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1、荧光原位杂交技术1974年 Evans 首次将染色体显带技术和染色体原位杂交联合应用，提高了 定位的准确性。20 世纪70 年代后期人们开始探讨荧光标记的原位杂交，即 FISH 技术。1981年Harper成功地将单拷贝的DNA序列定位到G显带标本上，标志 着染色体定位技术取得了重要进展。 20世纪90年代，随着人类基因组计划的进 行，由于绘制高分辨人类基因组图谱的需要，FISH技术得到了迅速的发展和广 泛应用。1原理FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技 术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶D
2、NA与所用 的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探 针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可 利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体 系在镜下对待测 DNA 进行定性、定量或相对定位分析。2实验流程FISH样本的制备T探针的制备T探针标记T杂交T染色体显带T荧光显微 镜检测T结果分析。3特点原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用同位素 标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高，可以通过延长曝光时间加强 信号强度，故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空
3、间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等。采用荧光标记系统则可克服这些不足， 这就是FISH技术。FISH技术作为非放射性检测体系，具有以下优点：1、荧光试 剂和探针经济、安全；2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；3、实验周期 短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；4、FISH可定位长度在lkb的DNA 序列，其灵敏度与放射性探针相当；5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的 颜色可同时检测多种序列； 6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变 化，也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。缺点：不能达到100%杂交，特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。4应用该技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位，而且也可用于未克隆基因 或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究 中颇具优势。
