低值样本应低 于线性低限。线性实验可使用 的样本包括:混合病人血清(理想的样本基质)、加入待测物的混合人血清(加入品在没有干扰物存在时不需高纯度)、对特殊材料透析过的混合人血清(用于降低分析物浓度,如:透析、热处 理
9、、层析)、对盐水透析过的 混合血清(在线性实验中使用此类 样本可掩盖不同的基质效应)。商品 质控物或 校准物(此类样本 由于不是正常的生理形式,可掩盖实际的线性结果)、水溶液(一般无基质效应),等。实验程序: 全部实验和数据采集应在同一工作日内完成。分析 序列应为随机排列。有显著携带污染时,应用空白隔开样本。每个浓 度样本重复测定4次。记录测定结果。结果分析:观察结果有无明显的数据错误,若有明显异常时,应判断是否为离群点。对于特定浓度Yi值的离群点进行检验时,需 将其4个重复值从大到小排列(Yi -1到Yi -4)。计算极差D = Y i-1 - Y i-4。若 Y i-1 可能是离群点,计算
10、:D 1 = ( Y i-1 i-2 ) / D。若Y i-4可能是离群点,计算:D 4 = ( Y i-3 i-4 ) / D。 计算结果(D 1或D 4 )如果大于 0.765 (0.05)或0.889 (0.01), 则该点判为离群点。全部数据中的 离群点如果有2点或以上,则应 保留全部数据或重新进行实验。以分析物浓度为X轴,反应值或仪器输出值为 Y轴,绘制X-Y线性图。目测线性和进行统计学分析,判断是否符合要求。对于线性结果的分析,应当注意统计学标准和临床可接受限不 同;应慎用方法学线性范围从 0开始;有临床意义的浓度应在线性 评价中,如最低线性浓度、医学决定水平及最高线性浓度。方法学
11、比较临床实验室中使用的检验方法,随着科学技术的发展不断更新, 在引进新方法前或用一种方法替代另一种方法时为保证临床实验室 检验结果的连续性,通常要进行偏差分析,以比较不同的分析方法在 测定同一分析项目时结果的差异。1、样本要求:用于方法学对比实验的样本,应 来源于健康人或患 者,无明显干扰因素,并应尽量避免使用贮存样本。全部 样本 在 医 学决定水平范围内均匀分布,样本至少 40例,增加可提高可信性。2、对比方法: 可采用厂家要求的实验室常规方法或公认的参考方 法。对比方法应具有好的精密度,没有已知的干扰物,与评价方法单 位相同,相对国家标准或参考方法的偏差为已知。3、实验程序:a)操作者应有
12、足够的时间熟悉仪器操作 ,保养程序及 评价方案。 在全部实验过程中,都必须建立适当的质量控制程序。b) 进行方法学对比实验,每天应测定 8份样本,每份样本都用评价 方法和对比方法进行双份测定,至少连续测定5天,共40份样本。 测定时先对样本排序,再按顺序 1至8测定第一次,顺序8至1 测定第二次。按表3收集实验数据c) 结果绘图:实验结果可绘制4张图,第一张图是Yi对X i的均 值散点图,第二张图为 Y j对X i散点图,第三张为(Y i -X i) 对X i偏差图,第四张为(Y ij -X j )对X i的偏差图。常用的与方法 学评价 有关的文件如下:EP5-A :临床化学设备操作精密度评价
13、核准指南(Evaluation ofPrecisi on Performa nee of Cli nical Chemistry Devices; ApprovedGuideline)用于 临床化学设备操作精密度评价的实验设计及如何与 生产厂声明的精密度进行比较。EP6-P2 :定量分析方法的线性评价:统计方法,提议指南第二版(Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods: A Statistical Approach; Proposed Guideli ne Second Editi on): 指南可用 于在法评
14、价过程中检验方法线性、作为常规质量保证的一部分进行线 性检查及验证厂家声明的线性范围。EP7-P :临床化学实验干扰提议指南(In terfere nee Testi ng inClinical Chemistry; Proposed Guideline )提供背景信息和 监定 程序, 用于干扰物对检验结果影响的定性。EP9-A :用病人样本进行方法 学比较 和偏倚评估,核准批南( Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline )。主要用于检验两种临床方法或设备间的偏倚, 和使用病人
15、样本进行方法比较的实验设计及数据分析。EP10-A :定量临床实验室方法的初步评价,核准指南(PreliminaryEvaluati on of Quan titative Cli nical Laboratory Methods; ApprovedGuideline ):提供了用于分析方法和设备操作的初步评价的实验设计和数据分析。EP11-P :用于体外诊断检验说明的统一描述,提议指南(UniformDescription of Claims For In Vitro Diagnostic Tests; ProposedGuideline)EP12-P :用于定性实验评价的用户协议,提议指南
16、(User Protocolfor Evaluatio n of Qualitative Test Performa nee; Proposed Guideli ne)EP13-R :头验至统计一标准差,报告(Laboratory Statistics Stan dard Deviati on; A Report)EP14-A :基质效应的评价,核准指南(Evaluation of Matrix Effects;Approved Guideline )EP15-A:精密度和准确度性能的应用,核准指南(UserDem on stratio n of Performa nee for Precisi on and Accu