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1、太行菊的抗氧化活性试验方案1. 实验内容对太行菊的甲醇提取物的乙醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水 共六种萃取物进行总酚、总黄酮含量的测定，分析实验结果，选择总分和总黄酮 含量比拟高的两个层分进行抗氧化能力测定，分析其抗氧化能力强弱，判断其有 无研究价值。用Folin-Denis法测定太行菊甲醇提取物各萃取层组分的总酚含量，以没食子酸作为标准品进行对照。用三氯化铝法测定太行菊各萃取层组分的总黄酮含量， 以榔皮素作为标准品进行对照。根据实验结果，选择总酚和总黄酮含量较高的萃 取层组分进行抗氧化能力测定，包括DPPH自由基活除能力测定，羟基自由基活 除能力测定，复原能力测定。2. 实验步骤
2、将太行菊用甲醇溶液回流提取其有效成分，旋转浓缩后用水溶解，然后分别用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取、水层，得相应层的僻分。2.1总酚含量测定：在试管中分别参加不同层样品1mg/ml 0,25ml +Folin-Denis 试剂0.5ml , 5 min后，再参加 W2CO3饱和溶液0.5ml,并做三组重复。对照组 中样品和Folin-Denis试剂用DW代替，其他不变。空白组中Folin-Denis试剂用 DW代替，其他不变。在760nm紫外光下测定吸光度。对实验结果处理后做标准曲线，以没食子酸为标准品。以没食子酸的微克数表示总酚含量：吸光度=0.0069 g没食子酸一0.042。Fo
3、lin-Denis试剂的配制：在2L烧瓶中参加750ml蒸僻水，再参加100g鸨酸钠 和20g磷钳酸，再参加50ml正磷酸回流2h,冷却后装入1L容器内置于暗处实验组*3 :体积Folin-Denis 的体积Na2CO3MEOH 层0.25ml0.5ml0.5mlH层0.25ml0.5ml0.5mlCH层0.25ml0.5ml0.5mlEA层0.25ml0.5ml0.5mlBUOH 层0.25ml0.5ml0.5mlW层 1对照组*3 :DWDWNa?CO3体积 0.25ml0.5ml0.5ml空白组*3体积DW的体积N&CO3MEOH 层0.25ml0.5ml0.5 mlH层0.25ml0.
4、5ml0.5 mlCH层0.25ml0.5ml0.5mlEA层0.25ml0.5ml0.5mlBUOH 层0.25ml0.5ml0.5 mlW层0.25ml0.5ml0.5ml2.2总黄酮含量测定：在试管中分别参加不同层样品(1mg/ml) 0.5ml + 1MCH3COOK 溶液 0.1ml+ DW 2.8ml+95% 乙醇 1.5ml+10%AlCl 3 - 6H2O溶液0.1ml,并做三组重复。对照组中样品和 AlCl 3 - 6H2O溶液用 DW代替，其他不变。空白组中 AlCl 3 - 6H2O溶液用DW代替，其他不变。所 配溶液在室温下放置40分钟后在510nm紫外光下测定吸光度。
5、对实验结果处理后做标准曲线，以梅I皮素为标准品。以榔皮素的微克数表示总黄酮含量：吸光度=0.0066 g榔皮素一0.0357。实验组*3 :体积CH3COOKDW95%乙醇AlCl 3 - 6H2OMEOH 层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlH层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlCH层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlEA层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlBUOH 层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlW层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1ml对照组*3 :DWCH3COOKDW95%乙醇
6、DW体积 0.5ml0.1ml2.8ml1.5ml0.1ml空白组*3:体积CH3COOKDW95%乙醇DWMEOH 层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlH层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlCH层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlEA层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlBUOH 层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1mlW层0.5ml0.1ml2.8 ml1.5ml0.1ml根据实验结果选择总酚和总黄酮含量较高的组分进行DPPH自由基活除能力测定、羟基自由基活除能力、复原能力的测定。2.3DPPH 1,1-二
7、苯基苦基苯脱自由基自由基活除能力的测定将总酚和总黄酮含量较高的两组样品配制成：1 I g/mL 5 I g/mL 10从g/mL50 小 g/mL 100 小 g/mL5浓度对照组：0.5mL 0.2mmol/L的DPPH甲醇溶液+ 0.5mL试样溶剂水，测试组：0.5mL 0.2mmol/L的DPPH甲醇溶液+0.5mL待测样品溶液，空白组：0.5mL样品溶液+0.5mL试样溶剂水，混合均匀后室温下于暗处静置30 min,然后在517 nm处测定吸光度。由下面的方程计算样品对DPPH自由基的活除能力：消除效率% =1-Ai-Aj/Ao X 100%2.4羟基自由基活除能力测定：抗氧化能力是用
8、Fe3+的螯合物如Fe-EDTA存在 下的Fenton型Haber-Weiss反响产生H0-来测定的。将总酚和总黄酮含量较高的 两组样品 配制成：1 g/mL 5 g/mL 10 g/mL 50 g/mL 100 g/mL亦浓度 试管中依次参加100从L的FeSQ 7H2O、EDTA、2-脱氧核糖、100 L各浓度的样品溶液对照组参加100 L样品溶剂水、500 L磷酸缓冲溶液，10011 L H2O2于试管中，于37 C水浴加热4小时。然后参加三氯乙酸TCA、二硫代巴比妥酸TBA各500 L。之后将它们放在100。叵温水浴锅中，冷却，3000 rpm,离心5分钟。最后分别测定各样品在 532
9、 nm下的吸光度，每个样品的每个浓度重复3次。然后根据实验结果计算消除效率消除效率% = 1-As/Ao X100%其中：As为待测溶液的吸光度Ao为对照组溶液的吸光度2.5复原能力测定将总酚和总黄酮含量较高的两组样品 配制成50、100、200、500、1000 g/mL 分别移取各浓度的样品1 mL于试管中参加磷酸盐缓冲液pH=6.6 2.5 mL ,再加 入1%铁割化钾溶液2.5 mL,在50 C下反响30 min。然后参加10%三氯乙酸溶 液2.5 mL充分混和均匀，3000 rpm下离心10 min。移取上活液2.5 mL于试管 中，参加2.5 mL蒸僻水，再参加0.1 %三氯化铁0.5 mL,常温下反响5 min,然 后使用紫外可见分光光度计于 700 nm波长下测定吸光值。同时 做空白对照组， 不加样品，参加1 mL蒸僻水。每组实验重复3次。
